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原文传递一种检测甲基化RNA的光电化学传感器及其检测方法

专利名称：	一种检测甲基化RNA的光电化学传感器及其检测方法
摘要：	本发明公开了一种检测甲基化RNA的光电化学传感器及其检测方法，所述光电化学生物传感器，包括：电极，依次修饰在电极表面的硫化钨、纳米金、巯基苯硼酸、m6A抗体、甲基化RNA，混合了UTP的poly(U)聚合酶和Ru(NH3)63+。本发明利用WS2良好的光电活性和生物兼容性，纳米金良好的生物兼容性和导电性，抗体对抗原的特异性识别性能，以及用Poly(U)聚合酶延长RNA序列和Ru(NH3)63+作为信号扩大单元，实现对甲基化RNA的高灵敏性和高特异性检测。本发明的检测方法简单，实现了仪器小型化，且易于操作，即可实现对甲基化RNA的检测。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	山东农业大学
发明人：	殷焕顺;王月;周云雷;艾仕云;隋程吉
专利状态：	有效
申请日期：	2019-02-27T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-31T00:00:00+0800
申请号：	CN201910145050.1
公开号：	CN109828006A
代理机构：	济南誉丰专利代理事务所(普通合伙企业)
代理人：	薛鹏喜
分类号：	G01N27/26(2006.01);G;G01;G01N;G01N27
申请人地址：	271018 山东省泰安市岱宗大街61号
主权项：	1.一种光电化学传感器，其特征在于，所述光电化学传感器以经多重修饰的Ru/U-richRNA/Ab/MPBA/AuNPs/WS2/ITO电极为工作电极；所述工作电极由如下方法制备而成：以ITO电极为基础电极，对基础电极进行预处理，然后在预处理后的基础电极表面依次修饰硫化钨、纳米金、对巯基苯硼酸、m6A抗体、甲基化RNA、混合了UTP的poly(U)聚合酶和Ru(NH3)63+。 2.根据权利要求1所述的光电化学传感器，其特征在于，在预处理后的基础电极表面修饰硫化钨的方法为：将硫化钨用去离子水制成硫化钨分散液，将硫化钨分散液滴加到预处理后的电极表面，红外灯照射下干燥，然后清洗3-5次，氮气吹干；优选的，所述硫化钨分散液的浓度为0.1-5mg/ml。 3.根据权利要求1所述的光电化学传感器，其特征在于，在预处理后的基础电极表面修饰纳米金的方法为：将纳米金溶液滴加到修饰有硫化钨的电极表面，红外灯照射下干燥，然后清洗3-5次，氮气吹干。 4.根据权利要求1所述的光电化学传感器，其特征在于，在预处理后的基础电极表面修饰对巯基苯硼酸的方法为：将对巯基苯硼酸溶液滴加到修饰有纳米金的电极表面，在室温和潮湿条件下反应1.5-4h，然后清洗3-5次，氮气吹干。 5.根据权利要求1所述的光电化学传感器，其特征在于，在预处理后的基础电极表面修饰m6A抗体的方法为：将m6A抗体溶液滴加到修饰有对巯基苯硼酸的电极表面，在室温和潮湿条件下反应9-19h，然后清洗3-6次。 6.根据权利要求1所述的光电化学传感器，其特征在于，在预处理后的基础电极表面修饰甲基化RNA的方法为：将甲基化RNA溶液滴加到修饰有m6A抗体的电极表面，25-45℃和潮湿条件下反应1.5-4h，然后清洗3-5次，氮气吹干。 7.根据权利要求1所述的光电化学传感器，其特征在于，在预处理后的基础电极表面修饰混合了UTP的poly(U)聚合酶的方法为：将含有10-40U/mL poly(U)聚合酶and 1-5mM UTP的缓冲液滴加到修饰有甲基化RNA的电极表面，室温和潮湿条件下反应0.5-3h，然后清洗3-5次，氮气吹干。 8.根据权利要求1所述的光电化学传感器，其特征在于，在预处理后的基础电极表面修饰Ru(NH3)63+的方法为：将含有0.5-2mg/mL的[Ru(NH3)6]3+缓冲液滴加到修饰有混合了UTP的poly(U)聚合酶的电极表面，25-55℃和潮湿条件下反应0.5-3.5h，然后清洗3-5次，氮气吹干。 9.权利要求1-8任一项所述的光电化学传感器在检测甲基化RNA中的应用。 10.一种利用权利要求1-8任一项所述的光电化学传感器检测甲基化RNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：以电化学工作站为信号采集仪器，500W氙灯为可见光光源，以光电化学传感器的Ru/U-rich RNA/Ab/MPBA/AuNPs/WS2/ITO电极为工作电极，饱和甘汞电极为参比电极，铂柱电极为对电极，含有0.1M KCl的10mMTris-HCl(pH 7.4)缓冲液为检测液，建立电流与甲基化RNA浓度之间的关系，对甲基化RNA含量进行检测。
所属类别：	发明专利