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原文传递一种用于检测Pb2+浓度的试剂盒及检测方法

专利名称：	一种用于检测Pb2+浓度的试剂盒及检测方法
摘要：	本发明提供了一种用于检测Pb2+浓度的试剂盒及检测方法，该试剂盒包括以下组分：菁染料、Pb2+标准溶液、DNA双链、酸性缓冲溶液和中性缓冲溶液。检测方法包括：分别绘制中性、酸性条件下Pb2+检测标准曲线；将待测样品、DNA双链和菁染料混合，将混合溶液在20‑40℃孵育15‑25min，然后测定其在448nm处的吸光度或在616nm处的荧光强度，根据检测出的吸光度或荧光强度来判断待测样品的酸度情况，然后结合中性或酸性条件下Pb2+检测标准曲线计算出Pb2+浓度。该试剂盒体系简单，检测方法灵敏度高，检出限低，准确性高，同时还能反映出待测样品的酸度情况，进而为铅离子的迁移速率的判断提供了简便方法。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	四川;51
申请人：	四川大学
发明人：	杨千帆;杨舒;杨春容;李济丞;杨冬林;苗家榕;姚烨
专利状态：	有效
申请日期：	2018-07-30T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-04T00:00:00+0800
申请号：	CN201810853040.9
公开号：	CN109839359A
代理机构：	成都正华专利代理事务所(普通合伙)
代理人：	郭艳艳
分类号：	G01N21/31(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	610064 四川省成都市武侯区一环路南一段24号
主权项：	1.一种用于检测Pb2+浓度的试剂盒，其特征在于，包括以下组分：菁染料、Pb2+标准溶液、DNA双链、酸性缓冲溶液和中性缓冲溶液；其中，DNA双链包括能形成G-四链体结构的DNA单链以及与其互补且能形成i-motif结构的DNA单链；菁染料的结构式为：其中，R1为C1-C6的烷基、苯基、烷基取代的苯基；R2、R3、R4和R5独立地选自H或C1-C6的烷基，或者R2和R3与它们所连接的碳原子一起形成五元至七元的环结构，或者R4和R5与它们所连接的碳原子一起形成五元至七元的环结构；R6和R7独立地选自C1-C6的烷基；Y为卤素；X1，X2独立选自C、O、S、Se、Te。 2.根据权利要求1所述的用于检测Pb2+浓度的试剂盒，其特征在于，菁染料的结构式为： 3.根据权利要求1所述的用于检测Pb2+浓度的试剂盒，其特征在于，能够形成G-四链体的DNA单链的序列为：5′-Ga1Yb1Ga2Yb2Ga3Yb3Ga4Yb4-3′；其中，a1-a4代表G的个数且为大于2的整数，b1-b4代表Y的个数且为0-3的整数，Y表示A、T或C碱基。 4.根据权利要求3所述的用于检测Pb2+浓度的试剂盒，其特征在于，能够形成G-四链体的DNA单链的序列为：5′-GGTGGTGGTGGT-3′、5′-GGTGGTGGTGGTGTTGGTGGTGGTGGTTT-3′、5′-GGGTGGGTGGGTGGG-3′、5′-GGGATTGGGATTGGGATTGGGATT-3′、5′-GGTTGGTGTGGTTGG-3′或5′-TGAGGGTGGGGAGGGTGGGGAA-3′。 5.根据权利要求1所述的用于检测Pb2+浓度的试剂盒，其特征在于，能够形成i-motif的DNA单链的序列为：5′-Cn1Xm1Cn2Xm2Cn3Xm3Cn4Xm4-3′；其中，n1-n4代表C的个数且为大于2的整数，m1-m4代表X的个数且为0-3的整数，X表示A、T或G碱基。 6.根据权利要求5所述的用于检测Pb2+浓度的试剂盒，其特征在于，能够形成i-motif的DNA单链的序列为：5′-CCACCACCACCACAACCACCACCAAA-3′、5′-CCACCACCACCACAACCACCACCACCAAA-3′、5′-CCCACCCACCCACCC-3′、5′-CCCTAACCCTAACCCTAACCCTAA-3′、5′-CCAACCACACCAACC-3′或5′-ACTCCCACCCCTCCCACCCCTT-3′。 7.根据权利要求1所述的用于检测Pb2+浓度的试剂盒，其特征在于，Pb2+标准溶液为PbCl2溶液；酸性缓冲溶液为浓度为10mM，pH＝4.0的Tris-HAc缓冲溶液；中性缓冲溶液为浓度为10mM，pH＝7.0的Tris-HAc缓冲溶液。 8.采用权利要求1-7任一项所述的试剂盒检测Pb2+浓度的方法，其特征在于，包括以下步骤： (1)将中性缓冲溶液、Pb2+标准溶液、DNA双链和菁染料混合，将混合溶液在20-40℃条件下孵育15-25min，然后测定其在448nm处的吸光度，绘制中性条件下Pb2+检测标准曲线； (2)将酸性缓冲溶液、Pb2+标准溶液、DNA双链和菁染料混合，将混合溶液在20-40℃条件下孵育15-25min，然后测定其在616nm处的荧光强度，绘制酸性条件下Pb2+检测标准曲线； (3)将待测样品、DNA双链和菁染料混合，将混合溶液在20-40℃条件下孵育15-25min，然后测定其在448nm处的吸光度或在616nm处的荧光强度，若检测到有吸光度，则说明待测样品偏中性，根据结合中性条件下Pb2+检测标准曲线，计算出Pb2+浓度；若检测到较强的荧光强度，则说明待测样品偏酸性，结合酸性条件下Pb2+检测标准曲线，计算出Pb2+浓度。 9.根据权利要求8所述的检测Pb2+浓度的方法，其特征在于，检测过程中菁染料的终浓度为4×10-6mol/L。 10.根据权利要求8所述的检测Pb2+浓度的方法，其特征在于，检测过程中DNA双链的浓度为2×10-6mol/L。
所属类别：	发明专利