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原文传递用于识别未愈合的皮肤伤口以及用于监测皮肤伤口愈合的方法

专利名称：	用于识别未愈合的皮肤伤口以及用于监测皮肤伤口愈合的方法
摘要：	本发明涉及用于将个体中的皮肤伤口识别为未愈合的皮肤伤口或愈合的皮肤伤口的体外方法、用于监测个体中的皮肤伤口愈合的体外方法、用于筛选适于调节皮肤伤口愈合的化合物的方法、以及与其相关的试剂盒。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	奥地利;AT
申请人：	阿克里斯生物医药有限公司
发明人：	芭芭拉·沃尔夫-温妮斯基;安东·斯图茨;佩特拉·多弗勒
专利状态：	有效
申请日期：	2017-10-23T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-04T00:00:00+0800
申请号：	CN201780065209.8
公开号：	CN109844529A
代理机构：	北京弘权知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	郭放;许伟群
分类号：	G01N33/50(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	奥地利维也纳
主权项：	1.一种用于将个体中的皮肤伤口识别为未愈合的皮肤伤口或愈合的皮肤伤口的体外方法，所述方法包含： a)测量 i)在存在从所述皮肤伤口获得的伤口渗出物样本或伤口生物膜样本的情况下，原代成纤维细胞的增殖，和/或 ii)在存在从所述皮肤伤口获得的伤口渗出物样本或伤口生物膜样本的情况下，由原代成纤维细胞形成成纤维细胞衍生基质，和 b)如果在i)和/或ii)中获得的值低于在没有伤口渗出物或伤口生物膜的情况下建立的对照值，则将所述皮肤伤口识别为未愈合的皮肤伤口，或者如果在i)和/或ii)中获得的值等于或高于在没有伤口渗出物或伤口生物膜的情况下建立的对照值，则将所述皮肤伤口识别为愈合的皮肤伤口，优选地，其中a)中的值至少重复三次测量和/或建立统计学显著性。 2.一种用于监测个体中的皮肤伤口愈合的体外方法，所述方法包含： a)测量 i)在第一时间点，在存在从所述皮肤伤口获得的伤口渗出物样本或伤口生物膜样本的情况下，原代成纤维细胞的增殖，和/或 ii)在第一时间点，在存在从所述皮肤伤口获得的伤口渗出物样本或伤口生物膜样本的情况下，由原代成纤维细胞形成成纤维细胞衍生基质， b)任选地，如果在a)i)和/或a)ii)中获得的值低于在没有伤口渗出物或伤口生物膜的情况下建立的对照值，则识别所述皮肤伤口在所述第一时间点是未愈合的皮肤伤口，或者如果在a)i)和/或a)ii)中获得的值等于或高于在没有伤口渗出物或伤口生物膜的情况下建立的对照值，则识别所述皮肤伤口在所述第一时间点是愈合的皮肤伤口， c)测量 i)在第二时间点，在存在从所述皮肤伤口获得的伤口渗出物样本或伤口生物膜样本的情况下，原代成纤维细胞的增殖，和/或 ii)在第二时间点，在存在从所述皮肤伤口获得的伤口渗出物样本或伤口生物膜样本的情况下，由原代成纤维细胞形成成纤维细胞衍生基质， d)任选地，如果在c)i)和/或c)ii)中获得的值低于在没有伤口渗出物或伤口生物膜的情况下建立的对照值，则识别所述皮肤伤口在所述第二时间点是未愈合的皮肤伤口，或者如果在c)i)和/或c)ii)中获得的值等于或高于在没有伤口渗出物或伤口生物膜的情况下建立的对照值，则识别所述皮肤伤口在所述第二时间点是愈合的皮肤伤口， e) A)如果在所述第二时间点在c)i)中获得的值高于在所述第一时间点在a)i)中获得的值，和/或在所述第二时间点在c)ii)中获得的值高于在所述第一时间点在a)ii)中获得的值，则识别所述皮肤伤口在所述第二时间点表现出改善的愈合，条件是在所述第一时间点在a)i)中和/或在所述第一时间点在a)ii)中获得的值等于或低于在没有伤口渗出物或伤口生物膜的情况下建立的对照值，或者 B)如果在所述第二时间点在c)i)中获得的值低于在所述第一时间点在a)i)中获得的值，和/或在所述第二时间点在c)ii)中获得的值低于在所述第一时间点在a)ii)中获得的值，则识别所述皮肤伤口在所述第二时间点表现出恶化的愈合，条件是在所述第二时间点在c)i)和/或c)ii)中获得的值等于或低于在没有伤口渗出物或伤口生物膜的情况下建立的对照值的100％，和 f)任选地在一个或多个较晚的时间点重复步骤a)至e)，从而监测所述皮肤伤口的愈合，优选地其中所述第一时间点和所述第二时间点相隔6小时至12个月，和/或所述值至少重复三次测量和/或建立统计学显著性。 3.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法包含： a)测量 i)在存在从所述皮肤伤口获得的伤口渗出物样本或伤口生物膜样本的情况下，原代成纤维细胞的增殖，和 ii)在存在从所述皮肤伤口获得的伤口渗出物样本或伤口生物膜样本的情况下，由原代成纤维细胞形成成纤维细胞衍生基质，和 b)如果在a)i)中获得的值低于在没有伤口渗出物或伤口生物膜的情况下建立的对照值，并且在a)ii)中获得的值低于在没有伤口渗出物或伤口生物膜的情况下建立的对照值，则将所述皮肤伤口识别为未愈合的皮肤伤口，优选其中在a)i)和a)ii)中获得的值比相应对照值低至少10％，更优选其中在a)i)和a)ii)中获得的值比相应对照值低至少15％，甚至更优选至少20％，或如果在a)i)中获得的值等于或高于在没有伤口渗出物或伤口生物膜的情况下建立的对照值，并且在a)ii)中获得的值等于或高于在没有伤口渗出物或伤口生物膜的情况下建立的对照值，则将所述皮肤伤口识别为愈合的皮肤伤口，优选地，其中在a)i)和a)ii)中获得的值比相应对照值高至少10％，更优选至少15％，甚至更优选至少20％，优选地，其中对于在a)i)和a)ii)中获得的值建立组合值和/或a)中的值至少重复三次测量和/或建立统计学显著性。 4.根据权利要求1或3所述的方法，其中步骤a)进一步包含以下步骤： iiia)在存在从所述皮肤伤口获得的伤口渗出物样本或伤口生物膜样本的情况下，测量HaCaT细胞的增殖，并且其中步骤b)包含： b)如果在i)至iiia)中获得的至少两个、优选三个值低于在没有伤口渗出物或伤口生物膜的情况下建立的相应对照值，将所述皮肤伤口识别为未愈合的皮肤伤口，更优选地，其中在i)和/或ii)和iiia)中获得的值比相应对照值低至少10％，更优选至少15％，或者如果在i)至iii)中获得的至少两个、优选三个值等于或高于在没有伤口渗出物或伤口生物膜的情况下建立的相应对照值，则将所述皮肤伤口识别为愈合的皮肤伤口，更优选其中在i)和/或ii)和iiia)中获得的值比相应对照值高至少10％，更优选至少15％，优选地，其中对于在i)和/或ii)和iiia)中获得的值建立组合值。 5.根据权利要求1、3或4所述的方法，其中步骤a)进一步包含以下步骤iiib)至iiid)中的一个、两个或三个、或以下步骤iiib)至iiie)中的一个、两个、三个或四个： iiib)测量与从所述皮肤伤口获得的伤口渗出物样本或伤口生物膜样本一起孵育的巨噬细胞上清液中的一种或多种M1标志物和一种或多种M2标志物的量，其中所述巨噬细胞与成纤维细胞共培养，其中所述一种或多种M1标志物选自CXCL10和IL-23p19，并且所述一种或多种M2标志物选自CCL22和CCL18， iiic)测量与从所述皮肤伤口获得的伤口渗出物样本或伤口生物膜样本一起孵育的巨噬细胞上的一种或多种M1细胞表面标志物和一种或多种M2细胞表面标志物的量和/或频率分布，其中所述巨噬细胞与成纤维细胞共培养，其中所述一种或多种M1细胞表面标志物选自CD38、CD64和CD197，并且其中所述一种或多种M2细胞表面标志物选自CD200受体、CD206和CD209， iiid)测量与从所述皮肤伤口获得的伤口渗出物样本或伤口生物膜样本一起孵育的巨噬细胞中的一种或多种M1标志物mRNA和一种或多种M2标志物mRNA的表达水平，其中所述巨噬细胞与成纤维细胞共培养，其中所述一种或多种M1标志物mRNA选自CD38、CD64、CD197、CXCL10和IL-23p19，并且所述一种或多种M2标志物mRNA选自CD200受体(CD200R)、CD206、CD209、CCL22和CCL18， iiie)测量与从所述皮肤伤口获得的伤口渗出物样本或伤口生物膜样本一起孵育的巨噬细胞上清液中的一种或多种细胞因子标志物的量，其中所述巨噬细胞与成纤维细胞共培养，并且其中所述一种或更多细胞因子标志物选自IL-1α、IL-1β和TNF-α，并且其中步骤b)包含： b)如果满足(1)至(6)中的至少两个、优选三个、四个、五个或六个，或(1)至(7)中的至少两个、优选三个、四个、五个、六个或七个，则将所述皮肤伤口识别为未愈合的皮肤伤口： (1)在i)中获得的值低于在没有伤口渗出物或伤口生物膜的情况下建立的相应对照值， (2)在ii)中获得的值低于在没有伤口渗出物或伤口生物膜的情况下建立的相应对照值， (3)在iiia)中获得的值低于在没有伤口渗出物或伤口生物膜的情况下建立的相应对照值， (4)在iiib)中获得的一种或多种M1标志物的量与一种或多种M2标志物的量的比率高于临界值， (5)在iiic)中获得的一种或多种M1细胞表面标志物的量和/或频率分布与一种或多种M2细胞表面标志物的量和/或频率分布的比率高于临界值，特别地其中所述比率选自CD38/CD209比率、CD197/CD209比率和CD197/CD206比率， (6)在iiid)中获得的一种或多种M1标志物mRNA的表达水平与一种或多种M2标志物mRNA的表达水平的比率高于临界值， (7)在iiie)中获得的值高于临界值，或者如果满足(1)至(6)中的至少两个、优选三个、四个、五个或六个、或(1)至(7)中的至少两个、优选三个、四个、五个、六个或七个，则将所述皮肤伤口识别为愈合的皮肤伤口： (1)在i)中获得的值等于或高于在没有伤口渗出物或伤口生物膜的情况下建立的相应对照值， (2)在ii)中获得的值等于或高于在没有伤口渗出物或伤口生物膜的情况下建立的相应对照值， (3)在iiia)中获得的值等于或高于在没有伤口渗出物或伤口生物膜的情况下建立的相应对照值， (4)在iiib)中获得的一种或多种M1标志物的量与一种或多种M2标志物的量的比率低于临界值， (5)在iiic)中获得的一种或多种M1细胞表面标志物的量和/或频率分布与一种或多种M2细胞表面标志物的量和/或频率分布的比率低于临界值，特别地其中所述比率选自CD38/CD209比率、CD197/CD209比率和CD197/CD206比率， (6)在iiid)中获得的一种或多种M1标志物mRNA的表达水平与一种或多种M2标志物mRNA的表达水平的比率低于临界值， (7)在iiie)中获得的值低于临界值，优选地，其中对于在i)、ii)、iiia)、iiib)、iiic)、iiid)和/或iiie)中获得的值建立组合值。 6.根据权利要求4或5所述的方法，其中步骤b)包含： b)如果满足(1)至(6)中的至少两个、优选三个、四个、五个或六个、或(1)至(7)中的至少两个、优选三个、四个、五个、六个或七个，则将所述皮肤伤口识别为未愈合的皮肤伤口： (1)在i)中获得的值低于在没有伤口渗出物或伤口生物膜时建立的相应对照值， (2)在ii)中获得的值低于在没有伤口渗出物或伤口生物膜时建立的相应对照值， (3)在iiia)中获得的值低于在没有伤口渗出物或伤口生物膜的情况下建立的相应对照值， (4)在iiib)中获得的一种或多种M1标志物的量与一种或多种M2标志物的量的比率高于临界值，其中所述一种或多种M1标志物选自CXCL10和IL-23p19，并且所述一种或多种M2标志物选自CCL22和CCL18， (5)在iiic)中获得的一种或多种M1细胞表面标志物的量和/或频率分布与一种或多种M2细胞表面标志物的量和/或频率分布的比率高于临界值，其中所述一种或多种M1细胞表面标志物选自CD38、CD64和CD197，并且其中所述一种或多种M2细胞表面标志物选自CD200受体、CD206和CD209，特别地其中所述比率选自CD38/CD209比率、CD197/CD209比率和CD197/CD206比率， (6)在iiid)中获得的一种或多种M1标志物mRNA的表达水平与一种或多种M2标志物mRNA的表达水平的比率高于临界值，其中所述一种或多种M1标志物mRNA选自CD38、CD64、CD197、CXCL10和IL-23p19，并且所述一种或多种M2标志物mRNA选自CD200受体(CD200R)、CD206、CD209、CCL22和CCL18， (7)在iiie)中获得的选自IL-1α、IL-1β和TNF-α的一种或多种细胞因子标志物的量的值高于临界值，条件是至少在i)和/或ii)中获得的值低于在没有伤口渗出物或伤口生物膜的情况下建立的相应对照值，和/或如果满足(1)至(6)中的至少两个、优选三个、四个、五个或六个、或(1)至(7)中的至少两个、优选三个、四个、五个、六个或七个，则将所述皮肤伤口识别为愈合的皮肤伤口： (1)在i)中获得的值高于在没有伤口渗出物或伤口生物膜的情况下建立的相应对照值， (2)在ii)中获得的值高于在没有伤口渗出物或伤口生物膜的情况下建立的相应对照值， (3)在iiia)中获得的值高于在没有伤口渗出物或伤口生物膜的情况下建立的相应对照值， (4)在iiib)中获得的一种或多种M1标志物的量与一种或多种M2标志物的量的比率低于临界值， (5)在iiic)中获得的一种或多种M1细胞表面标志物的量和/或频率分布与一种或多种M2细胞表面标志物的量和/或频率分布的比率低于临界值，特别是其中所述比率选自CD38/CD209比率、CD197/CD209比率和CD197/CD206比率， (6)在iiid)中获得的一种或多种M1标志物mRNA的表达水平与一种或多种M2标志物mRNA的表达水平的比率低于临界值， (7)在iiie)中获得的选自IL-1α、IL-1β和TNF-α的一种或多种细胞因子标志物的量的值低于临界值，条件是至少在i)和/或ii)中获得的值等于或高于在没有伤口渗出物或伤口生物膜的情况下建立的相应对照值。 7.根据权利要求2所述的方法，包含： a)测量 i)在第一时间点，在存在从所述皮肤伤口获得的伤口渗出物样本或伤口生物膜样本的情况下，原代成纤维细胞的增殖，和 ii)在第一时间点，在存在从所述皮肤伤口获得的伤口渗出物样本或伤口生物膜样本的情况下，由原代成纤维细胞形成成纤维细胞衍生基质， b)任选地，如果在a)i)中获得的值低于在没有伤口渗出物或伤口生物膜的情况下建立的对照值，并且在a)ii)中获得的值低于在没有伤口渗出物或伤口生物膜的情况下建立的对照值，则将所述皮肤伤口识别为在所述第一时间点是未愈合的皮肤伤口，或如果在a)i)中获得的值等于或高于在没有伤口渗出物或伤口生物膜的情况下建立的对照值，并且在a)ii)中获得的值等于或高于在没有伤口渗出物或伤口生物膜的情况下建立的对照值，则将所述皮肤伤口识别为在所述第一时间点是愈合的皮肤伤口， c)测量 i)在第二时间点，在存在从所述皮肤伤口获得的伤口渗出物样本或伤口生物膜样本的情况下，原代成纤维细胞的增殖，和 ii)在第二时间点，在存在从所述皮肤伤口获得的伤口渗出物样本或伤口生物膜样本的情况下，由原代成纤维细胞形成成纤维细胞衍生基质， d)任选地，如果在c)i)中获得的值低于在没有伤口渗出物或伤口生物膜的情况下建立的对照值，并且在c)ii)中获得的值低于在没有伤口渗出物或伤口生物膜的情况下建立的对照值，则将皮肤伤口识别为在所述第二时间点是未愈合的皮肤伤口，或如果在c)i)中获得的值等于或高于在没有伤口渗出物或伤口生物膜的情况下建立的对照值，并且在c)ii)中获得的值等于或高于在没有伤口渗出物或伤口生物膜的情况下建立的对照值，则将皮肤伤口识别为在所述第二时间点是愈合的皮肤伤口， e) A)如果在所述第二时间点在c)i)中获得的值高于在所述第一时间点在a)i)中获得的值，并且在所述第二时间点在c)ii)中获得的值高于在所述第一时间点在a)ii)中获得的值，则识别皮肤伤口在第二时间点表现出改善的愈合，条件是在所述第一时间点在a)i)中以及在所述第一时间点在a)ii)中获得的值等于或低于在没有伤口渗出物或伤口生物膜的情况下建立的相应对照值，或者 B)如果在所述第二时间点在c)i)中获得的值低于在所述第一时间点在a)i)中获得的值，并且在所述第二时间点在c)ii)中获得的值低于在所述第一时间点在a)ii)中获得的值，则识别皮肤伤口在第二时间点表现出恶化的愈合，条件是在所述第二时间点在c)i)和c)ii)中获得的值等于或低于在没有伤口渗出物或伤口生物膜的情况下建立的相应对照值的100％，并且 f)任选地在一个或多个较晚的时间点重复步骤a)至e)。 8.根据权利要求2所述的方法，包含： a)测量 i)在第一时间点，在存在从所述皮肤伤口获得的伤口渗出物样本或伤口生物膜样本的情况下，原代成纤维细胞的增殖，和 ii)在第一时间点，在存在从所述皮肤伤口获得的伤口渗出物样本或伤口生物膜样本的情况下，由原代成纤维细胞形成成纤维细胞衍生基质，以及iiia)、iiib)、iiic)和iiid)中的一个、两个、三个或四个，或iiia)、iiib)、iiic)、iiid)和iiie)中的一个、两个、三个、四个或五个： iiia)在第一时间点，在存在从所述皮肤伤口获得的伤口渗出物样本或伤口生物膜样本的情况下，HaCaT细胞的增殖， iiib)在第一时间点，与从所述皮肤伤口获得的伤口渗出物样本或伤口生物膜样本一起孵育的巨噬细胞上清液中的一种或多种M1标志物和一种或多种M2标志物的量，其中所述巨噬细胞与成纤维细胞共培养，其中所述一种或多种M1标志物选自CXCL10和IL-23p19，并且所述一种或多种M2标志物选自CCL22和CCL18， iiic)在第一时间点，与从所述皮肤伤口获得的伤口渗出物样本或伤口生物膜样本一起孵育的巨噬细胞上的一种或多种M1细胞表面标志物和一种或多种M2细胞表面标志物的量和/或频率分布，其中所述巨噬细胞与成纤维细胞共培养，其中所述一种或多种M1细胞表面标志物选自CD38、CD64和CD197，并且其中所述一种或多种M2细胞表面标志物是选自CD200受体、CD206和CD209， iiid)在第一时间点，与从所述皮肤伤口获得的伤口渗出物样本或伤口生物膜样本一起孵育的巨噬细胞中的一种或多种M1标志物mRNA和一种或多种M2标志物mRNA的表达水平，其中所述巨噬细胞与成纤维细胞共培养， iiie)在第一时间点，与从所述皮肤伤口获得的伤口渗出液样本或伤口生物膜样本一起孵育的巨噬细胞上清液中的一种或多种细胞因子标志物的量，其中所述巨噬细胞与成纤维细胞共培养，其中所述一种或多种细胞因子标志物选自IL-1α、IL-1β和TNF-α， b)任选地，根据权利要求3、4或5，将所述皮肤伤口识别为在所述第一时间点是未愈合的皮肤伤口或在所述第一时间点是愈合的皮肤伤口， c)测量 i)在第二时间点，在存在从所述皮肤伤口获得的伤口渗出物样本或伤口生物膜样本的情况下，原代成纤维细胞的增殖，和 ii)在第二时间点，在存在从所述皮肤伤口获得的伤口渗出物样本或伤口生物膜样本的情况下，由原代成纤维细胞形成成纤维细胞衍生基质，以及iiia)、iiib)、iiic)和iiid)中的一个、两个、三个或四个、或iiia)、iiib)、iiic)、iiid)和iiie)中的一个、两个、三个、四个或五个： iiia)在第二时间点，在存在从所述皮肤伤口获得的伤口渗出物样本或伤口生物膜样本的情况下，HaCaT细胞的增殖， iiib)在第二时间点，与从所述皮肤伤口获得的伤口渗出物样本或伤口生物膜样本一起孵育的巨噬细胞上清液中的一种或多种M1标志物和一种或多种M2标志物的量，其中所述巨噬细胞在与成纤维细胞共培养，其中所述一种或多种M1标志物选自CXCL10和IL-23p19，并且所述一种或多种M2标志物选自CCL22和CCL18， iiic)在第二时间点，与从所述皮肤伤口获得的伤口渗出物样本或伤口生物膜样本一起孵育的巨噬细胞上的一种或多种M1细胞表面标志物和一种或多种M2细胞表面标志物的量和/或频率分布，其中所述巨噬细胞与成纤维细胞共培养，其中所述一种或多种M1细胞表面标志物选自CD38、CD64和CD197，并且其中所述一种或多种M2细胞表面标志物是选自CD200受体、CD206和CD209， iiid)在第二时间点，与从所述皮肤伤口获得的伤口渗出物样本或伤口生物膜样本一起孵育的巨噬细胞中的一种或多种M1标志物mRNA和一种或多种M2标志物mRNA的表达水平，其中所述巨噬细胞与成纤维细胞共培养，其中所述一种或多种M1标志物mRNA选自CD38、CD64、CD197、CXCL10和IL-23p19，并且所述一种或多种M2标志物mRNA选自CD200受体(CD200R)、CD206、CD209、CCL22和CCL18， iiie)在第二时间点，与从所述皮肤伤口获得的伤口渗出液样本或伤口生物膜样本一起孵育的巨噬细胞上清液中一种或多种细胞因子标志物的量，其中所述巨噬细胞与成纤维细胞共培养，其中所述一种或多种细胞因子标志物选自IL-1α、IL-1β和TNF-α， d)任选地，根据权利要求3、4或5，将皮肤伤口识别为在所述第二时间点处是未愈合的皮肤伤口或在所述第二时间点是愈合的皮肤伤口， e) A)如果满足(1)至(6)中的至少两个、优选三个、四个、五个或六个，或(1)至(7)中的至少两个、优选三个、四个、五个、六个或七个，则识别皮肤伤口在第二时间点表现出改善的愈合： (1)在所述第二时间点在c)i)中获得的值高于在所述第一时间点在a)i)中获得的值， (2)在所述第二时间点在c)ii)中获得的值高于在所述第一时间点在a)ii)中获得的值， (3)在所述第二时间点在c)iiia)中获得的值高于在所述第一时间点在a)iiia)中获得的值， (4)在所述第二时间点在c)iiib)中获得的一种或多种M1标志物与一种或多种M2标志物的量的比率低于在所述第一时间点在a)iiib)中获得的一种或多种M1标志物的量与一种或多种M2标志物的量的比率，其中所述一种或多种M1标志物选自CXCL10和IL-23p19，并且所述一种或多种M2标志物选自CCL22和CCL18， (5)在所述第二时间点在c)iiic)中获得的一种或多种M1细胞表面标志物的量和/或频率分布与一种或多种M2细胞表面标志物的量和/或频率分布的比率低于在所述第一时间点在a)iiic)中获得的一种或多种M1细胞表面标志物的量和/或频率分布与所述一种或多种M2细胞表面标志物的量和/或的频率分布的比率，其中所述一种或多种M1细胞表面标志物选自CD38、CD64和CD197，并且其中所述M2细胞表面标志物选自CD200受体、CD206和CD209，特别地其中所述比率选自CD38/CD209比率、CD197/CD209比率和CD197/CD206比率， (6)在所述第二时间点在c)iiid)中获得的一种或多种M1标志物mRNA的表达水平与一种或多种M2标志物mRNA的表达水平的比率低于在所述第一时间点在a)iiid)中获得的一种或多种M1标志物mRNA的表达水平与一种或多种M2标志物mRNA的表达水平的比率，其中所述一种或多种M1标志物mRNA选自CD38、CD64、CD197、CXCL10和IL-23p19，并且所述一种或多种M2标志物mRNA选自CD200受体(CD200R)、CD206、CD209、CCL22和CCL18， (7)在所述第二时间点在c)iiie)中获得的值低于在所述第一时间点在a)iiie)中获得的值，条件是至少在所述第二时间点在c)i)和/或c)ii)中获得的值在所述第二时间点高于在所述第一时间点在a)i)和/或a)ii)中获得的值，和条件是在所述第一时间点在a)i)中和/或在所述第一时间点在a)ii)中获得的值等于或低于在没有伤口渗出物或伤口生物膜的情况下建立的对照值，或者 B)如果满足(1)至(6)中的至少两个、优选三个、四个、五个或六个，或(1)至(7)中的至少两个、优选三个、四个、五个、六个或七个，则识别皮肤伤口在第二时间点表现出恶化的愈合： (1)在所述第二时间点在c)i)中获得的值低于在所述第一时间点在a)i)中获得的值， (2)在所述第二时间点在c)ii)中获得的值低于在所述第一时间点在a)ii)中获得的值， (3)在所述第二时间点在c)iiia)中获得的值低于在所述第一时间点在a)iiia)中获得的值， (4)在所述第二时间点在c)iiib)中获得的一种或多种M1标志物与一种或多种M2标志物的量的比率高于在所述第一时间点在a)iiib)中获得的一种或多种M1标志物的量与一种或多种M2标志物的量的比率，其中所述一种或多种M1标志物选自CXCL10和IL-23p19，并且所述一种或多种M2标志物选自CCL22和CCL18，特别地其中所述比率选自CD38/CD209比率、CD197/CD209比率和CD197/CD206比率， (5)在所述第二时间点在c)iiic)中获得的一种或多种M1细胞表面标志物的量和/或频率分布与一种或多种M2细胞表面标志物的量和/或频率分布的比率高于在所述第一时间点在a)iiic)中获得的一种或多种M1细胞表面标志物的量和/或频率分布与所述一种或多种M2细胞表面标志物的量和/或频率分布的比率，其中所述一种或多种M1细胞表面标志物选自CD38、CD64和CD197，并且其中所述一种或多种M2细胞表面标志物选自CD200受体、CD206和CD209， (6)在所述第二时间点在c)iiid)中获得的一种或多种M1标志物mRNA的表达水平与一种或多种M2标志物mRNA的表达水平的比率高于在所述第一时间点在a)iiid)中获得的一种或多种M1标志物mRNA的表达水平与一种或多种M2标志物mRNA的表达水平的比率，其中所述一种或多种M1标志物mRNA选自CD38、CD64、CD197、CXCL10和IL-23p19，并且所述一种或多种M2标志物mRNA选自CD200受体(CD200R)、CD206、CD209、CCL22和CCL18，条件是至少在所述第二时间点在c)i)和/或c)ii)中获得的值低于在所述第一时间点在a)i)和/或a)ii)中获得的值，和条件是在所述第二时间点在c)i)和/或c)ii)中获得的值等于或低于在没有伤口渗出物或伤口生物膜的情况下建立的对照值的100％， (7)在所述第二时间点在c)iiie)中获得的值高于在所述第一时间点在a)iiie)中获得的值，和 f)任选地在一个或多个较晚的时间点重复步骤a)至e)。 9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中 -所述个体是哺乳动物，优选人，和/或 -所述皮肤伤口选自选自糖尿病患者的伤口、被至少一种微生物感染的伤口、缺血性伤口、患有血液供应不足或静脉淤滞的患者的伤口、溃疡如糖尿病性溃疡、静脉性溃疡、动脉性溃疡例如动脉性腿部溃疡、混合性溃疡或压疮、神经性伤口、腿部溃疡、手术伤口、烧伤、裂开、肿瘤性溃疡和罕见溃疡，和/或 -未愈合的皮肤伤口被理解为在标准疗法下2个月内不闭合的伤口，和/或 -所述个体表现出进一步的疾病和/或共患病，和/或用药物治疗进一步的疾病和/或共患病，和/或 -所述皮肤伤口未经处理或用以下一种或多种方式来治疗：压迫、伤口敷料、外科清创术、生物清创术、感染控制、抗生素疗法、负压疗法、蛋白质、特别是生长因子、抗体、肽、糖、细胞或细胞成分、人造皮肤、人类血液衍生产品、基因疗法或基因工程伤口床修饰、药物、草药、植物提取物，和/或 -如果(i)所述个体的皮肤伤口通过根据权利要求1或3至6所述的方法被识别为未愈合的皮肤伤口，和/或所述个体的皮肤伤口通过根据权利要求2、7或8的方法被识别为与第一时间点相比在第二时间点表现出恶化的愈合，则识别所述个体用一种或多种疗法进行治疗，所述疗法选自压迫、伤口敷料、外科清创术、生物清创术、感染控制、抗生素疗法、负压疗法、蛋白质、特别是生长因子、抗体、肽、糖、细胞或细胞成分、人造皮肤、人类血液衍生产品、基因疗法或基因工程伤口床修饰、药物、草药、植物提取物，和/或 -通过物理或化学方法获得伤口渗出物样本，特别是通过向皮肤伤口施加负压，特别是通过使用负压引流装置、使用毛细管力的方法、将伤口渗出物收集在膜敷料或膜中、将伤口渗出物收集在注射器中、施用吸收性材料诸如吸收性珠子、或过滤器、或通过使用拭子诸如棉签，特别是其中膜敷料或膜是纤维素层和/或其中吸收性材料是纤维素层，和/或 -愈合的皮肤伤口表征为持续的伤口闭合、肉芽、没有坏死和/或没有感染，和/或 -未愈合的皮肤伤口表征为缺乏伤口闭合、伤口面积和/或深度增加、皮肤伤口坏死和/或感染、和/或缺乏肉芽，和/或 -所述方法中使用的所述成纤维细胞和/或单核细胞是人细胞，优选人细胞来自健康人个体、来自与伤口愈合受损相关的共患病诸如糖尿病的患者、和/或来自提供伤口渗出物或伤口生物膜的个体患者，和/或 -所述伤口渗出物样本或伤口生物膜样本在1：2至1：1000之间稀释，优选在1：10至1：200之间。 10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中 i)在存在从皮肤伤口获得的伤口渗出物样本或伤口生物膜样本的情况下，测量原代成纤维细胞的增殖，包括以下步骤： (i)培养原代人真皮成纤维细胞， (ii)将细胞在固体支持物上孵育，从而使所述细胞粘附在所述支持物上， (iii)使所述细胞与所述伤口渗出物样本或伤口生物膜样本接触，所述伤口渗出物样本或伤口生物膜样本任选地被稀释，其中可以在所述细胞粘附发生之前或之后进行所述接触， (iv)测定所述原代成纤维细胞的量，优选细胞数，包括细胞外基质的形成，优选地，其中所述方法在2D细胞培养中进行，和/或 ii)在存在从皮肤伤口获得的伤口渗出物样本或伤口生物膜样本的情况下，测量由原代成纤维细胞形成成纤维细胞衍生基质，包括以下步骤： (i)在支持物上接种原代人真皮成纤维细胞，所述支持物优选预涂有粘附增强剂，诸如明胶， (ii)在所述支持物上培养所述细胞，优选直至达到融合， (iii)使所述细胞与(i)基质促进补充物以及(ii)伤口渗出物样本或伤口生物膜样本接触，所述伤口渗出物样本或伤口生物膜样本任选地被稀释，其中(i)和(ii)可以同时或依次接触， (iv)测定所述成纤维细胞衍生基质的量，优选地，其中所述方法在3D细胞培养中进行，和/或 iii)在存在从皮肤伤口获得的伤口渗出物样本或伤口生物膜样本的情况下，测量角质形成细胞的增殖，包括以下步骤： (i)培养角质形成细胞， (ii)将所述细胞在固体支持物上孵育，从而使所述细胞粘附在所述支持物上， (iii)使所述细胞与所述伤口渗出物样本或伤口生物膜样本接触，所述伤口渗出物样本或伤口生物膜样本任选地被稀释，其中可以在所述细胞粘附发生之前或之后进行所述接触， (iv)测定所述角质形成细胞的量，优选细胞数，优选地，其中所述方法在2D细胞培养中进行，和/或 iv)测量与从皮肤伤口获得的伤口渗出物样本或伤口生物膜样本一起孵育的巨噬细胞上清液中的一种或多种M1标志物和一种或多种M2标志物的量，包括以下步骤： (i)将原代人单核细胞与(a)2D细胞培养中的人真皮成纤维细胞或(b)成纤维细胞衍生基质共培养， (ii)孵育细胞直至达到巨噬细胞分化，任选地其中CD163用作巨噬细胞分化的细胞表面标志物， (iii)使所述细胞与伤口渗出物样本或伤口生物膜样本接触，所述伤口渗出物样本或伤口生物膜样本任选地被稀释， (iv)测定细胞培养上清液中的一种或多种M1标志物和一种或多种M2标志物的量，其中所述一种或多种M1标志物选自CXCL10和IL-23p19，并且所述一种或多种M2标志物选自CCL22和CCL18，更优选地其中通过使用免疫学测定法，甚至更优选地通过使用ELISA测定法，来测定所述标志物，和/或 v)测量与从皮肤伤口获得的伤口渗出物样本或伤口生物膜样本一起孵育的巨噬细胞上的一种或多种M1细胞表面标志物和一种或多种M2细胞表面标志物的量和/或频率分布，包括以下步骤： (i)将原代人单核细胞与(a)2D细胞培养中的人真皮成纤维细胞或(b)成纤维细胞衍生基质共培养， (ii)孵育细胞直至达到巨噬细胞分化，任选地其中CD163用作巨噬细胞分化的细胞表面标志物， (iii)使所述细胞与伤口渗出物样本或伤口生物膜样本接触，所述伤口渗出物样本或伤口生物膜样本任选地被稀释， (iv)测定巨噬细胞的细胞表面上的一种或多种M1标志物和一种或多种M2标志物的量和/或频率分布，其中所述一种或多种M1细胞表面标志物选自CD38、CD64和CD197，并且所述一种或多种M2细胞表面标志物选自CD200受体(CD200R)、CD206和CD209，优选地其中通过免疫学测定法和/或荧光测定法，特别是通过FACS分析，来确定细胞表面标志物的量和/或频率分布，更优选地，其中步骤iv)包括：使所述巨噬细胞与结合剂接触，所述结合剂优选抗体，其特异性识别一种或多种M1细胞表面标志物和一种或多种M2细胞表面标志物，其中所述结合剂任选地被标记，特别地用荧光标记物标记，并测定与所述巨噬细胞结合的结合分子的量，特别地通过测定平均荧光强度，从而测定所述细胞表面标志物的量，和/或使所述巨噬细胞与结合剂接触，所述结合剂优选抗体，其特异性识别一种或多种M1细胞表面标志物和一种或多种M2细胞表面标志物，其中所述结合剂任选地被标记，特别地用荧光标记物标记，并测定细胞群内分别对一种或多种M1细胞表面标志物和一种或多种M2细胞表面标志物呈阳性的细胞百分比，特别地其中进行FACS分析，从而测定细胞表面标志物的频率分布，和/或 vi)测量与从皮肤伤口获得的伤口渗出物样本或伤口生物膜样本一起孵育的巨噬细胞中的一种或多种M1标志物mRNA和一种或多种M2标志物mRNA的表达水平，包括以下步骤： (i)将原代人单核细胞与(a)2D细胞培养中的人真皮成纤维细胞或(b)成纤维细胞衍生基质共培养， (ii)孵育细胞直至达到巨噬细胞分化，任选地其中CD163用作巨噬细胞分化的细胞表面标志物， (iii)使所述细胞与伤口渗出物样本或伤口生物膜样本接触，所述伤口渗出物样本或伤口生物膜样本任选地被稀释， (iv)测定所述巨噬细胞中一种或多种M1标志物mRNA和一种或多种M2标志物mRNA的表达水平，其中所述一种或多种M1标志物mRNA选自CD38、CD64、CD197、CXCL10和IL-23p19，并且所述一种或多种M2标志物mRNA选自CD200受体(CD200R)、CD206、CD209、CCL22和CCL18，更优选地，其中所述方法包含使特异性结合标志物mRNA的探针与巨噬细胞RNA在有利于杂交的条件下接触，其中所述探针任选地被标记，并检测杂交的探针，和/或 vii)测量与从皮肤伤口获得的伤口渗出物样本或伤口生物膜样本一起孵育的巨噬细胞上清液中的选自IL-1α、IL-1β和TNF-α的一种或多种细胞因子标志物的量，包括以下步骤： (i)将原代人单核细胞与(a)2D细胞培养中的人真皮成纤维细胞或(b)成纤维细胞衍生基质共培养， (ii)孵育细胞直至达到巨噬细胞分化，任选地其中CD163用作巨噬细胞分化的细胞表面标志物， (iii)使所述细胞与伤口渗出物样本或伤口生物膜样本接触，所述伤口渗出物样本或伤口生物膜样本任选地被稀释， (iv)测定细胞培养上清液中的选自IL-1α、IL-1β和TNF-α的一种或多种细胞因子标志物的量，优选地，其中通过使用免疫学测定法，更优选地通过使用ELISA测定法，来测定所述细胞因子标志物。 11.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中以下方法步骤同时进行： i)在存在从皮肤伤口获得的伤口渗出物样本或伤口生物膜样本的情况下，测量原代成纤维细胞的增殖，和 ii)在存在从皮肤伤口获得的伤口渗出物样本或伤口生物膜样本的情况下，测量由原代成纤维细胞形成成纤维细胞衍生基质，并且可选地 iiia)在存在从皮肤伤口获得的伤口渗出物样本或伤口生物膜样本的情况下，测量角质形成细胞的增殖，和/或 iiib)测量与从皮肤伤口获得的伤口渗出物样本或伤口生物膜样本一起孵育的巨噬细胞上清液中的一种或多种M1标志物和一种或多种M2标志物的量，其中所述巨噬细胞与成纤维细胞共培养，其中所述一种或多种M1标志物选自CXCL10和IL-23p19，并且所述一种或多种M2标志物选自CCL22和CCL18，和/或 iiic)测量与从皮肤伤口获得的伤口渗出物样本或伤口生物膜样本一起孵育的巨噬细胞上的一种或多种M1细胞表面标志物和一种或多种M2细胞表面标志物的量和/或频率分布，其中所述巨噬细胞与成纤维细胞共培养，其中所述一种或多种M1细胞表面标志物选自CD38、CD64和CD197，并且其中所述一种或多种M2细胞表面标志物选自CD200受体、CD206和CD209，和/或 iiid)测量与从皮肤伤口获得的伤口渗出物样本或伤口生物膜样本一起孵育的巨噬细胞中一种或多种M1标志物mRNA和一种或多种M2标志物mRNA的表达水平，其中所述巨噬细胞与成纤维细胞共培养，其中所述一种或多种M1标志物mRNA选自CD38、CD64、CD197、CXCL10和IL-23p19，并且所述一种或多种M2标志物mRNA选自CD200受体(CD200R)、CD206、CD209、CCL22和CCL18，和/或 iiie)测量与从皮肤伤口获得的伤口渗出物样本或伤口生物膜样本一起孵育的巨噬细胞上清液中一种或多种细胞因子标志物的量，其中所述巨噬细胞与成纤维细胞共培养，并且其中所述一种或更多细胞因子标志物选自IL-1α、IL-1β和TNF-α，优选地，其中所述方法步骤在单个支持物上进行，更优选其中所述支持物是芯片、阵列诸如微阵列或纳米阵列、板诸如多孔板、或培养皿。 12.一种试剂盒，其包含用于执行权利要求11所述的方法步骤i)至iiid)或i)至iiie)的试剂，其中所述试剂盒包含： a)原代成纤维细胞， b)角质形成细胞， c)具有多个限定区域或空腔的支持物，其中所述区域或空腔的子集(i)涂有粘附增强剂和/或(ii)填充有成纤维细胞衍生基质(FDM)，所述粘附增强剂优选为明胶， d)任选地基质促进补充物，和 e)任选地单核细胞，和 f)特异性识别一种或多种M1细胞表面标志物和一种或多种M2细胞表面标志物的结合剂，优选抗体，以及任选地：特异性识别一种或多种M1标志物和一种或多种M2标志物的结合剂，优选抗体，和/或特异性识别一种或多种M1标志物mRNA和一种或多种M2标志物mRNA的探针，其中所述一种或多种M1细胞表面标志物选自CD38、CD64和CD197，并且其中所述一种或多种M2细胞表面标志物选自CD200受体、CD206和CD209，并且其中所述一种或多种M1标志物选自CXCL10和IL-23p19，并且所述一种或多种M2标志物选自CCL22和CCL18，并且其中所述一种或多种M1标志物mRNA选自CD38、CD64、CD197、CXCL10和IL-23p19，并且所述一种或多种M2标志物mRNA选自CD200受体(CD200R)、CD206、CD209、CCL22和CCL18，和 g)任选地，特异性识别选自IL-1α、IL-1β和TNF-α的一种或多种一种或多种细胞因子标志物的结合剂，优选抗体。 13.一种适于执行根据权利要求1至11所述的方法的支持物，其中所述支持物包含多个限定的区域或空腔，并且其中： a)区域或空腔的子集涂有粘附增强剂， b)区域或空腔体的子集涂有粘附增强剂和/或填充有成纤维细胞衍生基质(FDM)， c)区域或空腔的子集未经处理， d)任选地： d1)区域或空腔的子集含有特异性识别一种或多种M1标志物的结合剂，优为抗体，和 d2)区域或空腔的子集含有特异性识别一种或多种一种或多种M2标志物的结合剂，优选抗体，其中所述一种或多种M1标志物选自CXCL10和IL-23p19，并且所述一种或多种M2标志物选自CCL22和CCL18， e) e1)区域或空腔的子集含有特异性识别一种或多种M1细胞表面标志物的结合剂，优选抗体，和 e2)区域或空腔的子集含有特异性识别一种或多种M2细胞表面标志物的结合剂，优选抗体，其中所述一种或多种M1细胞表面标志物选自CD38、CD64和CD197，并且其中一种或多种M2细胞表面标志物选自CD200受体、CD206和CD209， f)任选地： f1)区域或空腔的子集含有特异性识别一种或多种M1标志物mRNA的探针，和 f2)区域或空腔的子集含有特异性识别一种或多种M2标志物mRNA的探针，其中所述一种或多种M1标志物mRNA选自CD38、CD64、CD197、CXCL10和IL-23p19，并且所述一种或多种M2标志物mRNA选自CD200受体(CD200R)、CD206、CD209、CCL22和CCL18，和 g)任选地：区域或空腔的子集含有特异性识别选自IL-1α、IL-1β和TNF-α的一种或多种细胞因子标志物的结合剂，优选抗体，其中子集a)至g)不重叠，优选地 (x)至少一些根据a)的所述区域或空腔进一步含有原代成纤维细胞，和/或 (xi)至少一些根据(x)或b)的所述区域或空腔进一步含有单核细胞，和/或 (xii)至少一些根据c)的所述区域或空腔进一步含有原代成纤维细胞，和/或 (xiii)至少一些根据c)的所述区域或空腔进一步含有角质形成细胞，其中根据(xii)和(xiii)的所述区域或空腔不重叠，更优选地，其中支持物是芯片、阵列诸如微阵列或纳米阵列、板诸如多孔板、或培养皿，和/或支持物是塑料支持物。 14.一种用于筛选适于调节皮肤伤口愈合的化合物的方法，包含以下步骤： A)在存在(i)从至少一个个体的皮肤伤口获得的伤口渗出物样本或伤口生物膜样本以及(ii)至少一种候选化合物的情况下，测量原代成纤维细胞的增殖，和 B)如果在A)中获得的值比在没有至少一种候选化合物的情况下建立的对照值高至少10％或低至少10％，则执行以下方法步骤B1)至B5)中的一个、两个、三个、四个或五个、或以下方法步骤B1)至B6)中的一个、两个、三个、四个、五个或六个： B1)在存在(i)从至少一个个体的皮肤伤口获得的伤口渗出物样本或伤口生物膜样本以及(ii)所述至少一种候选化合物的情况下，测量由原代成纤维细胞形成成纤维细胞衍生基质， B2)在存在(i)从至少一个个体的皮肤伤口获得的伤口渗出物样本或伤口生物膜样本以及(ii)所述至少一种候选化合物的情况下，测量角质形成细胞的增殖， B3)测量与(i)从至少一个个体的皮肤伤口获得的伤口渗出物样本或伤口生物膜样本以及(ii)所述至少一种候选化合物一起孵育的巨噬细胞上清液中的一种或多种M1标志物和一种或多种M2标志物的量，其中所述巨噬细胞与成纤维细胞共培养，其中所述一种或多种M1标志物选自CXCL10和IL-23p19，并且所述一种或多种M2标志物是选自CCL22和CCL18， B4)测量与(i)从至少一个个体的皮肤伤口获得的伤口渗出物样本或伤口生物膜样本以及(ii)所述至少一种候选化合物一起孵育的巨噬细胞上的一种或多种M1细胞表面标志物和一种或多种M2细胞表面标志物的量和/或频率分布，其中所述巨噬细胞与成纤维细胞共培养，其中所述一种或多种M1细胞表面标志物选自CD38、CD64和CD197，其中所述一种或多种M2细胞表面标志物选自CD200受体、CD206和CD209， B5)测量与(i)从至少一个个体的皮肤伤口获得的伤口渗出物样本或伤口生物膜样本以及(ii)所述至少一种候选化合物一起孵育的巨噬细胞中一种或多种M1标志物mRNA和一种或多种M2标志物mRNA的表达水平，其中所述巨噬细胞与成纤维细胞共培养，其中所述一种或多种M1标志物mRNA选自CD38、CD64、CD197、CXCL10和IL-23p19，并且所述一种或多种M2标志物mRNA选自CD200受体(CD200R)、CD206、CD209、CCL22和CCL18， B6)测量与(i)从至少一个个体的皮肤伤口获得的伤口渗出物样本或伤口生物膜样本以及(ii)所述至少一种候选化合物一起孵育的巨噬细胞上清液中的一种或多种细胞因子标志物的量，其中所述巨噬细胞与成纤维细胞共培养，并且其中所述一种或多种细胞因子标志物选自IL-1α、IL-1β和TNF-α。其中，如果在B1)至B5)、或B1)至B6)中获得的至少一个值比在没有候选化合物的情况下建立的对照值高至少10％或低至少10％，将所述化合物识别为适于调节皮肤伤口愈合，优选地，其中根据权利要求10执行根据A)和B1)至B5)、或A)和B1)至B6)的方法步骤。 15.根据权利要求14所述的用于筛选化合物的方法，其中 a)所述至少一种化合物选自小分子、激素、糖、蛋白质、肽、聚合物、生物材料诸如蛋白质、肽、抗体或其衍生物、或其缀合物、核酸诸如病毒剂、或一种或多种细胞，诸如一种或多种遗传修饰的细胞，和/或 b)所述至少一种化合物选自免疫调节剂、更优选免疫抑制剂、抗生素、抗感染剂、生长因子、细胞因子、抗增殖剂和刺激增殖的药剂，和/或 c)所述至少一种化合物是单一化合物，或2、3、4、5或更多种不同的化合物，其中2、3、4、5或更多种不同的化合物可以存在于单一组合物中、或存在于2种或更多种单独的组合物中，和/或 d)所述值至少重复三次测量和/或在B)中建立统计学显著性，更优选地，其中p≤0.05、p≤0.001或p≤0.001，和/或如果在B1)至B5)、或B1)至B6)中获得的至少一个值比在没有所述候选化合物的情况下建立的对照值高至少10％或低至少10％，则将所述化合物识别为适于调节皮肤伤口愈合，所述对照值具有统计学显著性，更优选地其中p≤0.05、p≤0.001或p≤0.001。
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