详情

原文传递一种基于金铂纳米花的侧向流动生物传感器检测分析的优化方法

专利名称：	一种基于金铂纳米花的侧向流动生物传感器检测分析的优化方法
摘要：	本发明属于免疫测定和其他生物检测技术领域，具体涉及一种基于金铂纳米花的侧向流动生物传感器检测分析的优化方法，包括对用于制备金铂纳米花‑抗体偶联物时所用金铂纳米花溶液pH值、对用于制备金铂纳米花‑抗体偶联物时抗体用量、样品溶液中金铂纳米花‑抗体偶联物溶液用量、测试线制备条件测优化的优化。本发明相比现有技术具有以下优点：本发明中通过对检测分析过程进行优化，能使基于金铂纳米花的侧向流动生物传感器具有最佳性能，相比现有技术产生能增强侧向流动生物传感器对低浓度目标蛋白检测灵敏性；可用于生物基质中的蛋白检测，还可进一步扩展到其他生物监测，例如DNA和microRNA，具有较大的推广潜力。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	安徽;34
申请人：	安徽科技学院
发明人：	刘国东;张静;于庆才;钱立生;张学记
专利状态：	有效
申请日期：	2019-01-16T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-18T00:00:00+0800
申请号：	CN201910041394.8
公开号：	CN109900897A
代理机构：	合肥广源知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	宋宇晴
分类号：	G01N33/543(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	233100 安徽省滁州市凤阳县东华路
主权项：	1.一种基于金铂纳米花的侧向流动生物传感器检测分析的优化方法，包括将标记物与抗体相连制备标记物-抗体偶联物，然后与目标蛋白混合发生免疫反应后，通过侧向流动生物传感器对目标蛋白进行检测，其特征在于，所述标记物为金铂纳米花，目标蛋白为兔免疫球蛋白，所述抗体为羊抗兔IgG；包括对用于制备金铂纳米花-抗体偶联物时所用金铂纳米花溶液pH值、对用于制备金铂纳米花-抗体偶联物时抗体用量、对样品溶液中金铂纳米花-抗体偶联物溶液用量、对侧向流动生物传感器的测试线制备条件的优化。 2. 如权利要求1所述一种基于金铂纳米花的侧向流动生物传感器检测分析的优化方法，其特征在于，基于金铂纳米花的侧向流动生物传感器检测分析过程包括以下内容：（1）制备金铂纳米花-抗体偶联物（1.1）在9000转/分钟的条件下离心洗涤500微升质量浓度为1.0mg/mL，完成后弃去上清液，将所得沉淀重悬于1.0mL水中，同时调节pH值，得到pH值为7.0-10.0的金铂纳米花溶液；（1.2）在金铂纳米花溶液中加入15-25微升质量浓度为1.0mg/mL的抗体，并在室温条件下搅拌反应2小时，得到反应溶液；（1.3）然后在反应溶液中加入相当于其重量5%的乙醇胺后搅拌30分钟，然后再加入相当于反应溶液重量10%的BSA搅拌1小时，得到混合液；（1.4）将所得混合液在8000转/分钟的条件下离心10分钟，弃去上清液，将沉淀重悬于洗涤缓冲液中；（1.5）重复步骤（1.4）三次，然后将所得沉淀重悬于洗脱缓冲液中，所述洗脱缓冲液包含20mM磷酸钠缓冲液、5wt%牛血清白蛋白、10wt%蔗糖和0.25wt%吐温-20，然后将所得金铂纳米花-抗体偶联物溶液在4℃的条件下储存备用；（2）利用侧向流动生物传感器分析目标蛋白，所述侧向流动生物传感器包括样品垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述样品垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次搭接并组装在粘性塑料背衬板上，每个搭接部分至少重叠2mm以上，将羊抗兔IgG作为测试线喷在硝酸纤维素膜上，喷膜重复3-6次，将驴抗羊IgG作为控制线喷在硝酸纤维素膜上；（2.1）在上样缓冲液中，将100微升含有不同浓度的兔免疫球蛋白样品溶液与1-3微升金铂纳米花-抗体偶联物溶液混合，得到混合物；（2.2）将所得混合物滴在样品垫上朝吸水垫移动，10分钟后，再加入60微升的上样缓冲液洗涤侧向流动生物传感器；（2.3）在20分钟内目测评估测试线和控制线，拍摄侧向流动生物传感器的图像用于定性分析；（2.4）使用便携式条形读取器记录测试线和控制线的强度，即所得曲线的峰面积，用于定量分析。 3.如权利要求2所述一种基于金铂纳米花的侧向流动生物传感器检测分析的优化方法，其特征在于，所述洗涤缓冲液含10mMPBS和1wt%BSA；所述上样缓冲液含10mM的PBS、1wt%BSA和0.1wt%PVP。 4.如权利要求2所述一种基于金铂纳米花的侧向流动生物传感器检测分析的优化方法，其特征在于，所述用于制备金铂纳米花-抗体偶联物的金铂纳米花溶液pH为9。 5.如权利要求2所述一种基于金铂纳米花的侧向流动生物传感器检测分析的优化方法，其特征在于，用于制备金铂纳米花-抗体偶联物的抗体相当于金铂纳米花溶液的用量为25μg/mL。 6.如权利要求2所述一种基于金铂纳米花的侧向流动生物传感器检测分析的优化方法，其特征在于，所述将羊抗兔IgG作为测试线喷在硝酸纤维素膜上，喷膜重复5次。 7.如权利要求2所述一种基于金铂纳米花的侧向流动生物传感器检测分析的优化方法，其特征在于，所述步骤（2.1）中将100微升含有不同浓度的兔免疫球蛋白样品溶液与2.5微升金铂纳米花-抗体偶联物溶液混合。 8.一种如权利要求2所述基于金铂纳米花的侧向流动生物传感器检测分析的优化方法，其特征在于，在上样缓冲液中，用10wt%人血浆中添加兔免疫球蛋白，制备不同浓度的兔免疫球蛋白样品溶液。 9.如权利要求1或8所述一种基于金铂纳米花的侧向流动生物传感器检测分析的优化方法，其特征在于，还包括步骤（2.5），在侧向流动生物传感器添加含3-氨基-9-乙基-咔唑和过氧化氢的显色底液显色，然后拍摄侧向流动生物传感器的图像用于定性分析，使用便携式条形读取器记录测试线和控制线的强度，即所得曲线的峰面积，用于定量分析。 10.如权利要求1所述一种基于金铂纳米花的侧向流动生物传感器检测分析的优化方法，其特征在于，所述金铂纳米花的制备方法为，将0.5mL的1wt％氯金酸溶液加入到50mL水溶液中，得到氯金酸预制液，加热至沸腾，并在搅拌条件下，将0.8mL的1wt％柠檬酸钠溶液快速加入；直到出现金红色溶液，再次加热至沸腾，加入1mL的0.1M抗坏血酸，再加入1.25mL的1wt％氯铂酸溶液，持续加热25分钟后，即得。
所属类别：	发明专利