详情

原文传递碳量子点的复合探针及检测白色念珠菌含量的方法

专利名称：	碳量子点的复合探针及检测白色念珠菌含量的方法
摘要：	一种碳量子点的复合探针及检测白色念珠菌含量的方法，属于检测技术领域。本发明的目的是以廉价的生物质玉米秸秆为碳源制备具有荧光的碳量子点，再以碳量子点为基础对其进行修饰制成复合探针，进而检测白色念珠菌的碳量子点的复合探针及检测白色念珠菌含量的方法。本发明首先制备碳量子点，然后对碳量子点氨基化，最后制备复合探针。本发明制备原料丰富低廉，制备过程简单，灵敏度高，解决了现有方法的问题如干扰因素多、操作复杂、耗时耗力等。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	吉林;22
申请人：	东北电力大学
发明人：	于大禹;王领;乔楠;王磊;张晓君;郑胜;周环宇
专利状态：	有效
申请日期：	2019-01-10T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-11T00:00:00+0800
申请号：	CN201910021828.8
公开号：	CN109870434A
代理机构：	吉林长春新纪元专利代理有限责任公司
代理人：	白冬冬
分类号：	G01N21/64(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	132012 吉林省吉林市船营区长春路169号
主权项：	1.一种碳量子点的复合探针，其特征在于： (1)碳量子点的制备：将0.3g已粉碎的玉米秸秆与30mL去离子水在反应釜中混合均匀，然后将反应釜置于200℃条件下恒温水热反应6h；反应结束后，待其冷却至室温，先用滤纸粗滤，再用0.22μm微孔过滤膜过滤并用透析袋透析2-3天；冷冻干燥即可得到以秸秆为碳源的碳量子点； (2)碳量子点氨基化：将1mL乙二胺与步骤(1)中10mL碳量子点在反应釜中混匀，然后将反应釜置于180℃下恒温反应5h；反应结束后，待其冷却至室温，用0.22μm微孔过滤膜过滤并用透析袋透析2-3天即可，得到的氮掺杂的碳量子点； (3)复合探针的制备： ①分别称取50mg的EDC和NHS，溶于5mL氮掺杂的碳量子点，在室温下搅拌4h； ②称取7mg水溶性的两性霉素B，溶于2mL的PBS缓冲液中，混匀备用； ③将步骤①产生的液体与步骤②产生的液体混匀，并在室温下搅拌6h； ④最后将步骤③中的混合液放在透析袋里透析2-3天，得到的液体即是氮掺杂碳量子点与两性霉素B复合的荧光探针。 2.权利要求1所述的碳量子点的复合探针检测白色念珠菌含量的方法，其特征在于： (1)将食材切成小块，置于锥形瓶中121℃灭菌20min，除去杂菌，备用； (2)从平板上挑取白色念珠菌的单克隆菌落于10mL含步骤(1)中食材的SAB培养基中，37℃，200rpm摇床过夜培养； (3)将1mL复合探针与1mL步骤(2)混合液混合均匀；并放入37℃、200rpm的摇床中混合培养5min，使复合探针中的两性霉素B能够与实样中的白色念珠菌充分结合； (4)取1mL步骤(3)中混合液在25℃，10000rpm条件下，离心5min，除去上清；用PBS重悬，重复3次； (5)将步骤(4)中的重悬液体置于石英比色皿中，用荧光分光光度计测定激发波长在355nm条件下的荧光强度值； (6)将所测得的荧光强度值代入制备的荧光标准曲线中，计算出白色念珠菌的含量。 3.权利要求2所述的碳量子点的复合探针检测白色念珠菌含量的方法，其特征在于：所述的荧光标准曲线是荧光强度值与白色念珠菌浓度标准曲线，其获得方法是： (1)配制一系列浓度的白色念珠菌溶液样品； (2)将1mL不同浓度的菌液样品分别与1mL复合探针混合均匀； (3)将步骤(2)中的混合液放入37℃、200rpm的摇床中混合培养5min； (4)将步骤(3)中的混合液在25℃，10000rpm条件下，离心5min，除去上清；用PBS重悬，重复3次； (5)将步骤(4)中混合溶液置于石英比色皿中，用荧光分光光度计测定激发波长在355nm条件下的荧光强度值； (6)以荧光强度值为纵坐标，白色念珠菌的浓度为横坐标，拟合建立荧光标准曲线。 4.权利要求2或3所述的碳量子点的复合探针检测白色念珠菌含量的方法，其特征在于：所述的荧光标准曲线包含由水溶性的两性霉素B获得的荧光标准曲线和由醇溶性的两性霉素B获得的荧光标准曲线。
所属类别：	发明专利