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原文传递一种基于金铂纳米花的侧向流动免疫分析方法

专利名称：	一种基于金铂纳米花的侧向流动免疫分析方法
摘要：	本发明属于免疫检测和分析领域，具体涉及一种基于金铂纳米花的侧向流动免疫分析方法，以金铂纳米花作为标记物与抗体相连，得到金铂纳米花‑抗体混合液，与蛋白质靶标混合，用侧向流动生物传感器进行分析，能够实现对蛋白质靶标浓度的定性和定量分析，分析方法简单，同时金铂纳米花还具有催化作用，当添加显色底物后，最低能够检测到浓度为0.05 ng/mL兔免疫球蛋白，通过与现有以金纳米颗粒的侧向流动免疫分析能检测到的目标蛋白浓度低20倍，且其制备方法简单，能够用于快速检测，灵敏度高，检测方法简单，方便在基础研究和医学诊断中推广。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	安徽;34
申请人：	安徽科技学院
发明人：	刘国东;张静;于庆才;钱立生;张学记
专利状态：	有效
申请日期：	2019-01-16T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-10T00:00:00+0800
申请号：	CN201910040705.9
公开号：	CN109738636A
代理机构：	合肥广源知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	宋宇晴
分类号：	G01N33/543(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	233100 安徽省滁州市凤阳县东华路
主权项：	1.一种基于金铂纳米花的侧向流动免疫分析方法，其特征在于，以金铂纳米花作为标记物与抗体相连，得到金铂纳米花-抗体混合液，与蛋白质靶标混合，用侧向流动生物传感器进行分析，所述侧向流动生物传感器包括样品垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述硝酸纤维素膜包括测试区和对照区；以兔免疫球蛋白为蛋白质靶标，在侧向流动生物传感器的样品垫上，兔免疫球蛋白与金铂纳米花-抗体混合液混合后与抗体发生免疫反应，形成金铂纳米花-抗体-兔免疫球蛋白复合物，所得金铂纳米花-抗体-兔免疫球蛋白复合物继续沿着硝酸纤维素膜迁移，到达测试区时，通过第二次免疫反应捕获复合物，得到夹心型复合物金铂纳米花-抗体-兔免疫球蛋白-抗体，所述夹心型复合物固定在侧向流动生物传感器的测试区上，得到测试区的黑色条带，即测试线；所得金铂纳米花-抗体混合液继续沿着硝酸纤维素膜迁移，到达对照区，得铂纳米花-抗体混合液被二抗捕获在对照区上，得到对照区的黑色条带，即控制线；然后在测试区和对照区添加显色底物AEC和H 2O2增强测试线和控制线的颜色强度；获得测试线和控制线的照片图像，观察测试线和控制线的颜色变化获得定性分析，通过使用便携式条带读取器读取包含测试线和控制线的测试条带的峰面积，获得定量分析。 2. 如权利要求1所述一种基于金铂纳米花的侧向流动免疫分析方法，其特征在于，所述金铂纳米花的制备方法为，将0.5mL的1wt％氯金酸溶液加入到50mL水溶液中，得到氯金酸预制液，加热至沸腾，并在搅拌条件下，将0.8mL的1wt％柠檬酸钠溶液快速加入；等到出现金红色溶液，然后保持沸腾，加入1mL的0.1M抗坏血酸，再加入1.25 mL的1wt％氯铂酸，持续加热25分钟后，即得。 3.如权利要求1所述一种基于金铂纳米花的侧向流动免疫分析方法，其特征在于，所述金铂纳米花-抗体1混合液的制备方法为：在9000转/分钟的条件下离心10分钟洗涤500微升浓度为1.0mg/mL的金铂纳米花溶液，完成后弃去上清液，得到沉淀重悬于1.0mL、pH值为9.0的水中，然后加入25微升浓度为1.0mg/mL的抗体1，在室温条件下搅拌反应2小时，加入相当于其重量5%乙醇胺溶液搅拌30分钟，再加入相当于其重量10%BSA搅拌1小时，然后将所得混合物在9000转/分钟的条件下离心10分钟；弃去上清液，将沉淀重悬于洗涤缓冲液中，重复上述步骤3次，将沉淀重悬于含有20mM磷酸钠缓冲液、5wt%牛血清白蛋白、10wt%蔗糖和0.25wt%吐温-20的洗脱缓冲液中，得到金铂纳米花-抗体1混合液，在4℃的条件下备用。 4.如权利要求1所述一种基于金铂纳米花的侧向流动免疫分析方法，其特征在于，所述侧向流动生物传感器由样品垫、硝酸纤维素膜和吸水垫在粘性塑料背衬板上组装得到，其中硝酸纤维素膜喷涂测试线和控制线，将抗体羊抗兔IgG作为测试线喷在硝酸纤维素膜上，喷膜重复5次，将二抗驴抗羊IgG作为控制线喷在硝酸纤维素膜上。 5.如权利要求1所述一种基于金铂纳米花的侧向流动免疫分析方法，其特征在于，在添加显色底物前，在蛋白质靶标不同浓度的条件下，基于金铂纳米花用侧向流动生物传感器检测后得到对应的测试线和控制线的照片图像，同时由便携式条带读取器读取得到相应测试条带的峰面积结果；在添加显色底物后，在蛋白质靶标不同浓度的条件下，基于金铂纳米花用侧向流动生物传感器检测后得到对应的测试线和控制线的照片图像，同时由便携式条带读取器读取得到相应测试条带的峰面积结果。 6.如权利要求5所述一种基于金铂纳米花的侧向流动免疫分析方法，其特征在于，在添加显色底物前和添加显色底物后，分别根据蛋白质靶标不同浓度对应相应的测试条带峰面积数据得到相应的曲线图。 7.如权利要求5所述一种基于金铂纳米花的侧向流动免疫分析方法，其特征在于，所述蛋白质靶标的不同浓度分别为0ng/mL、0.01ng/mL、0.05ng/mL、0.1ng/mL、0.5ng/mL、1ng/mL、2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL。
所属类别：	发明专利