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原文传递一种用于宫颈癌辅助诊断的免疫化学染色试剂盒

专利名称：	一种用于宫颈癌辅助诊断的免疫化学染色试剂盒
摘要：	本发明涉及液基细胞学免疫细胞化学领域，具体涉及到一种用于宫颈癌辅助诊断的免疫组织化学试剂盒。本发明中提供了一种即用型抗体工作液，包括抗体试剂、牛血清白蛋白、非还原性糖、甜菜碱、环糊精、中性无机盐、表面活性剂、防腐剂；其中所述抗体试剂为试剂A或试剂B；所述试剂A为p16INK4a单克隆抗体和Ki‑67单克隆抗体的PBS缓冲溶液；所述试剂B为辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠二抗和碱性磷酸酶标记的羊抗兔二抗的PBS缓冲溶液；所述PBS缓冲溶液的pH值为7.2～7.8。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	湖北;42
申请人：	湖北泰康医疗设备有限公司
发明人：	肖国林
专利状态：	有效
申请日期：	2019-03-05T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-07T00:00:00+0800
申请号：	CN201910162981.2
公开号：	CN109856383A
代理机构：	上海微策知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	王小穗
分类号：	G01N33/52(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	432100 湖北省孝感市市辖区高新区崇礼路55号
主权项：	1.一种即用型抗体工作液，其特征在于，包括抗体试剂、牛血清白蛋白、非还原性糖、甜菜碱、环糊精、表面活性剂；其中所述抗体试剂为试剂A或试剂B；所述试剂A为p16INK4a单克隆抗体和Ki-67单克隆抗体的PBS缓冲溶液；所述试剂B为辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠二抗和碱性磷酸酶标记的羊抗兔二抗的PBS缓冲溶液；所述PBS缓冲溶液的pH值为7.2～7.8。 2.如权利要求1所述的即用型抗体工作液，其特征在于，包括pH值为7.2～7.8的PBS缓冲溶液、p16INK4a单克隆抗体、Ki-67单克隆抗体、牛血清白蛋白、非还原性糖、甜菜碱、环糊精、表面活性剂；其中，所述p16INK4a抗体浓度为0.1-1.2mg/L；所述Ki-67抗体浓度为0.1-1.3mg/L；所述牛血清白蛋白浓度为0.2-2.5g/L；所述非还原性糖浓度为1-8g/L；所述甜菜碱浓度为2-4g/L；所述环糊精浓度为0.1-2.5g/L；所述表面活性剂含量0.01-1wt％。 3.如权利要求1所述的即用型抗体工作液，其特征在于，包括pH值为7.2～7.8的PBS缓冲溶液、辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠二抗、碱性磷酸酶标记的羊抗兔二抗、牛血清白蛋白、非还原性糖、甜菜碱、环糊精、表面活性剂；其中，所述辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠二抗浓度为0.5-4mg/L；所述碱性磷酸酶标记的羊抗兔二抗浓度为1-4mg/L；所述牛血清白蛋白浓度为0.2-2.5g/L，所述非还原性糖浓度1-8g/L；所述甜菜碱浓度2-4g/L；所述环糊精浓度0.1-2g/L；所述表面活性剂含量0.01-0.5wt％。 4.如权利要求3所述的即用型抗体工作液，其特征在于，所述表面活性剂为非离子型表面活性剂；所述非离子型表面活性剂为脂肪酸酯类表面活性剂。 5.如权利要求1所述的即用型抗体工作液，其特征在于，所述非还原性糖为海藻糖和/或蔗糖。 6.一种用于宫颈癌辅助诊断的免疫化学染色试剂盒，其特征在于，包括如权利要求2和3所述的即用型抗体工作液、快速无蛋白封闭液、稳定型辣根过氧化物酶显色试剂、即用型碱性磷酸酶显色试剂、水性封片剂。 7.如权利要求6所述的用于宫颈癌辅助诊断的免疫化学染色试剂盒，其特征在于，所述快速无蛋白封闭液包含缓冲溶液、海藻糖、PEG、PVP、吐温；其中所述缓冲溶液为pH值为7.2～7.8的PBS缓冲液或Tris-HCl缓冲液；所述海藻糖浓度1-25g/L；所述PEG和PVP的浓度为0-12g/L，且不同时为零；所述吐温含量0.1-5wt％。 8.如权利要求6或7所述的用于宫颈癌辅助诊断的免疫化学染色试剂盒的使用方法，其特征在于，包括如下步骤： 1)取样本制成细胞涂片并且固定，然后用过氧化氢处理，并室温孵育10min； 2)对第一步前处理得到的细胞涂片用快速无蛋白封闭液进行封闭5-30min，然后去除快速无蛋白封闭液，用含有p16INK4a单克隆抗体和Ki-67单克隆抗体的如权利要求2所述的即用型抗体工作液37℃孵育30-80min，PBS缓冲液洗涤；然后用含有羊抗鼠二抗和羊抗兔二抗的如权利要求3所述的即用型抗体工作液37℃孵育5-40min，PBS缓冲液洗涤； 3)取稳定型辣根过氧化物酶显色试剂滴加到待测样品上，37℃避光孵育，然后用显微镜观察显色至细胞质棕色信号强度，PBS缓冲液洗涤停止显色，然后用即用型碱性磷酸酶显色试剂滴加到待测样品上，37℃避光孵育，显微镜下观察显色至细胞核蓝紫色信号强度，PBS缓冲液洗涤停止显色；然后苏木素复染，洗涤后水性封片剂封片，显微镜下观察； 4)结果判定标准：p16INK4a/Ki-67双染阳性细胞表现为细胞质棕色且细胞核蓝紫色；仅细胞核蓝紫色或仅细胞质及细胞核棕色，以及细胞未显色均为阴性；当涂片中出现一个或多个双染阳性细胞即判定为该病例为双染阳性。 9.如权利要求8所述的用于宫颈癌辅助诊断的免疫化学染色试剂盒的使用方法，其特征在于，第3步中所述稳定型辣根过氧化物酶显色试剂包括：DAB反应液，DAB底物，DAB色原。 10.如权利要求8所述的用于宫颈癌辅助诊断的免疫化学染色试剂盒的使用方法，其特征在于，第一步中所述固定过程采用95～99wt％乙醇或4wt％多聚甲醛。
所属类别：	发明专利