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原文传递一种保健品中壳寡糖含量的检测方法

专利名称：	一种保健品中壳寡糖含量的检测方法
摘要：	本发明涉及保健品中壳寡糖(聚合度DP＝2～7)的定量检测，提出一种保健品中壳寡糖(聚合度DP＝2～7)的高效液相色谱串联质谱的检测方法，其中包括步骤：(1)制备标准溶液并进行高效液相色谱串联质谱检测，得到不同浓度的混合标准溶液谱图；(2)将步骤(1)所得的标准谱图按壳寡糖不同聚合度(DP＝2～7)分别制作浓度与色谱峰面积关系曲线图；(3)壳寡糖样品的预处理及高效液相色谱串联质谱检测；(4)样品中壳寡糖含量的确定，将步骤(3)中获得的样品谱图的保留时间确定壳寡糖聚合度并与步骤(2)中得到的标准曲线比对，用外标法确定壳寡糖的含量。采用本发明具有前处理简单、快速，分析时间短，灵敏度、准确度和精密度高的特点。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广东;44
申请人：	广东省生物工程研究所(广州甘蔗糖业研究所)
发明人：	庞扬海;高裕锋;甄振鹏;黄敏兴;王小鹏;李硕聪;余构彬;王桂华
专利状态：	有效
申请日期：	2019-03-19T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-14T00:00:00+0800
申请号：	CN201910206468.9
公开号：	CN109884209A
代理机构：	广东品安律师事务所
代理人：	刘井
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	510316 广东省广州市海珠区石榴岗路10号
主权项：	1.一种保健品中壳聚糖含量的检测方法，包括以下步骤： (1)制备标准溶液并进行高效液相色谱串联质谱检测称取壳寡糖标准物并分别将其配成标准储备液，再将标准储备液用乙腈水溶液逐级稀释，配制一系列的混合标准溶液进行高效液相色谱串联质谱检测并得到标准谱图，标准谱图中保留时间确定壳寡糖品种，色谱面积与对应的壳寡糖浓度成函数关系； (2)将步骤(1)所得的标准谱图按壳寡糖品种分别制作浓度与色谱峰面积关系曲线图； (3)保健品样品的预处理及高效液相色谱串联质谱检测称取样品，加入水，涡旋震荡后超声波提取，离心，取上清液，用乙腈定容，混匀后取上清液过滤膜，取滤液进行高效液相色谱串联质谱检测，得样品谱图； (4)样品中的壳寡糖的含量的确定；将步骤(3)中获得的样品谱图的保留时间确定壳寡糖的品种并将其色谱峰面积与步骤(2)对应的壳寡糖品种的标准曲线进行比对，用外标法确定样品中的各壳寡糖含量；其中，在步骤(1)和(3)中高效液相色谱串联质谱的检测条件为：色谱条件：色谱柱为ACQUITY UPLC BEH HILIC；流动相和洗脱时间为：流动相A为甲酸水溶液，流动相B为乙酸铵水溶液，流动相C为甲酸乙腈溶液；洗脱时间0-3.5min，流动相A保持12％，流动相B保持20％，流动相C保持68％；洗脱时间3.5-3.6min，流动相A从12％到22％，流动相B保持20％，流动相C从68％到58％；洗脱时间3.6-6.0min，流动相A保持22％，流动相B保持20％，流动相C保持58％；洗脱时间6.0-6.1min，流动相A从22％到32％，流动相B保持20％，流动相C从58％到48％；洗脱时间6.1-9.0min，流动相A保持32％，流动相B保持20％，流动相C保持48％；洗脱时间9.0-9.1min，流动相A从32％到40％，流动相B保持20％，流动相C从48％到40％；洗脱时间9.1-11.0min，流动相A保持40％，流动相B保持20％，流动相C保持40％；洗脱时间11.0-11.1min，流动相A从40％到12％，流动相B保持20％，流动相C从40％到68％；洗脱时间11.1-15.0min，流动相保持12％，流动相B保持20％，流动相C保持68％；质谱条件为电离模式：ESI+。 2.根据权利要求1所述保健品中壳聚糖含量的检测方法，其特征在于：所述色谱条件：色谱柱为ACQUITY UPLC BEH HILIC，其型号为1.7μm,2.1×100mm；流动相A为pH＝3的甲酸水溶液，流动相B为200mmol/L乙酸铵水溶液，流动相C为pH＝3的甲酸乙腈溶液；质谱条件： (a)电离模式：ESI+ (b)仪器参数：气帘气压力25.0si，碰撞气压力中档，离子喷雾电压5500V，离子源温度350℃，雾化气压力50.0psi，辅助加热气压力50.0psi，接口加热器为开； (c)采集模式：多反应监测MRM。 3.根据权利要求1所述保健品中壳聚糖含量的检测方法，其特征在于：所述壳聚糖的聚合度DP为2～7。 4.根据权利要求3所述保健品中壳聚糖含量的检测方法，其特征在于：所述壳聚糖为壳二糖、壳三糖、壳四糖、壳五糖、壳六糖和壳七糖。 5.根据权利要求1-4任一所述的保健品中壳聚糖含量的检测方法，其特征在于：步骤(1)中不同浓度的标准溶液浓度为壳二糖、壳三糖和壳四糖配制浓度从0.5mg/L至20mg/L分6个等级；壳五糖配制浓度从1.0mg/L至40mg/L分6个等级；壳六糖和壳七糖配制浓度从0mg/L至160mg/L分6个等级。 6.根据权利要求1所述的保健品中壳寡糖含量的检测方法，步骤(3)所述的样品预处理步骤如下：准确称取粉碎后的保健品样品1.00g于50mL离心管中，加入10mL水涡旋震荡超声提取，8000r/min转速下离心5min，精密移取4mL上清液于10mL容量瓶中，用乙腈定容至10mL，涡旋混匀后，过0.22μm滤膜至进样瓶中，进行高效液相色谱串联质谱检测。
所属类别：	发明专利