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原文传递载脂蛋白E4的检测方法

专利名称：	载脂蛋白E4的检测方法
摘要：	本发明提供了一种用于在对象的血液样品中检测载脂蛋白E同种型4(ApoE4)或其片段的方法，其中所述方法包括下述步骤：将所述样品与固相相接触，将所述样品与至少一种特异性结合到ApoE4或其片段的结合剂相接触，由此形成ApoE4‑结合剂复合物，以及检测所述ApoE4‑结合剂复合物。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	德国;DE
申请人：	斯弗因高泰克有限公司
发明人：	安德里亚斯·伯格曼
专利状态：	有效
申请日期：	2017-10-12T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-14T00:00:00+0800
申请号：	CN201780062562.0
公开号：	CN109891240A
代理机构：	北京睿阳联合知识产权代理有限公司
代理人：	张颖;王朋飞
分类号：	G01N33/543(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	德国亨尼希斯多夫
主权项：	1.一种用于在对象的血液样品中检测载脂蛋白E同种型4(ApoE4)或其片段的(体外)方法，所述方法包括下述步骤： a.将所述样品与固相相接触，将所述样品同时或顺序地与至少一种特异性结合到ApoE4的结合剂相接触，由此形成ApoE4-结合剂复合物，其中所述结合剂是抗体或功能性抗体片段或非IgG蛋白质支架，和 b.检测所述ApoE4-结合剂复合物，其中所述ApoE4-结合剂复合物被固定化到所述固相，其中所述固相未覆盖有任何结合剂或捕获分子，并且其中ApoE4或所述ApoE4-结合剂复合物与所述固相的结合在去污剂存在下进行。 2.根据权利要求1的方法，其中ApoE4或其片段被固定化到所述固相，并且所述结合剂被结合到ApoE4。 3.根据权利要求1至2的方法，其中所述ApoE4的片段的长度为至少6个氨基酸，前提是第158位氨基酸(精氨酸)被包含在所述片段内，其中所述第158位氨基酸的序列参考Seq IDNO.1。 4.根据权利要求1至3任一项的方法，其中所述ApoE4-结合剂复合物被定性或定量检测。 5.根据权利要求1至4的方法，其中所述ApoE4-结合剂复合物的定量检测指示了所述样品中ApoE4的浓度，其中所述浓度为所述对象对ApoE4等位基因是纯合还是杂合提供了指示。 6.根据权利要求1至5的方法，其中所述结合剂是结合亲和常数为至少107M-1、优选为108M-1的抗体或功能性抗体片段或非IgG蛋白质支架，优选的亲和常数大于109M-1，最优选地大于1010M-1。 7.根据权利要求1至6的方法，其中所述结合剂用标记物标记以便检测，其中所述标记物选自化学发光标记物、酶标记物、荧光标记物或放射性碘标记物。 8.根据权利要求1至7的方法，其中所述ApoE4的检测被用于在所述检测到的ApoE4水平高于一定阈值时将对象分类为ApoE4阳性或ApoE4阴性，其中所述阈值通过特定内部阳性对照来确定。 9.根据权利要求1至8的方法，其中所述固相选自聚合物表面(例如聚苯乙烯)、玻璃表面、纤维素和纤维素衍生物(例如硝基纤维素、聚偏氟乙烯、尼龙)。 10.根据权利要求1至9的方法，其中所述固相选自玻璃或聚合物表面，其中聚合物表面包含但不限于聚苯乙烯、聚二乙烯苯、苯乙烯-丙烯酸酯共聚物、苯乙烯-丁二烯共聚物、苯乙烯-二乙烯苯共聚物、聚(苯乙烯-氧化乙烯)、聚甲基丙烯酸甲酯、聚氨酯、聚戊二醛、聚乙烯亚胺、聚乙烯吡咯烷酮、N,N’-亚甲基双丙烯酰胺、聚烯烃、聚乙烯、聚四氟乙烯、聚对苯二甲酸乙二酯、聚丙烯、聚氯乙烯、聚乙酸乙烯酯、聚丙烯腈、聚砜、聚醚砜、聚二甲基硅氧烷、热解材料、上述物质的共聚物和嵌段共聚物，硅酮或二氧化硅。 11.根据权利要求1至13的方法，其中将所述血液样品与未饱和的固相相接触。 12.根据权利要求1至11的方法，其中所述反应缓冲液中任选的稳定化蛋白通过阻断非特异性结合位点并与ApoE4的构象相互作用，使所述血液样品中的ApoE4及其片段与所述固相的结合稳定，其中所述稳定化蛋白选自牛血清白蛋白(BSA)、来自于人类血清的白蛋白、酪蛋白、乳蛋白、免疫球蛋白和稳定化氨基酸(例如丙氨酸、精氨酸、甘氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、脯氨酸、丝氨酸)，优选地所述稳定化蛋白是牛血清白蛋白(BSA)。 13.根据权利要求1-12的方法，其中作为稳定化蛋白的BSA的浓度在0-10％、优选地0.2-5％、最优选地0.5-2.5％的范围内。 14.根据权利要求1-13的方法，其中所述去污剂选自阴离子型去污剂(例如十二烷基硫酸钠(SDS))、阳离子型去污剂(例如十六烷基三甲基溴化铵(CTAB))、两性离子型去污剂(例如CHAPS)和/或非离子型去污剂(例如Tween-20、Triton X-100)。 15.根据权利要求1-14的方法，其中Tween-20的浓度选自0.001-10％、优选地0.01-1％、最优选地0.2-0.5％的范围。 16.根据权利要求1-15的方法，其中TritonX-100的浓度选自0.001-0.5％、优选地0.01-0.2％、最优选地0.05-0.1％的范围。 17.根据前述权利要求任一项的方法，其中所述血液样品选自全血、血清和枸橼酸盐血浆、肝素血浆、EDTA血浆。 18.根据前述权利要求任一项的方法，其中所述对象选自活人或非人类生物体，优选为人类对象，其中所述对象是健康的、表观健康的、患有认知缺损性痴呆症的、特别是患有AD的对象。 19.一种试剂盒，其包含： a.一种针对ApoE4的序列中所包含的表位的结合剂，其中所述结合剂用可检测标记物标记， b.固相， c.含有去污剂的反应缓冲液。 20.根据前述权利要求任一项的试剂盒在对象的血液样品中体外检测和/或定量ApoE4的用途。 21.根据前述权利要求任一项的方法在与提高的ApoE4水平相关的疾病或病症的风险分层或实施治疗措施的分层中的用途。 22.根据前述权利要求任一项的方法的用途，其中所述疾病或病症选自认知缺损和神经变性疾病，所述神经变性疾病包括痴呆症和/或阿兹海默氏病(AD)。 23.根据前述权利要求任一项的方法，其用于检测发生AD的风险，其中高于一定阈值的提高的ApoE4水平预测了发生AD的提高的风险。 24.根据前述权利要求任一项的方法，其中所述ApoE4或ApoE4-结合剂复合物的存在与AD的发生/发病的风险相关。
所属类别：	发明专利