详情

原文传递一种PD-L1外泌体的磁免疫化学发光检测方法

专利名称：	一种PD-L1外泌体的磁免疫化学发光检测方法
摘要：	本发明公开了一种PD‑L1外泌体的磁免疫化学发光检测方法，属于体外快速检测技术领域。检测所用试剂盒含有抗体A、抗体B、多孔泡沫金属填充的中空柱和磁铁，所述抗体A为化学发光分子或能使底物发光的酶标记的外泌体抗体，所述抗体B为磁珠标记的外泌体抗体；所述抗体A和抗体B中至少有一种为外泌体PD‑L1抗体。检测方法为先将抗体A、抗体B与样品孵育，然后借助多孔泡沫金属磁吸实现高效捕获分离，清洗杂质后，撤去磁场，收集双抗夹心复合物并检测。此方法集成样品孵育，磁吸高效捕获分离以及快速检测，具有操作方便，检测快捷，以及成本低等特点。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	湖北;42
申请人：	华中科技大学
发明人：	刘笔锋;陈鹏
专利状态：	有效
申请日期：	2019-02-27T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-21T00:00:00+0800
申请号：	CN201910145178.8
公开号：	CN109781999A
代理机构：	华中科技大学专利中心
代理人：	孙杨柳;曹葆青
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	430074 湖北省武汉市洪山区珞喻路1037号
主权项：	1.一种PD-L1外泌体的磁免疫化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有抗体A、抗体B、多孔泡沫金属填充的中空柱和磁铁，所述抗体A为化学发光分子或能使底物发光的酶标记的外泌体抗体，所述抗体B为磁珠标记的外泌体抗体；所述抗体A和抗体B中至少有一种为外泌体PD-L1抗体。 2.如权利要求1所述的PD-L1外泌体的磁免疫化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述多孔泡沫金属为多孔泡沫铁、多孔泡沫钴或多孔泡沫镍；优选地，所述多孔泡沫金属的孔洞的直径为10um-100um。 3.如权利要求1所述的PD-L1外泌体的磁免疫化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述化学发光分子为吖啶脂；所述能使底物发光的酶为辣根过氧化物酶。 4.如权利要求1所述的PD-L1外泌体的磁免疫化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述磁珠为顺磁磁珠，直径为10nm-1000nm。 5.化学发光分子或能使底物发光的酶标记的外泌体抗体以及磁珠标记的外泌体抗体用于制备检测PD-L1外泌体试剂中的应用，其特征在于，含有以下步骤： (1)样品孵育：将待测样品与抗体A和抗体B充分混合后，进行孵育得到靶标复合物；所述抗体A为化学发光分子或能使底物发光的酶标记的外泌体抗体，所述抗体B为磁珠标记的外泌体抗体；所述抗体A和抗体B中至少有一种为外泌体PD-L1抗体；所述靶标复合物为抗体A、PD-L1外泌体和抗体B形成的双抗体夹心复合物； (2)磁吸分离：将磁铁吸附到多孔泡沫金属填充的中空管外壁，使所述多孔泡沫金属置于磁场环境中；再将步骤(1)得到的孵育液通过多孔泡沫金属填充的中空管，使所述双抗体夹心复合物吸附于多孔泡沫金属上； (3)洗脱双抗体夹心复合物：用缓冲液清洗多孔泡沫金属填充的中空管的内腔；再撤去多孔泡沫金属填充的中空管外壁的磁铁，并洗脱得到双抗体夹心复合物； (4)检测发光强度：检测步骤(3)洗脱获得的双抗体夹心复合物的发光强度或双抗体夹心复合物使底物发光的强度，计算待测样品中外泌体PD-L1抗体的浓度。 6.如权利要求5所述应用，其特征在于，所述多孔泡沫金属为多孔泡沫铁、多孔泡沫钴或多孔泡沫镍；优选地，所述多孔泡沫金属中孔洞的直径为10um-100um。 7.如权利要求5所述应用，其特征在于，所述化学发光分子为吖啶脂，所述能使底物发光的酶为辣根过氧化物酶。 8.如权利要求5所述应用，其特征在于，所述磁珠为顺磁磁珠，直径为10nm-1000nm。 9.如权利要求5所述应用，其特征在于，所述步骤(2)中利用吸液装置或移液枪，以上下来回吸取方式，将步骤(1)得到的孵育液通过多孔泡沫金属填充的中空管，使所述双抗体夹心复合物吸附于多孔泡沫金属上。 10.如权利要求5所述应用，其特征在于，所述步骤(3)中利用吸液装置或移液枪，以上下来回吸取方式，清洗多孔泡沫金属填充的中空管的内腔。
所属类别：	发明专利