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原文传递一种基于微流控芯片的人常染色体STR基因位点分型方法

专利名称：	一种基于微流控芯片的人常染色体STR基因位点分型方法
摘要：	本发明公开了一种基于微流控芯片的人常染色体STR基因位点分型方法，属DNA分析领域。该方法包括选择缓冲体系、选择电泳芯片、常染色体STR位点选择、电泳等步骤。本发明基于芯片电泳技术结合激光诱导荧光检测系统，在12分钟内分离了5个人常染色体上的STR基因座，并完成真实血液样本的常染色体STR分型测试。芯片电泳对常染色体STR分型所表现出来的高分辨、快速的分离分析能力，使它有希望成为快速、简便、高效分离检测人类染色体STR位点的分析手段之一。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	辽宁;21
申请人：	中国科学院大连化学物理研究所
发明人：	秦建华;苏文涛;姜雷
专利状态：	有效
申请日期：	2017-11-28T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-04T00:00:00+0800
申请号：	CN201711211209.2
公开号：	CN109839417A
代理机构：	沈阳晨创科技专利代理有限责任公司
代理人：	郑虹
分类号：	G01N27/447(2006.01);G;G01;G01N;G01N27
申请人地址：	116023 辽宁省大连市中山路457号
主权项：	1.一种基于微流控芯片的人常染色体STR基因位点分型方法，其特征在于：包括下列步骤： (1)选择电泳体系：进样缓冲液体系由50mmol/L三羟甲基氨基甲烷、50mmol/L N-三(羟甲基)甲基-3-氨基丙烷磺酸、1mmmol/L乙二胺四乙酸组成1×TTE缓冲液，pH8.0-9.0；样本分离体系由POP 4或POP 7胶组成； (2)选择电泳芯片：芯片包括样品池、样品废液池、缓冲液池、缓冲液废液池及十字管道；所述十字管道的横臂左右两端分别向垂直方向延伸，并分别与缓冲液废液池及缓冲液池相通，十字管道的纵臂上端与样品池相通，十字管道的纵臂下端与通过U形延伸段后与样品废液池相通；在十字管道的交叉处与缓冲液废液池之间的横臂上设置检测点； (3)芯片表面修饰：首先将芯片置于真空干燥器中抽真空约10分钟；取出芯片，立即向芯片通道中加入1M NaOH 65℃保持15min，抽干NaOH，加入1M HCl，室温保持15min，抽干后加入0.1％-0.5％聚N-羟乙基丙烯酰胺，室温保持1小时，最后以乙腈抽干微通道置于室温备用； (4)常染色体STR位点选择:基于中国人群中基因多态性GD>0.6和等位基因跨度的考虑，我们选择了其中的五个中国人群多态性大，等位基因跨度较小的五个常染色体基因座作为研究对象；对五个常染色体基因座位点进行标记，组成5个常染色体STR基因座复合扩增体系；作为电泳待测样品； (5)电泳：用1×TTE缓冲液浸洗2分钟；样品废液池、缓冲液池和缓冲液废液池加入缓冲液后，样品池中注入待测样品；进样阶段，样品池0V，样品废液池+500-800V，缓冲液池+0-200V，缓冲液废液池+300-800V，进样5-60秒后切换电压进入分离阶段；分离时，缓冲液废液池+3000-4000V，缓冲液池0V，样品池和样品废液池均施加+500-1100V，运行温度为25℃；得到血清样本中五个常染色体基因座位点的出峰时间、相对含量数据。 2.根据权利要求1所述的一种基于微流控芯片的人常染色体STR基因位点分型方法，其特征在于：所述芯片大小为63mm×30mm，芯片管道宽90μm，深10-30μm，芯片样品池到十字交叉点长5mm，有效分离长度为160mm，样品池、样品废液池、缓冲液池和缓冲液废液池的直径均为2mm。 3.根据权利要求1所述的一种基于微流控芯片的人常染色体STR基因位点分型方法，其特征在于：所述五个常染色体基因座位点分别是TPOX，vWA，D5S818，FGA和D2S1338。 4.根据权利要求1所述的一种基于微流控芯片的人常染色体STR基因位点分型方法，其特征在于：步骤(4)中标记具体为：5个基因座分成两组，分别用HEX和TAMRA分组标记，分子量内标用第三色荧光染料ROX标记，组成5个常染色体STR基因座复合扩增体系，作为电泳待测样品。
所属类别：	发明专利