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原文传递一种检测早期肺癌标记物NAP-2蛋白的电化学发光生物传感器及其制备方法

专利名称：	一种检测早期肺癌标记物NAP-2蛋白的电化学发光生物传感器及其制备方法
摘要：	本发明提供一种检测早期肺癌标记物NAP‑2蛋白的电化学发光生物传感器及其制备方法，包括：步骤1，制备对氨基苯甲酸修饰电极；步骤2，制备NAP‑2蛋白特异性识别探针：将TW和J1‑Ru加入DNA缓冲液中混合，加热杂交成TW/J1‑Ru，然后冷却至室温继续杂交得到TW/J1‑Ru探针；步骤3，将步骤1中对氨基苯甲酸修饰电极浸入到含有NHS和EDC的Tris‑HCl缓冲液中活化，得到活化的4‑ABA修饰电极浸入步骤2中所制得的TW/J1‑Ru探针溶液中修饰，再进行封闭，得到电化学发光生物传感器。本发明能对早期肺癌标志物NAP‑2蛋白进行即时检测，灵敏度高、特异性强且简单廉价。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	陕西;61
申请人：	西北大学
发明人：	马芬;陈玉;孙丽娜
专利状态：	有效
申请日期：	2019-01-30T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-07T00:00:00+0800
申请号：	CN201910094175.6
公开号：	CN109856210A
代理机构：	西安通大专利代理有限责任公司
代理人：	徐文权
分类号：	G01N27/327(2006.01);G;G01;G01N;G01N27
申请人地址：	710069 陕西省西安市太白北路229号
主权项：	1.一种检测早期肺癌标记物NAP-2蛋白的电化学发光生物传感器的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1，将工作电极置于带重氮阳离子的对氨基苯甲酸溶液中，通过循环伏安扫描法制备得到对氨基苯甲酸修饰电极；步骤2，制备NAP-2蛋白特异性识别探针：将TW和J1-Ru加入DNA缓冲液中混合，加热杂交成TW/J1-Ru，然后冷却至室温继续杂交得到NAP-2蛋白特异性识别探针，命名为TW/J1-Ru探针；步骤3，电化学发光传感器的组装；步骤3.1，将步骤1中对氨基苯甲酸修饰电极浸入到含有NHS和EDC的Tris-HCl缓冲液中活化，得到活化的4-ABA修饰电极；步骤3.2，将活化后的4-ABA修饰电极浸入步骤2中所制得的TW/J1-Ru探针溶液中修饰，得到TW/J1-Ru/4-ABA修饰电极；步骤3.3，将含有牛血清蛋白的DNA缓冲液滴到步骤3.2所得TW/J1-Ru/4-ABA修饰电极表面进行封闭，得到电化学发光生物传感器。 2.根据权利要求1所述的检测早期肺癌标记物NAP-2蛋白的电化学发光生物传感器的制备方法，其特征在于，步骤1包括如下步骤：步骤1.1，先将对氨基苯甲酸溶于HCl溶液中，再加入NaNO2，冰水浴且通氮气条件下搅拌反应5-20min，得到带重氮阳离子的对氨基苯甲酸溶液；对氨基苯甲酸和NaNO2的摩尔比为1：(0.8-1.2)；步骤1.2，以步骤1.1制备的带重氮阳离子的对氨基苯甲酸溶液为电解液，以工作电极、对电极和参比电极组成的三电极体系进行循环伏安扫描，得到对氨基苯甲酸修饰电极。 3.根据权利要求1所述的检测早期肺癌标记物NAP-2蛋白的电化学发光生物传感器的制备方法，其特征在于，步骤1中，工作电极为玻碳电极、石墨电极、ITO电极和贵金属电极中的一种。 4.根据权利要求1所述的检测早期肺癌标记物NAP-2蛋白的电化学发光生物传感器的制备方法，其特征在于，步骤2中，TW和J1-Ru的摩尔比为1：(1.1-1.5)。 5.根据权利要求1所述的检测早期肺癌标记物NAP-2蛋白的电化学发光生物传感器的制备方法，其特征在于，步骤2中， TW：5′-NH2-(CH2)6-O-TCT CCA GCG TCG AGG TTT TCT GGT ATT ATA CCA GCC GTT ACGCAA TCC TTC TCG AGC TAAA-3'； J1-Ru:Ru-HN-(CH2)6-O-5'-TTT AGC TCG AGA CGA CGC TGG AGA-3'。 6.根据权利要求1所述的检测早期肺癌标记物NAP-2蛋白的电化学发光生物传感器的制备方法，其特征在于，步骤2中，先在60-90℃条件下加热杂交2-10min，然后冷却至室温继续杂交10-15h。 7.根据权利要求1所述的检测早期肺癌标记物NAP-2蛋白的电化学发光生物传感器的制备方法，其特征在于，步骤3.1中，活化时间为0.5-2h。 8.根据权利要求1所述的检测早期肺癌标记物NAP-2蛋白的电化学发光生物传感器的制备方法，其特征在于，步骤3.2中，TW/J1-Ru探针溶液的浓度为0.01-2μM，修饰时间为0.5-2h。 9.根据权利要求1所述的检测早期肺癌标记物NAP-2蛋白的电化学发光生物传感器的制备方法，其特征在于，步骤3.3中，牛血清蛋白溶液质量浓度为0.05％-1％，封闭时间为30-60min。 10.权利要求1-9任一项所述的制备方法制备得到的检测早期肺癌标记物NAP-2蛋白的电化学发光生物传感器。
所属类别：	发明专利