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原文传递一种柯萨奇病毒A6型和A10型IgM抗体联合检测试剂盒及其制备方法

专利名称：	一种柯萨奇病毒A6型和A10型IgM抗体联合检测试剂盒及其制备方法
摘要：	本发明公开了一种柯萨奇病毒A6型和A10型IgM抗体联合检测试剂盒及其制备方法，可以方便一起携带检测卡和样本稀释液，且所述试纸卡槽的设置可以快速、精准的将所述试纸条放置到所述卡体中，所述卡盖与所述卡体的设置可以方便更换所述试纸条，可以重复利用，既节约成本，也符合环保的要求；所述调节板的设置可以保持所述试纸条在所述卡体中水平，有利于全血更好的爬升、层析。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	潍坊市康华生物技术有限公司
发明人：	杨致亭;黎村艳;姚立琼;吴佳玲;李贞;杨明霞
专利状态：	有效
申请日期：	2019-04-09T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-07T00:00:00+0800
申请号：	CN201910278264.6
公开号：	CN109856408A
代理机构：	潍坊中润泰专利代理事务所(普通合伙)
代理人：	李光林
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	261023 山东省潍坊市经济开发区月河路699号
主权项：	1.一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体的检测试剂盒，包括盒体，所述盒体内设有第一凹槽，所述第一凹槽放置检测卡，所述盒体内设有第二凹槽，所述第二凹槽放置样本稀释液的瓶体；所述检测卡包括卡盖，与所述卡盖卡接的卡体，以及能更换的位于所述卡盖与所述卡体之间的试纸条；其特征在于：所述卡盖上依次设有稀释液加样孔、样本加样孔、观测孔和安装标示孔，所述卡盖上设有与所述卡体卡接的第一卡接装置；所述卡体上设有与所述第一卡接装置卡接的第二卡接装置，所述卡体上还设有放置所述试纸条的试纸卡槽。 2.如权利要求1所述的一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体的检测试剂盒，其特征在于：所述第一卡接装置包括所述卡盖周边与所述卡体接触的一面设有卡接凹槽，所述卡盖内朝向所述卡体的一面设有若干卡接圆柱；所述第二卡接装置包括所述卡体周边朝向所述卡盖的一面上设有与所述卡接凹槽配合的卡接凸起，所述卡体上设有若干圆柱体，所述圆柱体内设有与所述卡接圆柱配合的圆柱凹槽。 3.如权利要求1所述的一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体的检测试剂盒，其特征在于：所述试纸卡槽包括第一试纸条限位板和第二试纸条限位板，所述第一试纸条限位板与所述第二试纸条限位板之间的距离为所述试纸条的宽度，所述第一试纸条限位板与所述第二试纸条限位板的两端分别设有固定挡板，两所述固定挡板之间的距离为所述试纸条的长度；所述试纸卡槽还包括若干保持所述试纸条水平的调节板；所述试纸卡槽还包括第一试纸条放置标识和第二试纸条放置标识，所述第一试纸条放置标识与所述第二试纸条放置标识位于同一水平线上，且所述第一试纸条放置标识、所述第二试纸条放置标识的两个相近端之间的距离为所述试纸条的宽度。 4.如权利要求1所述的一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体的检测试剂盒，其特征在于：所述第一凹槽设有取出槽。 5.如权利要求1所述的一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体的检测试剂盒，其特征在于：所述试纸条包括基层，所述基层上依次设有样品垫层、乳胶层、硝酸纤维素膜和吸水层，所述吸水层的上方覆盖设有专用标签条，所述乳胶层的上方覆盖设有白贴，所述样品垫层与所述稀释液加样孔和所述样本加样孔相对应；所述硝酸纤维素膜与所述观测孔相对应，所述专用标签条与所述安装标示孔相对应。 6.如权利要求5所述的一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体的检测试剂盒，其特征在于：所述样品垫层包括第一样品垫层，设置在所述第一样品垫层上方的第二样品垫层；所述第一样品垫层为滤血膜，所述第二样品垫层为经过样品垫层预处理液处理的垫层；所述乳胶层为固相有鼠抗人IgM单克隆抗体的聚酯膜；所述硝酸纤维素膜上设有检测线和质控线，所述检测线为包被重组柯萨奇病毒A6型抗原的检测线T1和包被重组柯萨奇病毒A10型抗原的检测线T2；所述质控线为包被羊抗鼠IgG抗体的质控线C。 7.一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体的检测试剂盒的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括以下步骤：步骤一、样本稀释液的制备；步骤二、样品垫层的制备（1）样品垫层预处理液的配制（2）第二样品垫层预处理将裁切好的玻璃纤维至浸泡于所述步骤（1）的样品垫层预处理液中，静置5～8分钟取出，经过干燥处理后封存备用；（3）第一样品垫层的处理将购买的滤血膜裁成宽长30cm，宽0.7cm的长条；步骤三、乳胶层的制备（1）微球活化；（2）将鼠抗人IgM单克隆抗体偶联至活化乳胶微球；步骤四、硝酸纤维素膜的制备（1）包被重组柯萨奇病毒A6型抗原：用pH7.2～7.5的PBS缓冲液将重组柯萨奇病毒A6型抗原稀释至0.2～0.4mg/mL固相于硝酸纤维素膜上，形成重组柯萨奇病毒A6型抗原检测线；（2）包被重组柯萨奇病毒A10型抗原：用pH7.2～7.5的PBS缓冲液将重组柯萨奇病毒A10型抗原稀释至0.3～0.5mg/mL固相于步骤（1）相应的硝酸纤维素膜上，形成重组柯萨奇病毒A10型抗原检测线；（3）包被羊抗鼠IgG抗体：用pH8.0～8.2的PBS缓冲液将羊抗鼠IgG抗体稀释至1.4～1.6mg/mL，并分别喷于所述步骤（2）相应的硝酸纤维素膜上，形成羊抗鼠IgG抗体质控线；五、试纸条的制备（1）在基层中间位置粘贴硝酸纤维素膜；（2）在基层上固定硝酸纤维素膜的一端粘贴吸水层，吸水层覆盖硝酸纤维素膜边沿约1.0～2.0mm；（3）吸水层上覆盖专用标签条；（4）在基层上硝酸纤维素膜的另一端粘贴乳胶层（鼠抗人IgM单克隆抗体的聚酯膜），乳胶层覆盖硝酸纤维素膜约1.0～2.0mm；（5）在基层靠近端面的位置粘贴第一样品垫层（滤血膜），宽度约7.0～7.5mm；（6）在基层上乳胶层的自由端粘贴第二样品垫层，第二样品垫层覆盖第一样品垫层并延伸至基层的端面，第二样品垫层覆盖乳胶层约1.0～2.0mm；（7）在乳胶层上方粘贴白贴，白贴完全覆盖乳胶层，白贴一端覆盖硝酸纤维素膜约2.0～3.0mm；（8）将上述步骤（7）得到的产品压平整后，在切条机上切成3.0～4.0mm宽的试纸条。 8.如权利要求7所述的一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体的检测试剂盒的制备方法，其特征在于：所述样本稀释液的制备：将3～5mg/mL酪蛋白、15～20mg/mL蔗糖、8～9µg/mL氯化钠和1～1.5mg/mL叠氮钠，用15～25mM缓冲液定容至100mL，调pH值为7.2～7.5。 9.如权利要求7所述的一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体的检测试剂盒的制备方法，其特征在于：所述样品垫层预处理液的配制：将0.1～0.2mg/mL的兔抗RBC，10～20g的PEG20000和0.3～0.5mg/mL的Tween20，用15～25mMPBS缓冲液定容至1L，调pH值为7.2～7.5。 10.如权利要求7所述的一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体的检测试剂盒的制备方法，其特征在于：所述步骤三中微球活化的步骤为： ①分别称取1-乙基-3（3-二甲氨丙基）碳二亚胺（EDC）和N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）各10mg，分别装于两个干净离心管中； ②取羧基乳胶微球悬浊液1～1.5mL，移至干净离心管中，以10000～12000转/分，离心5～8分钟，小心弃去上清； ③用80～100µL活化缓冲液洗涤微球，以10000～12000转/分，离心5～8分钟，小心弃去上清，共洗涤2次； ④在离心管底部轻轻地加80～100µL活化缓冲液，不必吹打微球； ⑤将离心管置于超声波下，声浴60～70秒； ⑥用去离子水将EDC和NHS配成浓度为50～60mg/mL的溶液；分别取10～15µL NHS溶液和10～15µL EDC溶液，加入到乳胶微球悬浊液中，暗室孵浴15～20分钟； ⑦再以10000～12000转/分，离心5～8分钟，小心弃去上清；所述将鼠抗人IgM单克隆抗体偶联至活化乳胶微球的步骤为： ①用配对缓冲液将鼠抗人IgM单克隆抗体配成终浓度为90～100µg/mL的溶液，配500～600µL； ②用500～600µL配对缓冲液重悬微球，震荡； ③用500～600µL配对缓冲液洗涤微球，以10000～12000转/分，离心5～8分钟，小心弃去上清，共洗涤2次； ④用500～600µL配对缓冲液重悬微球，震荡； ⑤将之前配好的500～600µL鼠抗人IgM单克隆抗体加入到乳胶微球管； ⑥将离心管置水平振荡器上，室温，暗室，轻轻振荡2小时； ⑦用PBS/BSA洗涤微球2次； ⑧用PBS/BSA重悬微球，如需较长时间保存，可用0.5～0.6mg/mL叠氮钠保存。
所属类别：	发明专利