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原文传递富集循环稀有细胞的试剂及方法

专利名称：	富集循环稀有细胞的试剂及方法
摘要：	本发明涉及富集循环稀有细胞(CRC)的试剂及方法。本发明揭示了一种利用优选的CD标志物组合对血液中白细胞进行分离、从而富集CRC的方法，该方法为负向分选方法。本发明的方法可大幅度地提高细胞的识别准确度，实现高纯度CRC分选的突破，获得的样本更有利于直接应用于进行后续的基因组分析。同时，本发明还提供了应用于该方法的微流体检测装置。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	河南;41
申请人：	河南乾坤科技有限公司
发明人：	杨国华
专利状态：	有效
申请日期：	2017-11-14T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-21T00:00:00+0800
申请号：	CN201711121110.3
公开号：	CN109781975A
代理机构：	上海专利商标事务所有限公司
代理人：	陈静
分类号：	G01N33/533(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	450044 河南省郑州市金水区徐庄路97号牛顿国际B栋6楼
主权项：	1.一种从血液样品中富集循环稀有细胞的方法，其特征在于，所述方法包括：从血液样品中分离去除红细胞；应用携带可识别信号的抗体标记血液样品中的白细胞，应用荧光染料标记有核细胞；通过可鉴别可识别信号以及荧光染料的装置检测细胞，并分离出无白细胞标记的有核细胞，最终获得富集的循环稀有细胞。 2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的抗体包括：抗CD45抗体；较佳地，所述的抗体是抗体组合，包括：抗CD45抗体、CD14抗体、抗CD55抗体、抗CD66b抗体、抗CD90抗体、抗CD33抗体和抗CD36抗体。 3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的可鉴别可识别信号以及荧光染料的装置是微流体检测装置，包括：微流体结构(7)，其包括单细胞通道(11)，允许单细胞以稳定的流速通过，并存在多条单细胞通道以允许单细胞的分流；荧光检测组件(5)，根据不同的荧光信号对每个细胞进行甄别，快速确认其身份，判断是否在下一步对其进行分选；微射流发生器(6)，其包括微型金属导体，接受荧光检测组件(5)的分选信号、引发微热泡。 4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的可识别信号包括：FITC，PE、APC、Rhodamine B、Alexa 555；较佳地为FITC。 5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的荧光染料包括：DAPI或hoechst；较佳地为DAPI。 6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的分离去除红细胞的方法是裂解液裂解或密度梯度离心；或通过应用携带可识别信号的抗体处理血液样本，从中分离去除红细胞；较佳地，应用于分离去除红细胞的可识别信号不同于应用于去除白细胞的可识别信号。 7.抗体的用途，用于从血液样品中富集循环稀有细胞时，从样品中分离去除白细胞；所述的抗体包括抗CD45抗体；较佳地，所述的抗体是抗体组合，包括：抗CD14抗体，抗CD55抗体，抗CD66b抗体，抗CD90抗体，抗CD33抗体和抗CD36抗体。 8.一种微流体检测装置，其特征在于，所述的微流体检测装置包括：微流体结构(7)，其包括单细胞通道(11)，允许单细胞以稳定的流速通过，并存在多条单细胞通道以允许单细胞的分流；荧光检测组件(5)，根据不同的荧光信号对每个细胞进行甄别，快速确认其身份，判断是否在下一步对其进行分选；微射流发生器(6)，其包括微型金属导体，接受荧光检测组件(5)的分选信号、引发微热泡。 9.如权利要求8所述的微流体检测装置，其特征在于，所述的微流体检测装置中，包括：基片(8)；位于基片上的微射流发生器(6)；位于微射流发生器(6)上的微流体结构(7)；位于微流体结构(7)上的盖片(10)；较佳地，微射流发生器(6)存在于一保护层(9)中，该保护层在基片(8)与微流体结构(7)之间。 10.一种用于从血液样品中富集循环稀有细胞的试剂盒，其特征在于，其中包括权利要求8或9所述的微流体检测装置；携带可识别信号的抗体；所述抗体包括抗CD45抗体；较佳地，所述的抗体是抗体组合，包括：抗CD14抗体，抗CD55抗体，抗CD66b抗体，抗CD90抗体，抗CD33抗体和抗CD36抗体；以及标记有核细胞的荧光染料。
所属类别：	发明专利