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原文传递一种柯萨奇病毒A6型和A10型IgM抗体联合检测的试剂条及其制备方法

专利名称：	一种柯萨奇病毒A6型和A10型IgM抗体联合检测的试剂条及其制备方法
摘要：	本发明提供了一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体检测的试纸条及其制备方法，第一样品垫层为滤血膜，滤血膜表面凹凸不平，通过物理吸附作用滞留红细胞；再经过第二样品垫层，其预处理液在PBS缓冲液体系基础上加入兔抗人红细胞多克隆抗体，可与人红细胞特异结合，进一步消除全血样本中的红细胞，实现了全血样本的检测。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	潍坊市康华生物技术有限公司
发明人：	杨致亭;吴佳玲;李贞;姜小建;赵建忠;杨明霞
专利状态：	有效
申请日期：	2019-04-09T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-21T00:00:00+0800
申请号：	CN201910280045.1
公开号：	CN109917140A
代理机构：	潍坊中润泰专利代理事务所(普通合伙)
代理人：	李光林
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	261023 山东省潍坊市经济开发区月河路699号
主权项：	1.一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体检测的试纸条，所述试纸条包括基层，其特征在于：所述基层上依次设有样品垫层、乳胶层、硝酸纤维素膜和吸水层；所述乳胶层为固相有鼠抗人IgM单克隆抗体的聚酯膜；且所述乳胶层的上方覆盖设有白贴。 2.如权利要求1所述的一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体检测的试纸条，其特征在于：所述样品垫层包括固定在所述基层上的第一样品垫层，所述第一样品垫层为滤血膜；固定在所述基层上且覆盖在所述第一样品垫层上方的第二样品垫层；所述第二样品垫层的面积大于所述第一样品垫层的面积，所述第二样品垫层为经过样品垫层预处理液处理的垫层。 3.如权利要求1或2所述的一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体检测的试纸条，其特征在于：所述硝酸纤维素膜上设有检测线和质控线，所述检测线为包被重组柯萨奇病毒A6型抗原的检测线T1和包被重组柯萨奇病毒A10型抗原的检测线T2；所述质控线为包被羊抗鼠IgG抗体的质控线C。 4.如权利要求3所述的一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体检测的试纸条，其特征在于：所述吸水层的上方覆盖设有专用标签条。 5.一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体检测的试纸条的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括以下步骤：步骤一：在基层中间位置粘贴硝酸纤维素膜；步骤二：在基层上固定硝酸纤维素膜的一端粘贴吸水层，吸水层覆盖硝酸纤维素膜边沿约1.0～2.0mm；步骤三：吸水层上覆盖专用标签条；步骤四：在基层上硝酸纤维素膜的另一端粘贴乳胶层，乳胶层覆盖硝酸纤维素膜约1.0～2.0mm；步骤五：在基层靠近端面的位置粘贴第一样品垫层，宽度约7.0～7.5mm；步骤六：在基层上乳胶层的自由端粘贴第二样品垫层，第二样品垫层覆盖第一样品垫层并延伸至基层的端面，第二样品垫层覆盖乳胶层约1.0～2.0mm；步骤七：在乳胶层上方粘贴白贴，白贴完全覆盖乳胶层，白贴一端覆盖硝酸纤维素膜约2.0～3.0mm；步骤八：将上述步骤七得到的产品压平整后，在切条机上切成3.0～4.0mm宽的试纸条。 6.如权利要求5所述的一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体检测的试纸条的制备方法，其特征在于：所述步骤一中硝酸纤维素膜的制备步骤如下：（1）包被重组柯萨奇病毒A6型抗原：用pH7.2～7.5的PBS缓冲液将重组柯萨奇病毒A6型抗原稀释至0.2～0.4mg/mL固相于硝酸纤维素膜上，形成重组柯萨奇病毒A6型抗原检测线；（2）包被重组柯萨奇病毒A10型抗原：用pH7.2～7.5的PBS缓冲液将重组柯萨奇病毒A10型抗原稀释至0.3～0.5mg/mL固相于步骤（1）相应的硝酸纤维素膜上，形成重组柯萨奇病毒A10型抗原检测线；（3）包被羊抗鼠IgG抗体：用pH8.0～8.2的PBS缓冲液将羊抗鼠IgG抗体稀释至1.4～1.6mg/mL，并分别喷于所述步骤（2）相应的硝酸纤维素膜上，形成羊抗鼠IgG抗体质控线。 7.如权利要求5所述的一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体检测的试纸条的制备方法，其特征在于：步骤四中乳胶层的制备方法如下：（1）微球活化；（2）将鼠抗人IgM单克隆抗体偶联至活化乳胶微球。 8.如权利要求7所述的一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体检测的试纸条的制备方法，其特征在于：所述微球活化步骤为： ①分别称取1-乙基-3（3-二甲氨丙基）碳二亚胺（EDC）和N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）各10mg，分别装于两个干净离心管中； ②取羧基乳胶微球悬浊液1～1.5mL，移至干净离心管中，以10000～12000转/分，离心5～8分钟，小心弃去上清； ③用80～100µL活化缓冲液洗涤微球，以10000～12000转/分，离心5～8分钟，小心弃去上清，共洗涤2次； ④在离心管底部轻轻地加80～100µL活化缓冲液，不必吹打微球； ⑤将离心管置于超声波下，声浴60～70秒； ⑥用去离子水将EDC和NHS配成浓度为50～60mg/mL的溶液，分别取10～15µL NHS溶液和10～15µL EDC溶液，加入到乳胶微球悬浊液中，暗室孵浴15～20分钟； ⑦再以10000～12000转/分，离心5～8分钟，小心弃去上清。 9.如权利要求7所述的一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体检测的试纸条的制备方法，其特征在于：所述将鼠抗人IgM单克隆抗体偶联至活化乳胶微球的步骤为： ①用配对缓冲液将鼠抗人IgM单克隆抗体配成终浓度为90～100µg/mL的溶液，配500～600µL； ②用500～600µL配对缓冲液重悬微球，震荡； ③用500～600µL配对缓冲液洗涤微球，以10000～12000转/分，离心5～8分钟，小心弃去上清，共洗涤2次； ④用500～600µL配对缓冲液重悬微球，震荡； ⑤将之前配好的500～600µL鼠抗人IgM单克隆抗体加入到乳胶微球管； ⑥将离心管置水平振荡器上，室温，暗室，轻轻振荡2小时； ⑦用PBS/BSA洗涤微球2次； ⑧用PBS/BSA重悬微球，如需较长时间保存，可用0.5～0.6mg/mL叠氮钠保存。 10.如权利要求5所述的一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体检测的试纸条的制备方法，其特征在于：所述步骤五、步骤六中第一样品垫层与第二样品垫层的制备方法如下：（1）样品垫层预处理液的配制；将0.1～0.2mg/mL的兔抗RBC，10～20g的PEG20000和0.3～0.5mg/mL的Tween20，用15～25mMPBS缓冲液定容至1L，调pH值为7.2～7.5；（2）第二样品垫层的预处理：将裁切好的玻璃纤维至浸泡于上述制作的样品垫层预处理液中，静置5～8分钟取出，经过干燥处理后封存备用；（3）第一样品垫层（滤血膜）的处理：将购买的滤血膜裁成宽长30cm，宽0.7cm的长条。
所属类别：	发明专利