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原文传递一种细胞内小分子代谢物的鉴定方法

专利名称：	一种细胞内小分子代谢物的鉴定方法
摘要：	本发明提供了一种细胞内小分子代谢物的鉴定方法。根据精确质量数及色谱图匹配对代谢物进行定性，根据谱图的丰度对代谢物进行相对定量。该分析方法流程如下：将培养的贴壁细胞用PBS快速清洗后使用液氮淬灭；然后加入萃取液提取细胞内的全部代谢物；检索KEGG与METLIN数据库获得代谢通路主要代谢物的离子对与碰撞能等参数，建立小分子代谢物的检测分析方法；采用串联四级杆线性离子阱高性能质谱(Q‑Trap)结合四级杆‑飞行时间质谱(Q‑TOF)对细胞内的代谢物进行定性定量分析。本发明可以用于细胞样品中代谢产物的定性定量分析该方法检测鉴定到的代谢物的范围更广，代谢物的线性范围更宽，有效解决了目前分析代谢物定性难且需要大量的标准品作对照的问题。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	辽宁;21
申请人：	中国科学院大连化学物理研究所
发明人：	罗云;张保琴;耿柠波;王菲迪;任晓倩;张海军;陈吉平
专利状态：	有效
申请日期：	2017-12-01T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-11T00:00:00+0800
申请号：	CN201711251029.7
公开号：	CN109870498A
代理机构：	沈阳科苑专利商标代理有限公司
代理人：	马驰
分类号：	G01N27/62(2006.01);G;G01;G01N;G01N27
申请人地址：	116023 辽宁省大连市中山路457号
主权项：	1.一种细胞内小分子代谢物的串联四级杆线性离子阱高性能质谱分析方法，其特征在于：使用METLIN数据库中Q-TOF的MS/MS色谱图信息匹对用于定性；使用串联四级杆线性离子阱高性能质谱用于定量；包括以下步骤： a)细胞的淬灭：将贴壁细胞用PBS缓冲液清洗后液氮淬灭，抑制细胞内的酶活性，减少代谢物的酶代谢； b)细胞代谢物的提取：低温状态下加入冷的甲醇/水提取液，于冰水浴中超声提取、涡旋，萃取液离心冷冻，待分析； c)串联四级杆线性离子阱高性能质谱分析方法：根据结构信息，选择正离子或负离子检测模式，利用METLIN的MS/MS质谱图信息(包括子离子及母离子质量数、丰度、碰撞能)建立串联四级杆线性离子阱高性能质谱分析方法；串联四级杆线性离子阱高性能质谱MRM检测模式获得XIC谱图，结合代谢物的脂水分配系数以及Q-TOF的target MS/MS模式确定各离子对色谱峰的准确保留时间； d)使用串联四级杆线性离子阱高性能质谱对代谢物进行定量分析。 2.按照权利要求1所述的细胞内小分子代谢物的鉴定方法，其特征在于：步骤a中的贴壁细胞为人肝癌细胞HepG2；步骤b中甲醇/水提取液中甲醇的体积百分比为比例系数为百分之八十，温度为4℃；步骤c中检索KEGG数据库中的化合物，获取代谢物的结构信息、脂水分配系数，并在METLIN数据库中匹配质谱图信息，选择合适的碰撞能及相应碰撞能条件下的子离子及母离子的精确质量数；步骤d中串联四级杆线性离子阱高性能质谱定量分析使用Scheduled MRM模式。 3.按照权利要求1所述的细胞内小分子代谢物的鉴定方法，其特征在于：步骤a中，PBS清洗次数为一次。 4.按照权利要求1所述的细胞内小分子代谢物的鉴定方法，其特征在于：步骤b中超声、涡旋次数为3次，每次超声8min、涡旋3min。 5.按照权利要求1所述的细胞内小分子代谢物的鉴定方法，其特征在于：步骤c中选取METLIN数据库的MS/MS质谱图中一定碰撞能中丰度最高的离子信息。 6.按照权利要求1所述的细胞内小分子代谢物的鉴定方法，其特征在于：步骤c中离子对色谱峰保留时间由Q-TOF的target MS/MS模式进行确定。
所属类别：	发明专利