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原文传递一种多模式捕获、连续强洗脱糖基化肽和磷酸化肽的方法

专利名称：	一种多模式捕获、连续强洗脱糖基化肽和磷酸化肽的方法
摘要：	本发明提出一种多模式捕获、连续强洗脱糖基化肽和磷酸化肽的方法，具体步骤如下，将修饰了钛离子和半胱氨酸的强磁响应性纳米材料与富集缓冲溶液配成分散液，将其与目标糖基化肽段、标准磷酸化肽段混合孵育40‑50分钟。在磁铁的辅助下，用富集缓冲液将材料清洗，以乙腈体积占比为1%‑80%，三氟乙酸为0.1%‑5%的体系作为洗脱液Ⅰ，再以体积比为1%‑10%氨水作为洗脱液Ⅱ，两个洗脱液分别点靶并混合点靶，进行质谱分析。本发明可以实现同时大规模鉴定糖基化蛋白质和磷酸化肽蛋白质，在翻译后修饰蛋白质组学中具有广阔的应用前景。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	上海;31
申请人：	复旦大学
发明人：	邓春晖;王紫丹;孙念荣;王嘉雯
专利状态：	有效
申请日期：	2018-12-13T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-07T00:00:00+0800
申请号：	CN201811523888.1
公开号：	CN109855929A
代理机构：	上海正旦专利代理有限公司
代理人：	张磊
分类号：	G01N1/28(2006.01);G;G01;G01N;G01N1
申请人地址：	200433 上海市杨浦区邯郸路220号
主权项：	1.一种多模式捕获、连续强洗脱糖基化肽和磷酸化肽的方法，其特征在于具体步骤如下：称取10mg修饰钛离子和半胱氨酸功能基团的强磁响应性纳米材料与1mL的富集缓冲液配置材料分散液，取8-15μL该材料分散液、目标糖基化肽段和磷酸化肽段在37℃下混合并孵育40-50分钟，在磁铁的作用下，利用富集缓冲液洗涤材料，用洗脱液Ⅰ、洗脱液Ⅱ洗脱，将洗脱液Ⅰ、洗脱液Ⅱ分别点靶，再将洗脱液Ⅰ、洗脱液Ⅱ混合点靶，分别进行质谱分析；其中，富集缓冲液为含有体积比85%-95%乙腈和体积比0.1%-5%三氟乙酸；洗脱液Ⅰ为含有1%-80%乙腈体积比和为0.1%-5%三氟乙酸（甲酸）体积比的缓冲溶液；洗脱液Ⅱ是含有体积比为1-10%的氨水。 2.根据权利要求1所述的一种多模式捕获、连续强洗脱糖基化肽和磷酸化肽的方法，其特征在于，所述的修饰钛离子和半胱氨酸功能基团的强磁响应性纳米材料的合成方法，具体步骤如下：（1）将六水合三氯化铁充分溶解于乙二醇里，加入无水醋酸钠，经过超声搅拌后，转移至反应釜中，在100-450℃下加热10-20小时，反应完毕后，待反应釜冷却到室温，用去离子水和无水乙醇充分洗涤，并于30-60℃真空干燥；（2）将步骤（1）中所得产物超声分散在含有三羟甲基氨基甲烷和多巴胺盐酸盐的溶剂中，常温下搅拌3-20小时，待反应结束，用去离子水和无水乙醇充分洗涤，并于30-60℃真空干燥；（3）将步骤（2）中所得产物超声分散在含有氯金酸的水溶液中，在50-95℃水浴搅拌下，反应经过3-15小时，待温度降低到常温，用去离子水和无水乙醇充分洗涤，并于30-60℃真空干燥；（4）将步骤（3）中所得产物超声分散在含有硫酸钛的水溶液中，在常温下搅拌0.5-5小时，将所得产物用去离子水和无水乙醇充分洗涤，并于30-60℃真空干燥；（5）将步骤（4）中所得产物超声分散在含有半胱氨酸的水溶液中，在常温下搅拌5-30小时，将所得产物用去离子水和无水乙醇充分洗涤，并于30-60℃真空干燥。 3.根据权利要求2所述的一种多模式捕获、连续强洗脱糖基化肽和磷酸化肽的方法，其特征在于，步骤（2）中的溶剂为乙醇，去离子水或乙醇/水混合溶液中的一种或几种。 4.根据权利要求2所述的一种多模式捕获、连续强洗脱糖基化肽和磷酸化肽的方法，其特征在于，步骤（2）中所述步骤（1）所得产物与三羟甲基氨基甲烷的质量比为10:1-1: 5，步骤（2）中所述步骤（1）所得产物与多巴胺盐酸盐的质量比为1:1-1:10。 5.根据权利要求2所述的一种多模式捕获、连续强洗脱糖基化肽和磷酸化肽的方法，其特征在于，步骤（3）中所述步骤（2）所得产物与氯金酸的质量比为4:1-1:2。 6.根据权利要求2中所述的一种多模式捕获、连续强洗脱糖基化肽和磷酸化肽的方法，其特征在于，步骤（3）中的产物与步骤（4）中的硫酸钛的质量比为1:500-1:200。 7.根据权利要求2中所述的一种多模式捕获、连续强洗脱糖基化肽和磷酸化肽的方法，其特征步骤在于步骤（4）中的产物与步骤（5）中的半胱氨酸的质量比为1:50-2:1。
所属类别：	发明专利