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原文传递回收胞外囊泡的方法

专利名称：	回收胞外囊泡的方法
摘要：	本发明提供了从含胞外囊泡的样品回收具有高纯度的胞外囊泡的方法。具体地，本发明提供了回收胞外囊泡的方法，其包括：(1)用螯合剂处理含胞外囊泡的样品；和(2)从用螯合剂处理过的含胞外囊泡的样品分离胞外囊泡。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	日本;JP
申请人：	合同会社明乐康中央研究所
发明人：	犬塚达俊;栗本绫子
专利状态：	有效
申请日期：	2017-10-12T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-14T00:00:00+0800
申请号：	CN201780060943.5
公开号：	CN109891236A
代理机构：	北京市柳沈律师事务所
代理人：	易方方
分类号：	G01N33/48(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	日本东京都
主权项：	1.回收胞外囊泡的方法，包括： (1)用螯合剂处理含胞外囊泡的样品；和 (2)从用螯合剂处理过的含胞外囊泡的样品中分离胞外囊泡。 2.根据权利要求1所述的方法，其中螯合剂选自乙二胺四乙酸(EDTA)、乙二醇醚二胺四乙酸(EGTA)、羟乙基乙二胺四乙酸(HEDTA)、羟乙基亚氨基二乙酸(HIDA)、次氮基三乙酸(NTA)、草酸、乙二胺四(亚甲基膦酸)(EDTMP)及其盐，以及它们的混合物。 3.根据权利要求1或2所述的方法，其中用1-200mM的螯合剂处理所述含胞外囊泡的样品。 4.根据权利要求3所述的方法，其中用20-200mM的螯合剂处理所述含胞外囊泡的样品。 5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述胞外囊泡是外泌体。 6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述分离通过使用胞外囊泡膜结合物质的沉淀法或含胞外囊泡的样品的超速离心法进行。 7.根据权利要求6所述的方法，其中所述胞外囊泡膜结合物质是针对CD9的抗体。 8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述含胞外囊泡的样品是体液或培养上清液。 9.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述含胞外囊泡的样品是血液样品、尿液或乳腺液。 10.分析胞外囊泡的方法，包括： (1)用螯合剂处理含胞外囊泡的样品； (2)从用螯合剂处理过的含胞外囊泡的样品中分离胞外囊泡；和 (3)分析所分离的胞外囊泡。 11.根据权利要求10所述的方法，其中分析所分离的胞外囊泡中的蛋白质。 12.试剂盒，其包括螯合剂和胞外囊泡膜结合物质。 13.抑制胞外囊泡与胞外囊泡吸附蛋白结合的方法，包括：用螯合剂处理具有与其结合的胞外囊泡吸附蛋白的胞外囊泡，以使所述胞外囊泡吸附蛋白与所述胞外囊泡解离，其中所述胞外囊泡吸附蛋白是选自下组的一种或多种蛋白质：白蛋白、突触结合蛋白样蛋白4、玻连蛋白、细胞分裂控制蛋白2同系物、胰蛋白酶-2、免疫球蛋白μ重链病蛋白、α-1B-糖蛋白、免疫球蛋白κ链V-III区WOL、血色素结合蛋白、抗凝血酶-III、凝血酶原、凝溶胶蛋白、补体C1子成分、补体因子B、补体成分C9、纤维凝胶蛋白2(ficolin-2)、血清对氧磷酶/芳基酯酶1、免疫球蛋白κ链V-I区Daudi和免疫球蛋白重链V-III区TUR。 14.游离的天然胞外囊泡，其中选自下组的一种或多种胞外囊泡吸附蛋白是解离的：白蛋白、突触结合蛋白样蛋白4、玻连蛋白、细胞分裂控制蛋白2同系物、胰蛋白酶-2、免疫球蛋白μ重链病蛋白、α-1B-糖蛋白、免疫球蛋白κ链V-III区WOL、血色素结合蛋白、抗凝血酶-III、凝血酶原、凝溶胶蛋白、补体C1子成分、补体因子B、补体成分C9、纤维凝胶蛋白2(ficolin-2)、血清对氧磷酶/芳基酯酶1、免疫球蛋白κ链V-I区Daudi和免疫球蛋白重链V-III区TUR。 15.根据权利要求14所述的胞外囊泡，其中选自所述组的所有胞外囊泡吸附蛋白是解离的。 16.根据权利要求14或15所述的胞外囊泡，其中所述胞外囊泡吸附蛋白与所述胞外囊泡的解离度为50％或更高。 17.根据权利要求14-16中任一项所述的胞外囊泡，其中离析或纯化所述胞外囊泡。 18.根据权利要求14-17中任一项所述的胞外囊泡，其中所述胞外囊泡是外泌体。 19.根据权利要求14-16中任一项所述的胞外囊泡，其中所述胞外囊泡通过如下方法获得，所述方法包括： (1)用螯合剂处理含胞外囊泡的样品；和 (2)从用螯合剂处理过的含胞外囊泡的样品分离中分离胞外囊泡。 20.溶液，其: (A)包括游离的天然胞外囊泡，其中选自下组的一种或多种胞外囊泡吸附蛋白：白蛋白、突触结合蛋白样蛋白4、玻连蛋白、细胞分裂控制蛋白2同系物、胰蛋白酶-2、免疫球蛋白μ重链病蛋白、α-1B-糖蛋白、免疫球蛋白κ链V-III区WOL、血色素结合蛋白、抗凝血酶-III、凝血酶原、凝溶胶蛋白、补体C1子成分、补体因子B、补体成分C9、纤维凝胶蛋白2(ficolin-2)、血清对氧磷酶/芳基酯酶1、免疫球蛋白κ链V-I区Daudi和免疫球蛋白重链V-III区TUR被解离；和 (B)不包含所述一种或多种胞外囊泡吸附蛋白。
所属类别：	发明专利