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原文传递一种PD-L1外泌体的体外快速检测平台及检测方法

专利名称：	一种PD-L1外泌体的体外快速检测平台及检测方法
摘要：	本发明公开了一种PD‑L1外泌体的体外快速检测平台及检测方法，属于快速检测技术领域。检测平台包括样品初滤区、纳滤区、显色物垫区、显色区和吸水垫区。所述显色区上的捕获抗体和显色物垫区上的显色物标记抗体中至少有一种为外泌体PD‑L1抗体。检测方法为先将待检样品经过初滤膜进行初步过滤，再经过纳滤膜进行过滤，得到外泌体；外泌体与显色物标记抗体特异性地结合，与显色物标记抗体特异性结合的外泌体再与捕获抗体结合，形成双抗体夹心；所述捕获抗体和显色物标记抗体至少有一种为外泌体PD‑L1抗体。此平台集成全血分离，外泌体纯化以及PD‑L1外泌体特异检测，具有操作方便，检测快捷，以及成本低等特点。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	湖北;42
申请人：	华中科技大学
发明人：	刘笔锋;陈鹏
专利状态：	有效
申请日期：	2019-02-27T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-14T00:00:00+0800
申请号：	CN201910145354.8
公开号：	CN109884315A
代理机构：	华中科技大学专利中心
代理人：	孙杨柳;曹葆青
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	430074 湖北省武汉市洪山区珞喻路1037号
主权项：	1.一种PD-L1外泌体的体外检测平台，其特征在于，包括：样品初滤区：所述样品初滤区上粘贴有初滤膜，所述初滤膜用于初步过滤样品，截留所述样品中直径大于初滤膜直径的细胞和/或颗粒物；纳滤区：所述纳滤区与所述样品初滤区连接；所述纳滤区上粘贴有纳滤膜，所述纳滤膜用于分离得到外泌体；显色物垫区：所述显色物垫区与所述纳滤区连接；所述显色物垫区用于固定显色物标记抗体，且能使显色物标记抗体与样品复溶；所述显色物标记抗体用于与外泌体特异性地结合；显色区：所述显色区与所述显色物垫区连接；所述显色区为硝酸纤维素膜上固定捕获抗体和对照抗体；所述捕获抗体为外泌体抗体，且所述捕获抗体和显色物标记抗体中至少有一种为外泌体PD-L1抗体；所述对照抗体能与显色物标记抗体结合，所述对照抗体用于判定显色区的有效性；吸水垫区：所述吸水垫区与所述显色区连接，所述吸水垫区用于固定吸水垫；所述吸水垫用于为层析提供动力。 2.如权利要求1所述的PD-L1外泌体的体外检测平台，其特征在于，所述初滤膜为玻璃纤维素膜、硝酸纤维素膜或聚酯纤维素膜。 3.如权利要求1所述的PD-L1外泌体的体外检测平台，其特征在于，所述纳滤膜滤孔的直径为150nm-250nm；所述纳滤膜为亲水聚碳酸酯膜。 4.如权利要求1所述的PD-L1外泌体的体外检测平台，其特征在于，所述显色物标记抗体上的显色物为胶体金、荧光染料、荧光纳米微球和纳米酶中的至少一种。 5.显色物标记抗体和捕获抗体用于制备检测PD-L1外泌体试剂中的应用，其特征在于，含有以下步骤： (1)将待检测样品经过初滤膜进行初步过滤，截留样品中直径大于初滤膜直径的细胞和/或颗粒物；再经过纳滤膜进行过滤，得到外泌体； (2)步骤(1)得到的外泌体与显色物标记抗体特异性地结合，与显色物标记抗体特异性结合的外泌体再与捕获抗体结合，形成双抗体夹心；所述捕获抗体和显色物标记抗体至少有一种为外泌体PD-L1抗体；若对照抗体处显色且捕获抗体处显色，所述待检测样品即为PD-L1外泌体阳性样品；若对照抗体处显色且捕获抗体处不显色，所述待检测样品即为PD-L1外泌体阴性样品。 6.如权利要求5所述应用，其特征在于，所述初滤膜为玻璃纤维素膜、硝酸纤维素膜或聚酯纤维素膜。 7.如权利要求5应用，其特征在于，所述纳滤膜的直径为150nm-250nm；所述纳滤膜为亲水聚碳酸酯膜。 8.如权利要求5所述应用，其特征在于，所述显色物标记抗体上的显色物为胶体金、荧光染料、荧光纳米微球和纳米酶中的至少一种。
所属类别：	发明专利