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原文传递一种预测TAK1与药物协同影响细胞凋亡的方法

专利名称：	一种预测TAK1与药物协同影响细胞凋亡的方法
摘要：	本发明公开了一种预测TAK1与药物协同影响细胞凋亡的方法。该方法包括如下步骤：(1)用TAK1抗体处理肿瘤组织，然后测定肿瘤组织中TAK1的表达水平，得到R1；同时，用TAK1抗体处理其肿瘤旁边的正常组织，再测定正常组织中TAK1的表达水平，得到R2；(2)比较R1和R2，若R1＜R2差异有显著性，则预测TAK1能与药物协同促进肿瘤细胞凋亡；反之，若R1＞R2差异有显著性，则预测TAK1不能与药物协同促进肿瘤细胞凋亡，并预测TAK1抑制剂与药物协同促进肿瘤细胞凋亡。该方法可根据肿瘤和瘤旁组织中TAK1的表达水平预测TAK1是否能有效协同药物促进细胞凋亡，为后续的科学研究奠定了基础。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广东;44
申请人：	广东省人民医院(广东省医学科学院)
发明人：	邸玉玮;李广华;骆新兰;李卓升;侯铁英;郑有为
专利状态：	有效
申请日期：	2019-04-03T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-07T00:00:00+0800
申请号：	CN201910264363.9
公开号：	CN109856351A
代理机构：	广州市华学知识产权代理有限公司
代理人：	刘瑜
分类号：	G01N33/15(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	510080 广东省广州市越秀区中山二路106号
主权项：	1.一种预测TAK1与药物协同影响细胞凋亡的方法，其特征在于，包括如下步骤： (1)用TAK1抗体处理肿瘤组织，然后测定肿瘤组织中TAK1的表达水平，得到R1；同时，用TAK1抗体处理其肿瘤旁边的正常组织，再测定正常组织中TAK1的表达水平，得到R2； (2)比较R1和R2，若R1＜R2差异有显著性，则预测TAK1能与药物协同促进与步骤(1)中的肿瘤组织来源相同的肿瘤细胞凋亡；反之，若R1＞R2差异有显著性，则预测TAK1不能与药物协同促进与步骤(1)中的肿瘤组织来源相同的肿瘤细胞凋亡，并预测TAK1抑制剂与药物协同促进与步骤(1)中的肿瘤组织来源相同的肿瘤细胞凋亡。 2.根据权利要求1所述的预测TAK1与药物协同影响细胞凋亡的方法，其特征在于：步骤(1)中所述的肿瘤组织为肾癌、结肠癌、卵巢癌、宫颈癌或乳腺癌；步骤(1)中所述的肿瘤旁的正常组织为去除对应肿瘤后的正常组织；步骤(2)中所述的药物为抗肿瘤药物；步骤(2)中所述的TAK1抑制剂为5Z-7-oxozeaenol，或使用TAK1基因编辑质粒沉默TAK1基因。 3.根据权利要求2所述的预测TAK1与药物协同影响细胞凋亡的方法，其特征在于：步骤(2)中所述的药物为紫杉醇。 4.根据权利要求1所述的预测TAK1与药物协同影响细胞凋亡的方法，其特征在于：步骤(1)中所述的TAK1的表达水平的测定为通过免疫组化，流式细胞术检测、定量PCR和免疫印迹中的至少一种方法进行测定；步骤(2)中所述的差异有显著性为通过如下方法进行判断：先进行方差齐性检验，若方差齐则使用两样本均数t检验比较，若方差不齐则使用t’检验比较，当P＜0.05时，认为差异有显著性。 5.根据权利要求1所述的预测TAK1与药物协同影响细胞凋亡的方法，其特征在于：在步骤(2)之后还包括进一步验证的步骤；所述的验证可通过如下任一种或两种方法实现： (a)免疫印迹法 TAK1/TAB1与药物联合使用：将与步骤(1)中的肿瘤组织来源相同的肿瘤细胞分别转染空载质粒、含有TAK1基因的质粒、以及含有TAK1和TAB1基因的质粒，然后将转染后的细胞培养48或72小时后加入药物处理9～18h，裂解细胞获得全细胞抽提物，再用免疫印迹法检测PARP剪切；若检测结果显示与转染空载质粒的肿瘤细胞相比，转染含有TAK1基因的质粒以及含有TAK1和TAB1基因的质粒的肿瘤细胞的PARP剪切增强，则验证TAK1与药物协同促进细胞凋亡；反之，若与转染空载质粒的肿瘤细胞相比，转染含有TAK1基因的质粒以及含有TAK1和TAB1基因的质粒的肿瘤细胞的PARP剪切减弱，则验证TAK1不能与药物协同促进肿瘤细胞凋亡； (b)流式细胞术 TAK1/TAB1与药物联合使用：将与步骤(1)中的肿瘤组织来源相同的肿瘤细胞分别转染空载质粒、含有TAK1基因的质粒、含有TAK1和TAB1基因的质粒、以及转染沉默TAK1基因的编辑质粒，同时向未转染质粒的肿瘤细胞中加入TAK1抑制剂，然后将细胞培养48或72小时后加入药物处理9～18h，用流式细胞仪检测细胞凋亡率；若检测结果显示与转染空载质粒的肿瘤细胞相比，转染含有TAK1基因的质粒以及含有TAK1和TAB1基因的质粒的肿瘤细胞的凋亡率升高，则验证TAK1与药物协同促进细胞凋亡；若检测结果显示与转染空载质粒的肿瘤细胞相比，转染含有TAK1基因的质粒以及含有TAK1和TAB1基因的质粒的肿瘤细胞的凋亡率降低，则验证TAK1不能与药物协同促进肿瘤细胞凋亡；若检测结果显示与转染空载质粒的肿瘤细胞相比，加入TAK1抑制剂或转染沉默TAK1基因的编辑质粒的细胞凋亡率升高，则验证TAK1抑制剂或沉默TAK1基因协同药物促进细胞凋亡；方法(a)和(b)中所述的药物为抗肿瘤药物；方法(a)和(b)中所述的加入的药物的用量为按其在体系中的终浓度为3～10μM计算；方法(b)中所述的TAK1抑制剂为5Z-7-oxozeaenol；方法(b)中所述的加入的TAK1抑制剂的用量为按其在体系中的终浓度为5～10μM计算。 6.用于测定肿瘤组织和瘤旁组织中TAK1的表达水平的试剂在制备用于预测TAK1与药物是否能协同影响肿瘤细胞凋亡的试剂盒中的应用。 7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述的试剂为TAK1抗体或免疫组化试剂；所述的免疫组化试剂为标记有辣根过氧化物酶和抗兔及抗小鼠免疫球蛋白的多聚体分子，DAB显色剂或显色缓冲液；所述的药物为抗肿瘤药物；所述的肿瘤为肾癌、结肠癌、卵巢癌、宫颈癌或乳腺癌。 8.一种用于预测TAK1与药物是否能够协同影响肿瘤细胞凋亡的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括用于测定肿瘤以及瘤旁组织中TAK1的表达水平的试剂；所述的试剂为TAK1抗体或免疫组化试剂；所述的免疫组化试剂为标记有辣根过氧化物酶和抗兔及抗小鼠免疫球蛋白的多聚体分子，DAB显色剂或显色缓冲液。 9.用于测定肿瘤和瘤旁组织中TAK1的表达水平的试剂在制备用于预测TAK1与药物是否能够共同用于治疗肿瘤患者的试剂盒中的应用，其特征在于：所述的试剂为TAK1抗体或免疫组化试剂；所述的免疫组化试剂为标记有辣根过氧化物酶和抗兔及抗小鼠免疫球蛋白的多聚体分子，DAB显色剂或显色缓冲液。 10.用于测定肿瘤和瘤旁组织中TAK1的表达水平的试剂在制备筛选与药物有协同促进肿瘤细胞凋亡作用的TAK1抑制剂的试剂盒中的应用，其特征在于：所述的试剂为TAK1抗体或免疫组化试剂；所述的免疫组化试剂为标记有辣根过氧化物酶和抗兔及抗小鼠免疫球蛋白的多聚体分子，DAB显色剂或显色缓冲液。
所属类别：	发明专利