详情

原文传递一种人血清25-羟基维生素D的检测方法及试剂盒

专利名称：	一种人血清25-羟基维生素D的检测方法及试剂盒
摘要：	本发明提供了一种检测人血清中25‑羟基维生素D(25OHD)的检测方法及试剂盒，包括以下步骤：血清样品与氢氧化钠水溶液混匀，进行超滤离心后，在超滤液中加入25‑羟基维生素D的同位素内标溶液，充分混匀后，加入甲基叔丁基醚溶剂后进行涡旋震荡萃取；离心后，取上清液并进行氮气吹干，复溶后得到待测样品，而后进行检测，本发明检测方法前处理简单，特异性和抗基质干扰能力强，检测精密度和准确度高，检测灵敏度高。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	上海;31
申请人：	上海润达榕嘉生物科技有限公司
发明人：	钱学庆;秦炜;吴小虎;贺笑非
专利状态：	有效
申请日期：	2019-03-20T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-21T00:00:00+0800
申请号：	CN201910212454.8
公开号：	CN109781909A
代理机构：	上海领洋专利代理事务所(普通合伙)
代理人：	罗晓鹏
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	200233 上海市徐汇区桂平路481号16号楼5晨
主权项：	1.一种人血清25-羟基维生素D的检测方法，其特征在于，包括以下步骤： 1)将人血清样本与0.5-1.5mol/L氢氧化钠水溶液混合，混匀后进行超滤离心得到超滤液； 2)将步骤1)超滤液加入25-羟基维生素D同位素内标溶液，二者体积比为8-20:1，混匀后加入甲基叔丁基醚，混匀后离心取上清液； 3)将步骤2)所述上清液进行氮气吹干，加入复溶液，混匀得到待测样品； 4)将步骤3)所述待测样品进行高效液相色谱串联质谱检测，得到人血清25-羟基维生素D的检测结果，与校准品建立的标准曲线进行比对，得到相关含量。 2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤1)中氢氧化钠溶液浓度为1mol/L，人血清样本与所述氢氧化钠水溶液的体积比为20-30:1。 3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤1)中所述超滤方法中超滤膜为cutoff 3kDa，25℃，1800g，离心时间20-40min。 4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤2)所述25-羟基维生素D的同位素内标是浓度为1μg/mL的d6-25-羟基维生素D3的甲醇水溶液。 5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述甲醇水溶液的甲醇与水体积比为2-10:1。 6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述复溶液为甲醇水溶液，甲醇与水体积比为2-10:1。 7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱条件：高效液相色谱采用梯度洗脱模式，液相色谱条件为：色谱柱Phenomenex Kinetex C18 Column4.6x50mm,2.6μm, 色谱柱柱温25℃；进样量30μL；流速1.0mL/min；流动相流动相A为含0.2％甲酸的水，流动相B为含0.2％甲酸的甲醇；所述梯度洗脱的条件如下：时间流速A流动相B流动相所述质谱检测为正离子模式，并采用多反应监测MRM的扫描方式，所述多反应监测MRM的参数如下，电离源为大气压化学电离APCI源；喷雾气压力为60psi，温度为550℃，电晕针电流为5μA，气帘气为30psi，碰撞气为5psi。 8.一种应用权利要求1所述检测方法的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括校准品、质控品、同位素内标溶液、浓度为1mol/L氢氧化钠水溶液、甲基叔丁基醚、0.2％的甲酸水溶液、0.2％的甲酸甲醇溶液、80％甲醇水溶液。 9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述校准品为25-羟基维生素D2和25-羟基维生素D3的5种浓度依次都为5、10、25、50、100ng/mL的牛血清白蛋白水溶液，所述牛血清白蛋白的质量分数5％。 10.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述质控品为25-羟基维生素D2和25-羟基维生素D3的2种浓度分别依次为7.5、15和15、30ng/mL的牛血清白蛋白水溶液，所述牛血清白蛋白的质量分数5％。
所属类别：	发明专利