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原文传递一种多原子元素标记探针及其制备方法与应用

专利名称：	一种多原子元素标记探针及其制备方法与应用
摘要：	本发明公开了一种多原子元素标记探针及其制备方法与应用。本发明利用PCR技术快速合成了含有多种活性基团的DNA分子，并且以这种DNA分子作为骨架结构，将金属大环化合物通过正交反应偶联到骨架结构中，进而高效地获得多标记的元素标签。本发明将这种元素标签用于传统免疫，其灵敏度达到pg/ml，适用于生物大分子痕量分析检测领域。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	清华大学
发明人：	张新荣;胡志安;孙公伟;张钰清;邢志;张四纯
专利状态：	有效
申请日期：	2019-01-16T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-31T00:00:00+0800
申请号：	CN201910039264.0
公开号：	CN109828107A
代理机构：	北京纪凯知识产权代理有限公司
代理人：	关畅
分类号：	G01N33/534(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	100084 北京市海淀区北京市100084信箱82分箱清华大学专利办公室
主权项：	1.一种制备多原子元素标记探针的方法，包括：通过化学偶联反应将大环金属离子复合物与含有活性基团R的DNA分子结合，得到所述多原子元素标记探针；所述大环金属离子复合物为大环螯合剂与金属离子复合而得；或者，通过化学偶联反应将大环螯合剂与所述含有活性基团R的DNA分子结合后，再加入金属离子进行复合，得到所述多原子元素标记探针；所述大环螯合剂中含有能与所述R进行共价偶联反应的基团。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述大环螯合剂为DOTA或DTPA；所述金属离子为稀土金属离子；具体为如下稀土元素的离子：La、Ce、Pr、Nd、Sm、Eu、Gd、Tb、Dy、Ho、Er、Tm和Yb；所述R选自-biotin、-SH2、-S-S-、-NH2、-炔基和-叠氮基中的任意一种。 3.根据权利要求1-2中任一所述的方法，其特征在于：所述化学偶联反应为链霉亲和素和生物素反应、click反应、-NH2和-NHS反应、-NH2和-NCS反应或-SH2和马来酰亚胺基团反应。 4.根据权利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：所述含有活性基团R的DNA分子为按照如下方法制得：以R-dNTP和模板DNA为原料，利用PCR法合成而得；所述模板DNA分子的5’端修饰有活性基团R’；所述R-dNTP为活性基团R修饰的核苷酸。 5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述核苷酸为A、G、C和T中至少一种；所述R’选自-biotin、-SH2、-S-S-、-NH2、-炔基和-叠氮基中的任意一种，且所述R’与所述R不同。 6.一种多原子元素标记探针，包括所述含有活性基团R的DNA分子和所述大环金属离子复合物；所述含有活性基团R的DNA分子和大环金属离子复合物通过所述共价偶联反应相连。 7.根据权利要求6所述的多原子元素标记探针，其特征在于：所述多原子元素标记探针中，5’端还修饰有活性基团R’；所述含有活性基团R的DNA分子和大环金属离子复合物的定义与权利要求1相同；所述R’的定义与权利要求5中R’的定义相同。 8.由权利要求6或7所述多原子元素标记探针中的R’与抗体共价偶联而得的抗体-DNA复合物。 9.权利要求6或7所述多原子元素标记探针或权利要求8所述抗体-DNA复合物在生物大分子的免疫检测中的应用。 10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：所述免疫检测中，所用检测方法为电感耦合等离子体法、原子发射和吸收光谱法或时间分辨免疫荧光分析法；所述多原子元素标记探针与待测生物大分子之间的生物反应为DNA杂交反应或抗原抗体免疫反应。
所属类别：	发明专利