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原文传递一种黄曲霉毒素B1纳米抗体的时间分辨荧光免疫层析试剂盒及其制备方法和应用

专利名称：	一种黄曲霉毒素B1纳米抗体的时间分辨荧光免疫层析试剂盒及其制备方法和应用
摘要：	本发明公开一种黄曲霉毒素B1纳米抗体的时间分辨荧光免疫层析试剂盒，包括荧光试纸条和样品反应瓶；所述荧光试纸条包括纸板、硝酸纤维素膜、样品垫、检测垫、吸水垫，所述硝酸纤维素膜上从左往右设有检测线和质控线，所述检测线包被有黄曲霉毒素B1‑牛血清白蛋白偶联物，所述质控线包被有兔抗驼多克隆抗体；所述试剂盒还包括装在所述样品反应瓶中的铕标记的抗黄曲霉毒素B1纳米抗体，其氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示，编码基因序列如SEQ ID NO:8所示。本发明所提供的抗黄曲霉毒素B1纳米抗体能高特异性识别黄曲霉毒素B1，对黄曲霉毒素B1的结构类似物均不存在交叉反应，特异性和准确性高，可用于定量检测黄曲霉毒素B1的含量。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	湖北;42
申请人：	武汉中科兴达技术有限公司
发明人：	杨运煌;何婷;胡锐;朱江;李双利;聂瑶
专利状态：	有效
申请日期：	2019-02-25T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-14T00:00:00+0800
申请号：	CN201910137204.2
公开号：	CN109884008A
代理机构：	南京纵横知识产权代理有限公司
代理人：	徐瑛
分类号：	G01N21/64(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	430000 湖北省武汉市武昌区八一路小洪山3号
主权项：	1.一种黄曲霉毒素B1纳米抗体的时间分辨荧光免疫层析试剂盒，包括荧光试纸条和样品反应瓶；所述荧光试纸条包括纸板、硝酸纤维素膜、样品垫、检测垫、吸水垫，所述样品垫、检测垫、吸水垫从左往右依次粘贴在所述纸板上且两两重叠，所述硝酸纤维素膜粘贴在所述纸板和检测垫之间，其特征在于，所述硝酸纤维素膜上从左往右设有检测线和质控线，所述检测线包被有黄曲霉毒素B1-牛血清白蛋白偶联物，所述质控线包被有兔抗驼多克隆抗体；所述试剂盒还包括装在所述样品反应瓶中的铕标记的抗黄曲霉毒素B1纳米抗体，其氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示，编码基因序列如SEQ ID NO:8所示。 2.根据权利要求1所述时间分辨荧光免疫层析试剂盒，其特征在于，所述黄曲霉毒素B1纳米抗体的三个互补决定区的氨基酸序列分别为：CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示、CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示、CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示；与之对应地，三个互补决定区的编码基因序列分别为：CDR1的编码基因序列如SEQ IDNO:4所示、CDR2的编码基因序列如SEQ ID NO:5所示，CDR3的编码基因序列如SEQ ID NO:6所示。 3.根据权利要求1或2所述时间分辨荧光免疫层析试剂盒，其特征在于，所述铕标记的抗黄曲霉毒素B1纳米抗体的制备方法为：将抗黄曲霉毒素B1纳米抗体和活化后的铕标记试剂混合，震荡过夜，即得到目标产物铕标记的抗黄曲霉毒素B1纳米抗体。 4.根据权利要求3所述时间分辨荧光免疫层析试剂盒，其特征在于，所述铕标记的抗黄曲霉毒素B1纳米抗体的制备方法具体为：将铕标记试剂超声分散于硼酸缓冲液中，加入碳二亚胺溶液，室温震荡活化，离心，去除上清液；加入硼酸缓冲液复溶，超声分散，然后加入抗黄曲霉毒素B1纳米抗体，混匀，震荡过夜，离心去除上清液；然后加入牛血清白蛋白封闭铕标记试剂表面多余的结合位点，得到铕标记的抗黄曲霉毒素B1纳米抗体。 5.根据权利要求4所述时间分辨荧光免疫层析试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括样品稀释液和样品稀释液吸管，所述样品稀释液为含有2％(m/v)蔗糖、1％(m/v)吐温-20的浓度为0.01mol/L且pH值为7.4的磷酸缓冲液；所述荧光试纸条中的吸水垫长20～25mm，宽3～5mm；检测垫长25～30mm，宽3～5mm；样品垫长15～20mm，宽3～5mm，相邻各垫的重叠长度为1～3mm；所述质控线与硝酸纤维素膜右侧边相距5～10mm，所述检测线与质控线相距10～15mm；所述样品反应瓶为1～5mL的卡口瓶。 6.根据权利要求4所述时间分辨荧光免疫层析试剂盒，其特征在于，每厘米所述检测线所需的黄曲霉毒素B1-牛血清白蛋白偶联物的包被量为0.2～0.5μg；每厘米所述质控线所需的兔抗驼多克隆抗体的包被量为0.1～0.4μg；所述样品反应瓶中铕标记的抗黄曲霉毒素B1纳米抗体的含量为18～50μg。 7.权利要求1、2、4、5或6所述时间分辨荧光免疫层析试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： S1、将吸水纸剪裁成吸水垫； S2、制备检测垫，将黄曲霉毒素B1-牛血清白蛋白偶联物、兔抗驼多克隆抗体分别配制成浓度为0.4～0.8mg/mL的包被液Ⅰ和0.2～0.5mg/mL的包被液Ⅱ，在硝酸纤维素膜上用线喷方式喷涂包被液Ⅰ，37℃下干燥1～2h，得检测线；然后在检测线右边喷涂包被液Ⅱ，37℃下干燥1～2h，得质控线； S3、制备样品垫，将玻璃纤维膜放入封闭液中浸湿取出，37℃下干燥10～16h，得样品垫，置于干燥器中室温保存； S4、组装荧光试纸条，在纸板上从左往右依次粘贴样品垫、检测垫、吸水垫且两两重叠，得荧光试纸条。 8.根据权利要求7所述时间分辨荧光免疫层析试剂盒的制备方法，其特征在于，制备所述包被液Ⅰ的包被缓冲液为：每100mL溶液中含有牛血清白蛋白1g，叠氮化钠0.02g，氯化钠0.8g，十二水磷酸氢二钠0.29g，氯化钾0.02g，磷酸二氢钾0.02g；制备所述包被液Ⅱ所使用的包被缓冲液为：每100mL溶液中含有牛血清白蛋白1g，叠氮化钠0.02g，氯化钠0.8g，十二水磷酸氢二钠0.29g，氯化钾0.02g，磷酸二氢钾0.02g；制备所述样品垫所使用的封闭液为：每100mL溶液中含有牛血清白蛋白0.5g，叠氮化钠0.02g，十二水磷酸氢二钠2.9g，磷酸二氢钠0.3g，吐温-20 1.0g，聚乙烯吡咯烷酮K-301.0g、EDTA 0.25g。 9.权利要求1、2、4、5或6所述时间分辨荧光免疫层析试剂盒的应用，其特征在于，包括以下步骤： P1、将样品反应瓶中加入待测样品溶液，与铕标记的抗黄曲霉毒素B1纳米抗体混匀； P2、将荧光试纸条插入样品反应瓶中，37℃反应7min，用时间分辨荧光测试仪检测，得到试纸条的检测线荧光强度与质控线荧光强度的比值； P3、基于预先获得的试纸条的检测线荧光强度与质控线荧光强度的比值，与黄曲霉毒素B1浓度的关系曲线，获得待测样品溶液中黄曲霉毒素B1含量，换算后得待测样品中黄曲霉毒素B1含量。 10.权利要求9所述时间分辨荧光免疫层析试剂盒的应用，其特征在于，步骤P3中，所述试纸条的检测线荧光强度与质控线荧光强度的比值，与黄曲霉毒素B1浓度的关系曲线采用以下方法得到： P31、配制得到一系列浓度的黄曲霉毒素B1标准品溶液； P32、将适量上述各浓度的黄曲霉毒素B1标准品溶液分别加入到样品反应瓶中，混匀，插入试纸条，37℃反应7min，用时间分辨荧光免疫分析仪检测得到若干个免疫层析时间试纸条上检测线和质控线的荧光强度，由此获得若干个免疫层析时间的检测线荧光强度与质控线荧光强度的比值； P33、拟合得到该比值与黄曲霉毒素B1的关系曲线。
所属类别：	发明专利