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原文传递荆芥的特征图谱构建方法和质量检测方法

专利名称：	荆芥的特征图谱构建方法和质量检测方法
摘要：	本发明涉及中药检测技术领域，具体涉及荆芥的特征图谱构建方法和质量检测方法，通过对液相色谱条件、流动相组成及洗脱程序的控制，建立了荆芥非挥发性成分特征图谱；通过选择合适的气相色谱条件，建立了荆芥挥发性成分特征图谱；并标记特征图谱的特征峰；通过对液相色谱洗脱程序的调整对荆芥中的橙皮苷含量进行测定；同时，建立了荆芥的质量控制方法，包括利用前述荆芥特征图谱对荆芥进行评价，并测定橙皮苷的含量，还包括薄层色谱法鉴别、重金属及有害元素检查、农药残留量测定、浸出物测定，从有效性和安全性角度对荆芥进行质量评价，该质量检测方法具有简单快速、稳定可靠、精密度高、重现性好、易于掌握等优点。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	北京中研同仁堂医药研发有限公司
发明人：	迟玉明;姚璐;王淑英;储兆铮;李铮;颜士华
专利状态：	有效
申请日期：	2018-12-29T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-17T00:00:00+0800
申请号：	CN201811646360.3
公开号：	CN109765322A
代理机构：	北京三聚阳光知识产权代理有限公司
代理人：	李静
分类号：	G01N30/06(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	100079 北京市丰台区南三环中路20号
主权项：	1.一种荆芥特征图谱的构建方法，其特征在于，包括非挥发性成分特征图谱的构建方法和挥发性成分特征图谱的构建方法： A、所述非挥发性成分特征图谱的构建方法，包括如下步骤：供试品溶液I的制备：取荆芥供试样品制备供试品溶液Ⅰ；参照物溶液I的制备：取荆芥对照药材制备对照药材参照物溶液I；取橙皮苷对照品制备对照品参照物溶液I；色谱条件与系统适用性试验：照高效液相色谱法测定，以十八烷基键合硅胶为色谱柱填充剂；以乙腈为流动相A，以体积分数为0.2％的磷酸水溶液为流动相B进行洗脱；测定法：分别精密吸取参照物溶液I与供试品溶液I，注入液相色谱仪，测定，即得；和 B、所述挥发性成分特征图谱的构建方法，包括如下步骤：供试品溶液II的制备：取由荆芥供试样品制备的挥发油，制备供试品溶液II；参照物溶液II的制备：取胡薄荷酮和薄荷酮分别制备对照品的参照物溶液II；色谱条件与系统适用性试验：照气相色谱法测定，以N2为载气，以PEG为固定相，控制进样口温度、检测器温度、柱温和流速；测定法：分别精密吸取参照物溶液II与供试品溶液II，注入气相色谱仪，测定，即得。 2.根据权利要求1所述的荆芥特征图谱的构建方法，其特征在于，还包括对照特征图谱的构建，利用国家药典委员会的中药色谱指纹图谱相似度评价系统，对得到的至少15批供试品溶液I特征图谱进行分析，生成非挥发性成分对照特征图谱；和/或利用国家药典委员会的中药色谱指纹图谱相似度评价系统，对得到的至少15批供试品溶液II的气相特征图谱进行分析，生成挥发性成分对照特征图谱。 3.根据权利要求1或2所述的构建方法，其特征在于，所述非挥发性成分特征图谱包括6个特征峰，特征峰为：1号峰为橙皮苷，2号峰为迷迭香酸，3号峰、4号峰、5号峰为共有特征峰，6号峰为胡薄荷酮；和/或所述挥发性成分特征图谱包括3个特征峰，特征峰为：1号峰为薄荷酮，2号峰为胡薄荷酮，3号峰为共有特征峰。 4.根据权利要求1-3任一项所述的荆芥特征图谱的构建方法，其特征在于，在所述非挥发性成分特征图谱的构建方法中，洗脱方式选择梯度洗脱方式，梯度洗脱程序为：0-15min，流动相A：流动相B的体积比为8-12％：92-88％→12-16％：88-84％；15-40min，流动相A：流动相B的体积比为12-16％：88-84％→24-28％：76-72％；40-55min，流动相A：流动相B的体积比为24-28％：76-72％→58-62％：42-38％；55-60min，流动相A：流动相B的体积比为58-62％：42-38％→83-87％：17-13％；60-65min，流动相A：流动相B的体积比为83-87％：17-13％→83-87％：17-13％；优选的，所述梯度洗脱程序为：0-15min，流动相A：流动相B的体积比为10％：90％→14％：86％；15-40min，流动相A：流动相B的体积比为14％：86％→26％：74％；40-55min，流动相A：流动相B的体积比为26％：74％→60％：40％；55-60min，流动相A：流动相B的体积比为60％：40％→85％：15％；60-65min，流动相A：流动相B的体积比为85％：15％→85％：15％；优选的，色谱条件为：柱温为25-40℃；流速为0.8-1.2ml/min；检测波长为278-288nm；优选的，色谱条件为：柱温为40℃；流速为1ml/min；检测波长为283nm。 5.根据权利要求1-4任一项所述的荆芥特征图谱的构建方法，其特征在于，在所述挥发性成分特征图谱的构建方法中，控制柱温呈梯度升温，所述梯度升温程序为：初始温度为55-65℃，保持1-3min；温度从55-65℃升至115-125℃，然后保持4-6min，升温速率为1.5-2.5℃/min；温度从115-125℃升至155-165℃，升温速率为2.5-3.5℃/min；温度从155-165℃升至235-245℃，升温速率为4.5-5.5℃/min；优选的，所述梯度升温程序为：初始温度为60℃，保持2min；温度从60℃升至120℃，保持5min，升温速率为2℃/min；温度从120℃升至160℃，升温速率为3℃/min；温度从160℃升至240℃，升温速率为5℃/min；优选的，进样口温度为245-255℃，检测器温度为245-255℃，总流量3.5-3.9ml/min；优选的，进样口温度为250℃，检测器温度为250℃，总流量3.7ml/min。 6.根据权利要求1-5任一项所述的荆芥特征图谱的构建方法，其特征在于，所述供试品溶液Ⅰ或对照药材参照物溶液I的制备方法包括：取荆芥供试样品或荆芥对照药材制成粉末，精密称取0.5-1g，加溶剂15-30ml，密塞，进行提取处理，放冷，用所述溶剂补足减失的重量，摇匀，取上清液滤过，取续滤液，即得供试品溶液Ⅰ或对照药材参照物溶液I；优选的，所述对照品参照物溶液I的制备方法包括：取橙皮苷对照品加所述溶剂溶解制成含55-65μg/ml橙皮苷的对照品参照物溶液I；优选的，所述供试样品选自荆芥原药材或者荆芥饮片；优选的，所述溶剂为甲醇、乙醇或水；优选的，所述提取处理采用超声30-90min、回流30-120min或者浸渍12-24h；优选的，所述对照品参照物溶液I为含60μg/ml橙皮苷的对照品参照物溶液I。 7.根据权利要求1-6任一项所述的荆芥特征图谱的构建方法，其特征在于，所述参照物溶液II为含有3-6mg/ml胡薄荷酮和3-6mg/ml薄荷酮的对照品溶液，其溶剂为乙酸乙酯；所述供试药材溶液Ⅱ制备方法包括：取荆芥供试样品，采用《中华人民共和国药典》2015年版四部通则2204挥发油测定的甲法制得挥发油，精密吸取25-50ul，加乙酸乙酯定容至2ml，除水干燥即得。 8.一种荆芥质量检测方法，其特征在于，包括采用权利要求1-7任一项所述的荆芥特征图谱构建方法对荆芥产品进行质量检测。 9.根据权利要求8所述的荆芥质量检测方法，其特征在于，按照权利要求1-7任一项所述的荆芥特征图谱构建方法同法操作检测待测荆芥产品，得到的荆芥非挥发性成分特征图谱和荆芥挥发性成分特征图谱，所述非挥发性特征图谱呈现6个特征峰，并应与对照药材参照物特征图谱中的6个特征峰相对应，其中峰1、峰6应与对照品参照物峰保留时间相一致；所述挥发性成分特征图谱呈现3个特征峰，其中峰1、峰2应与对照品参照物峰保留时间相一致。 10.根据权利要求8或9所述的荆芥质量检测方法，其特征在于，还包括对荆芥进行含量测定的步骤，包括如下步骤：供试品溶液III：取荆芥供试样品制备供试品溶液III；对照品溶液：取橙皮苷对照品溶于溶剂，制备对照品溶液；色谱条件与系统适用性试验：照高效液相色谱法测定，以十八烷基键合硅胶为色谱柱填充剂；以乙腈为流动相A，以体积分数为0.2％的磷酸水溶液为流动相B进行梯度洗脱，按照以下程序进行梯度洗脱：0-28min，流动相A：流动相B的体积比为17-19％：83-81％→17-19％：83-81％；28-29min，流动相A：流动相B的体积比为17-19％：83-81％→84-86％：16-14％；29-39min，流动相A：流动相B的体积比为84-86％：16-14％→84-86％：16-14％；柱温为25-35℃；流速为0.8-1.2ml/min；检测波长为278-288nm；理论板数按橙皮苷计不低于3000；测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液III，注入液相色谱仪，测定，即得。 11.根据权利要求8-10任一项所述的荆芥质量检测方法，其特征在于，还包括薄层色谱法鉴别的步骤、重金属及有害元素测定的步骤和/或浸出物测定的步骤： C、所述非挥发性成分薄层色谱法鉴别步骤，包括如下步骤：分别取荆芥供试样品的粗粉和荆芥对照药材粗粉0.5-1.0g，加乙酸乙酯15-25ml，超声处理15-25分钟，滤过，滤液挥至1ml，作为供试品溶液Ⅳ和对照药材溶液，然后各吸取1-5ul，分别点于同一薄层板上，于展开剂中展开，取出，晾干，置波长为361nm-371nm的紫外光下检视；优选的，所述薄层板选用硅胶G板或H板；优选的，所述展开剂选用三氯甲烷-乙酸乙酯-冰醋酸混合溶液，其体积比为(9-11):1:(0.3-0.8)；和/或 D、所述挥发性成分薄层色谱法鉴别步骤，包括如下步骤：取荆芥供试样品粗粉适量，照挥发油测定法《中华人民共和国药典2015年版四部通则2204》测定，分取挥发油0.1～0.3ml，加乙酸乙酯稀释至1.5～4.5ml，作为供试品溶液Ⅴ。另取(-)-薄荷酮、胡薄荷酮对照品，加乙酸乙酯制成每1ml含5～30mg的溶液，作为对照品溶液。各吸取1-5ul，分别点于同一薄层板上，于展开剂中展开，取出，晾干，喷以2％～8％香草醛硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；优选的，所述薄层板选用硅胶G板或H板；优选的，所述展开剂选用石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯，其体积比为(11-13):1；和/或； E、所述重金属及有害元素的测定包括重金属铅、镉、砷、汞、铜的含量测定，包括如下步骤：所述农药残留量测定包括总六六六、总滴滴涕和五氯硝基苯的含量测定；和/或 F、所述浸出物测定的步骤包括：所述浸出物测定操作步骤为：取荆芥供试药材粗粉2-5g，精密称定，置250～300ml的锥形瓶中，精密加溶剂100ml，密塞，冷浸，前6小时内时时振摇，再静置18小时，用干燥滤器迅速滤过，精密量取续滤液20ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小时，置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量，以干燥品计算供试品中浸出物的含量(％)；其中，溶剂为乙醇，体积比分数为50-90％。
所属类别：	发明专利