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原文传递可放大电化学信号的电极修饰方法及其应用

专利名称：	可放大电化学信号的电极修饰方法及其应用
摘要：	本发明公开了一种可放大电化学信号的电极修饰方法，包括：将miRNA‑21适配体溶液滴加到金电极表面，冲洗吹干；滴加巯基乙醇溶液，冲洗吹干；浸泡于信号促进液中，冲洗吹干；滴加亚甲基蓝，冲洗吹干，即得修饰电极；其中，信号促进液的制备方法为：将羧基化氧化石墨烯、铝钛合金、多颗磁珠加入到乙酸水溶液中，超声处理后，置于低压环境中，并同时通入H2和O2，取滤液干燥得粉末，粉末的饱和溶液为促进液。公开一种修饰电极检测miRNA‑21溶液的浓度的方法。本发明具有放大电化学信号，以提高检测灵敏度的有益效果。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广西;45
申请人：	广西师范学院
发明人：	肖琦;黄珊;李家文;金晓宇
专利状态：	有效
申请日期：	2019-03-07T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-07T00:00:00+0800
申请号：	CN201910172086.9
公开号：	CN109856214A
代理机构：	北京远大卓悦知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	靳浩
分类号：	G01N27/327(2006.01);G;G01;G01N;G01N27
申请人地址：	530001 广西壮族自治区南宁市西乡塘区明秀东路175号
主权项：	1.可放大电化学信号的电极修饰方法，其特征在于，包括以下步骤： a、将浓度为2μM的miRNA-21适配体溶液滴加到金电极表面，置于4℃环境中12h后，用PH为6.8的的PBS溶液冲洗50s，用超纯水冲洗干净，用氮气吹干； b、将浓度为1mM的巯基乙醇溶液滴加到步骤a中的金电极表面，直至金电极表面布满巯基乙醇溶液，置于4℃环境中1h后，用PH为6.8的PBS溶液冲洗50s，用超纯水冲洗干净，用氮气吹干； c、将步骤b中的金电极表面浸泡于信号促进液中，于80℃下静置6h，再用PH为6.8的PBS溶液冲洗50s，用超纯水冲洗干净，再用氮气吹干；其中，信号促进液的制备方法为：将羧基化氧化石墨烯、铝钛合金、多颗磁珠加入到浓度为25mM的乙酸水溶液中，得到混合液，将混合液置于超声频率为60KHz下超声处理1h后，置于真空度为500Pa的环境中，并同时向混合液中每隔10min通入H2和O2 2min，一共处理4h，H2和O2流量均为2L/min，过滤去除滤渣，干燥得到粉末，将粉末加入到超纯水中，并于超声频率为100KHz下超声处理1h，得到粉末的饱和溶液，即为促进液； d、将浓度为1mM的亚甲基蓝滴加到步骤d中的金电极表面，置于4℃环境中100min后，用PH为6.8的PBS溶液冲洗50s，用超纯水冲洗干净，用氮气吹干，即得修饰电极。 2.如权利要求1所述的可放大电化学信号的电极修饰方法，其特征在于，还包括：在步骤一之前，对金电极进行以下处理：将金电极置于KH2PO4浓度为3μM、KCl浓度为5μM的超纯水溶液中，且温度为65℃下浸泡40min，用超纯水冲洗后，再置于乙酸浓度为5μM、硅酸浓度为2μM的超纯水溶液中，且温度为80℃下浸泡60min，用超纯水冲洗后，在抛光布上用0.05μm的抛光粉打磨，再用超纯水冲洗干净。 3.如权利要求1所述的可放大电化学信号的电极修饰方法，其特征在于，羧基化氧化石墨烯的制备方法为：将氧化石墨分散于超纯水中，超声处理分散形成均匀的黄色透明胶体溶液，即得氧化石墨烯，然后加入NaOH和一氯乙酸超声处理，使氧化石墨烯上的羟基和环氧基转化为羧基，然后热过滤除去杂质离子，蒸发掉多余水分，再在65℃下真空干燥得到羧基化氧化石墨烯，其中，氧化石墨、超纯水、NaOH、一氯乙酸的质量体积比为100mg:100mL:6.0g:5.0g。 4.如权利要求1至3任一项所述的电极修饰方法制备的修饰电极在检测miRNA-21溶液的浓度的应用。 5.应用如权利要求1至3任项所述的电极修饰方法制备的修饰电极检测miRNA-21溶液的浓度的方法，其特征在于，包括：步骤一、按照步骤a至步骤d制备多个修饰电极，分别向多个修饰电极表面滴加不同浓度的miRNA-21溶液，置于37℃环境中60min，再用PH为6.8的PBS溶液冲洗50s，用氮气吹干，得到多个检测电极；步骤二、以银氯化银电极和铂电极分别为参比电极和对电极，以步骤一的检测电极为工作电极，搭建多个三电极体系，采用交流阻抗法扫描得到多个交流阻抗曲线图，根据交流阻抗曲线图拟合得到每个浓度的miRNA-21溶液对应的阻抗值；步骤三、以浓度不为0的miRNA-21溶液的阻抗值减去浓度为0的miRNA-21溶液的阻抗值的差值为纵坐标，以miRNA-21溶液的浓度为横坐标，计算得到miRNA-21溶液的浓度与阻抗值的线性关系；步骤四、按照步骤a至步骤d制备一个修饰电极，向该修饰电极表面滴加10μL含有未知浓度的miRNA-21的待测样液，置于37℃环境中60min，再用PH为6.8的PBS溶液冲洗50s，用氮气吹干，得到多个检测电极；步骤五、以银氯化银电极和铂电极分别为参比电极和对电极，以步骤四中的检测电极为工作电极，搭建三电极体系，采用交流阻抗法扫描得到一个交流阻抗曲线图，根据交流阻抗曲线图拟合得到待测样液对应的阻抗值，以该阻抗值减去浓度为0的miRNA-21溶液的阻抗值，得到差值，将该差值代入步骤三中的线性关系，计算得到待测样液中miRNA-21的浓度。 6.如权利要求5所述的检测miRNA-21溶液的浓度的方法，其特征在于，miRNA-21的核苷酸序列为：5'-UAGCUUAUCAGACUGAUGUUGA-3'；miRNA-21适配体的核苷酸序列为：5'-TCAACATCAGTCTGATAAGCTATTT-(CH2)6-SH-3'。 7.如权利要求5所述的检测miRNA-21溶液的浓度的方法，其特征在于，步骤一中的miRNA-21溶液的浓度分别为0mol/L、2×10-12mol/L、5×10-12mol/L、1×10-11mol/L、2×10-11mol/L，向修饰电极表面滴加的miRNA-21溶液的体积为10μL。 8.如权利要求5所述的检测miRNA-21溶液的浓度的方法，其特征在于，步骤二和步骤五中扫描参数设置为：振幅为0.005V，频率为0.1～1000Hz的条件下，在反应介质液为含有[Fe(CN)6]3-和Fe(CN)64-的溶液中进行检测，其中，[Fe(CN)6]3-和Fe(CN)64-的总浓度为5mmol。
所属类别：	发明专利