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原文传递一种测定三聚氰胺的生物传感方法

专利名称：	一种测定三聚氰胺的生物传感方法
摘要：	本发明属于生物传感技术领域，以羟基氧化钴CoOOH纳米片溶液和FAM‑ssDNA作为纳米复合材料，实现三聚氰胺的测定，具体涉及一种测定三聚氰胺的生物传感方法；基于CoOOH纳米片对ssDNA和dsDNA不同的吸附效果，设计了一个用6‑羧基荧光素（FAM）标记的T碱基DNA作为荧光共振能量转移FRET的能量供体，CoOOH纳米片作为能量受体，CoOOH纳米片对ssDNA有强的吸附能力，可以高效的猝灭荧光，当加入三聚氰胺，三聚氰胺能够与只含有胸腺嘧啶T的ssDNA发生氢键作用，使ssDNA发生构型转换成dsDNA,CoOOH纳米片对dsDNA吸附较弱，FAM荧光基团被释放出来，荧光得到恢复；此方法具有成本低，检测速度快，结果准确等优点。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广东;44
申请人：	广州城市职业学院
发明人：	欧爱芬;贾强;张挺;梁兰兰;黄利华
专利状态：	有效
申请日期：	2019-03-25T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-31T00:00:00+0800
申请号：	CN201910226640.7
公开号：	CN109827938A
代理机构：	广州正明知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	成姗
分类号：	G01N21/64(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	510000 广东省广州市广园中路248号
主权项：	1.一种测定三聚氰胺的生物传感方法,其特征在于,用羟基氧化钴纳米片和FAM-ssDNA作为纳米复合材料，实现三聚氰胺的测定，包括以下步骤： S1.羟基氧化钴CoOOH纳米片溶液的制备：在1.5mL离心管中加入600~700uL浓度为7~9mM的CoCl﹒6H2O，然后与130~150uL浓度为1.0M的NaOH溶液混合，超声2~3min，紧接着加入1.0~1.2M的NaClO溶液20~24uL，超声12~18min，高速离心洗涤，冷冻干燥，得CoOOH纳米片溶液； S2. FAM-ssDNA/ CoOOH纳米片复合物的制备：在1.5mL离心管中加入250~350nM的FAM-ssDNA，8~10uL的PBS缓冲液，加入一定量100ug/mL的CoOOH纳米片溶液，充分混合后，室温条件下避光反应10分钟，形成FAM-ssDNA/CoOOH纳米复合物，保存于4℃冰箱中； S3.三聚氰胺的检测：在FAM-ssDNA/CoOOH纳米复合物中加入8~12uL的Tris-HCl缓冲液，然后将不同浓度的三聚氰胺溶液分别加入到FAM-ssDNA/CoOOH纳米复合物中，室温条件下抚育20min后，通过荧光仪分别检测体系的荧光信号； S4.样品分析：取样品，根据荧光信号强度和步骤S3标准曲线，可以获得三聚氰胺含量；其中，所述的FAM-ssDNA序列为：FAM-5，-T(T)28T-3，。 2.根据权利要求1所述测定三聚氰胺的生物传感方法，其特征在于，步骤S4中样品为牛奶。 3.根据权利要求1所述测定三聚氰胺的生物传感方法，其特征在于，制备方法中采用的溶剂为超纯水，超纯水用法国Millipore Milli-Q水净化系统制备，其电阻率大于18.2MΩ。 4.根据权利要求1所述测定三聚氰胺的生物传感方法，其特征在于，步骤S2中，所述PBS缓冲液为200nM KCl、5nM MgCl2、0.1mM EDTA。 5.根据权利要求1所述测定三聚氰胺的生物传感方法，其特征在于，步骤S3中，Tris-HCl缓冲液的pH 7.0~8.0，浓度20mM。 6.根据权利要求1所述测定三聚氰胺的生物传感方法，其特征在于，所述步骤S1中高速离心为8000~10000r/min离心10~20min，用超纯水分散洗涤4次。 7.根据权利要求1所述测定三聚氰胺的生物传感方法，其特征在于，步骤S3中，所用荧光仪为日本Hitachi F-7000荧光分光光度计。 8.根据权利要求1所述测定三聚氰胺的生物传感方法，其特征在于，化学试剂为分析纯试剂，并且没有经过进一步纯化。 9.根据权利要求1所述测定三聚氰胺的生物传感方法，其特征在于，步骤S2中， CoOOH纳米片溶液的加入量为10~15 uL。
所属类别：	发明专利