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原文传递一种甲基苯丙胺包被抗原、其制备方法及利用其检测甲基苯丙胺的方法

专利名称：	一种甲基苯丙胺包被抗原、其制备方法及利用其检测甲基苯丙胺的方法
摘要：	一种甲基苯丙胺包被抗原、其制备方法及利用其检测甲基苯丙胺的方法，所述制备过程包括如下步骤：(1)甲基苯丙胺半抗原的制备：称取琥珀酸酐与甲基苯丙胺溶于有机溶剂中，在碳酸钾的催化作用下，55~65℃加热搅拌至反应完全，薄层色谱分离，所得琥珀酰甲基苯丙胺即为甲基苯丙胺半抗原；(2)甲基苯丙胺包被抗原的制备：以EDC、NHS为催化剂，将甲基苯丙胺半抗原和卵清蛋白进行反应得到甲基苯丙胺包被抗原；(3)量子点标记的甲基苯丙胺抗体的制备：将CdSe/ZnS QDs溶解于硼酸缓冲液中，在EDC、NHS作用下，将甲基苯丙胺抗体滴加至CdSe/ZnS QDs的硼酸缓冲液中，搅拌反应，反应结束后，PBS缓冲液透析。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	河南;41
申请人：	铁道警察学院
发明人：	崔胜峰;万敬伟;马素娟;左健
专利状态：	有效
申请日期：	2019-03-29T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-11T00:00:00+0800
申请号：	CN201910250542.7
公开号：	CN109870442A
代理机构：	郑州联科专利事务所(普通合伙)
代理人：	时立新;张丽
分类号：	G01N21/64(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	450000 河南省郑州市金水区农业路31号
主权项：	1.一种甲基苯丙胺包被抗原的制备方法，其特征在于，包括如下步骤： (1) 甲基苯丙胺半抗原的制备：以二氯甲烷或丙酮为溶剂，称取琥珀酸酐与甲基苯丙胺，在碳酸钾的催化作用下，55~65℃加热搅拌至反应完全，薄层色谱分离，所得琥珀酰甲基苯丙胺即为甲基苯丙胺半抗原； (2) 甲基苯丙胺包被抗原的制备：以EDC和NHS为催化剂，将甲基苯丙胺半抗原和卵清蛋白进行反应得到甲基苯丙胺包被抗原。 2.根据权利要求1所述甲基苯丙胺包被抗原的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)的具体过程如下：取甲基苯丙胺溶于二氯甲烷或丙酮中，混合均匀后加入K2CO3，加热至55~65℃搅拌10~30 min，再加入琥珀酸酐，55~65℃搅拌反应至完全，经琥珀酰甲基苯丙胺将反应体系全部转移至离心管内，向离心管内加入二氯甲烷并离心保留上层清液，重复此操作2~3次，再次利用薄层层析法将琥珀酰甲基苯丙胺与其他物质分离，琥珀酰甲基苯丙胺与其他反应物质分离时所使用的展开剂为二氯甲烷，制得琥珀酰甲基苯丙胺的二氯甲烷溶液，将琥珀酰甲基苯丙胺的二氯甲烷溶液加热结晶，制得琥珀酰甲基苯丙胺晶体，甲基苯丙胺、K2CO3和琥珀酸酐的摩尔比为1:(145~150):50。 3.根据权利要求1所述甲基苯丙胺包被抗原的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)的具体过程如下：将1.7 mg琥珀酰甲基苯丙胺晶体溶于0.5 mL的双蒸水中，完全溶解后，加入2.4 mgEDC·HCl标记为A溶液；将1.3 mg卵清蛋白溶于0.5 mL的双蒸水，记为B溶液；用0.1 mol/L HCl溶液将B溶液的pH调节至4.0，再将A、B溶液混合，加入1 mg NHS室温搅拌20~40 min后，4℃下搅拌过夜，用10 mM PBS缓冲液透析、离心、浓缩，即得。 4.权利要求1至3任一所述的制备方法制得的量子点标记的甲基苯丙胺包被抗原。 5.权利要求4所述量子点标记的甲基苯丙胺包被抗原的用途，其特征在于，用于检测甲基苯丙胺的含量。 6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于，所述检测为荧光免疫吸附分析方法，检测时，以所述CdSe/ZnS QDs标记的甲基苯丙胺包被抗原为荧光探针，CdSe/ZnS QDs标记的甲基苯丙胺包被抗原与被分析物甲基苯丙胺直接竞争具有特异性免疫反应的甲基苯丙胺抗体。 7.一种检测甲基苯丙胺方法，其特征在于，包括如下步骤： (1) 先用10 mM PBS缓冲液清洗透明96孔酶标板每个孔，然后将比色孔和用于检测待测样品的检测孔中加入权利要求1制得的甲基苯丙胺包被抗原，然后将其在室温中孵化，将96孔板沥干后，使用PBST溶液清洗，干燥，再在每孔内加入1%BSA的PBS溶液封闭非特异性结合点位； (2) 然后比色孔中加入荧光标记甲基苯丙胺抗体溶液，再加入系列梯度浓度的游离甲基苯丙胺溶液，将每个孔用10 mM PBS缓冲液定容至100 μL，然后96孔板放入37℃的烘箱中孵化，作为比色法样品； (3) 将液态待测样品与等体积的荧光标记甲基苯丙胺抗体溶液加入检测孔中，通过目测荧光强度并和比色孔中的荧光强度比较从而确定待测样品中甲基苯丙胺的浓度。 8.根据权利要求7所述检测甲基苯丙胺方法，其特征在于，1号孔不加游离的甲基苯丙胺最为对照组，2号孔中游离的甲基苯丙胺的浓度为1000 μg/mL，3号孔中游离的甲基苯丙胺的浓度为100 μg/mL，4号孔中游离的甲基苯丙胺的浓度为10 μg/mL，5号孔中游离的甲基苯丙胺的浓度为1 μg/mL，6号孔中游离的甲基苯丙胺的浓度为100 ng/mL，7号孔中游离的甲基苯丙胺的浓度为10 ng/mL，8号孔中游离的甲基苯丙胺的浓度为1 ng/mL，9号孔中游离的甲基苯丙胺的浓度为0.1 ng/mL，10号孔中游离的甲基苯丙胺的浓度为0.01 ng/mL。 9.根据权利要求7所述检测甲基苯丙胺方法，其特征在于，所述荧光标记的甲基苯丙胺抗体溶液的制备过程如下：避光条件下，取20.5 μL、浓度为8 μM羧基化水溶性CdSe/ZnSQDs用10 mM，pH = 7.4的硼酸缓冲液稀释至1 μM，室温搅拌下，将14 μL甲基苯丙胺抗体滴加到CdSe/ZnS QDs的硼酸溶液中混合均匀，搅拌均匀后，将13 μL，10 mg/mL的EDC溶液滴加到溶液中反应20 min，搅拌下，滴加15 μL，10 mg/mL NHS溶液，室温下搅拌2 h，反应结束，将制得的CdSe/ZnS QDs标记的甲基苯丙胺抗体用PBS缓冲液透析至少24 h，透析后浓缩、洗涤、离心，即得，其中，EDC溶液和NHS溶液的溶剂均为10 mM，PH = 7.4硼酸盐缓冲溶液。
所属类别：	发明专利