专利名称: |
一种甲型和乙型流感病毒抗原胶体金法联合检测试剂盒及其制备方法 |
摘要: |
本发明公开了一种甲型和乙型流感病毒抗原胶体金法联合检测试剂盒及其制备方法,涉及流感病毒检测盒领域。该联合检测试剂盒包括的检测卡上包被胶体金标记的鼠抗甲型流感病毒单克隆抗体和胶体金标记的鼠抗乙型流感病毒单克隆抗体;检测卡的NC膜的质控线C位置包被有羊抗鼠多克隆抗体,乙型流感检测线T1位置包被有鼠抗乙型流感病毒单克隆抗体,甲型流感检测线T2位置包被有鼠抗甲型流感单克隆抗体。该试剂盒可以同时检测样本中的甲型和乙型两种流感病毒,该试剂盒具有检测速度快,灵敏度高等特点。 |
专利类型: |
发明专利 |
国家地区组织代码: |
江苏;32 |
申请人: |
江苏硕世生物科技股份有限公司 |
发明人: |
尚倩倩;杨标;金巍;刘中华;王国强 |
专利状态: |
有效 |
申请日期: |
2019-04-26T00:00:00+0800 |
发布日期: |
2019-06-18T00:00:00+0800 |
申请号: |
CN201910347236.5 |
公开号: |
CN109900913A |
代理机构: |
北京超成律师事务所 |
代理人: |
唐宁 |
分类号: |
G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33 |
申请人地址: |
225300 江苏省泰州市开发区寺巷富野村、帅于村A幢(G19)第三层厂房与第三、第四层办研区 |
主权项: |
1.一种甲型和乙型流感病毒抗原胶体金法联合检测试剂盒,其特征在于,其包括检测卡,所述检测卡包括壳体和固定在所述壳体内部用于检测甲型和乙型流感病毒的胶体金层析试纸条; 其中,所述胶体金层析试纸条包括设置在底板上的依次搭接的样品垫、胶体金垫、NC膜和吸水纸; 所述NC膜的质控线C位置包被有羊抗鼠多克隆抗体,所述NC膜的乙型流感检测线T1位置包被有鼠抗乙型流感病毒单克隆抗体,所述NC膜的甲型流感检测线T2位置包被有鼠抗甲型流感单克隆抗体; 所述胶体金垫包被有胶体金标记的鼠抗甲型流感病毒单克隆抗体和胶体金标记的鼠抗乙型流感病毒单克隆抗体。 2.根据权利要求1所述的甲型和乙型流感病毒抗原胶体金法联合检测试剂盒,其特征在于,所述联合检测试剂盒还包括样本提取液,所述样本提取液为0.1M的磷酸盐缓冲液,pH7.3-7.7; 所述样本提取液含有浓度为0.5%~1.0%的氯化钠以及浓度为0.1%~1.0%的Tween-20。 3.根据权利要求1或2所述的甲型和乙型流感病毒抗原胶体金法联合检测试剂盒,其特征在于,所述联合检测试剂盒还包括以下组件的一种或两种:采样拭子和取样滴管; 其中,所述采样拭子长度为15~20cm、直径为1.0~2.0mm、材质为PP、PE或ABS,所述采样拭子的端部粘附有用于吸附咽部样本的长度为1.0~2.0cm、直径为0.3~0.8cm的脱脂棉或海绵。 4.根据权利要求1或2所述的甲型和乙型流感病毒抗原胶体金法联合检测试剂盒,其特征在于,所述吸水纸的厚度为0.5mm~1.0mm、宽度为3.84~3.86mm、长度为1.9~2.1cm; 优选的,所述壳体为塑料壳体; 优选的,所述塑料壳体的材质选自HDPE、LDPE、PP、ABS中的一种或多种; 优选的,所述底板的材质为聚氯乙烯; 优选的,所述胶体金垫的材质为玻璃纤维,所述胶体金垫厚度为0.2mm~1.0mm、宽度为3.84~3.86mm、长度为0.5~0.8cm; 优选的,所述样品垫的材质为玻璃纤维,所述样品垫的厚度为0.2mm~1.0mm、宽度为3.84~3.86mm、长度为1.5~2.0cm; 优选的,所述NC膜的材质为硝酸纤维素膜,所述NC膜的厚度为0.1mm~0.5mm、宽度为3.84~3.86mm、长度为1.8~2.2cm,所述NC膜上的平均孔径大小为5μm~20μm。 5.根据权利要求4所述的甲型和乙型流感病毒抗原胶体金法联合检测试剂盒,其特征在于,所述塑料壳体包括顶盖部件和底板部件,所述顶盖部件上具有用于观察质控线C、乙型流感检测线T1和甲型流感检测线T2的观察窗; 所述观察窗包括一个长方形窗口和两个半圆形窗口,其中长方形窗口尺寸为(14.80~14.85)mm×(3.70~3.75)mm,长方形窗口的两侧各衔接一个半径为(3.30~3.35)mm的半圆形窗口,长方形窗口和两个半圆形窗口共同组成尺寸为(21.40~21.55)mm×(3.70~3.75)mm的观察窗; 优选的,所述塑料壳体的外轮廓尺寸为:(74.50~75.50)mm×(24.50~25.50)mm×(3.84~3.86)mm,其内部具有的卡槽结构用于适配宽度为3.84~3.86mm、长度为5.8~6.2cm的所述胶体金层析试纸条。 6.一种甲型和乙型流感病毒抗原胶体金法联合检测试剂盒的制备方法,其特征在于,其包括如下步骤: 组装步骤:将用于检测甲型和乙型流感病毒的胶体金层析试纸条固定于壳体内部以构成检测卡, 其中,所述胶体金层析试纸条包括设置在底板上的依次搭接的样品垫、胶体金垫、NC膜和吸水纸; 所述NC膜的质控线C位置包被有羊抗鼠多克隆抗体,所述NC膜的乙型流感检测线T1位置包被有鼠抗乙型流感病毒单克隆抗体,所述NC膜的甲型流感检测线T2位置包被有鼠抗甲型流感单克隆抗体; 所述胶体金垫包被有胶体金标记的鼠抗甲型流感病毒单克隆抗体和胶体金标记的鼠抗乙型流感病毒单克隆抗体。 7.如权利要求6所述的甲型和乙型流感病毒抗原胶体金法联合检测试剂盒的制备方法,其特征在于,在所述组装步骤之前,所述制备方法还包括如下步骤: 胶体金垫制备步骤: 将含有胶体金标记的鼠抗甲型流感病毒单克隆抗体的免疫金溶液A和含有胶体金标记的鼠抗乙型流感病毒单克隆抗体的免疫金溶液B混合得到的混合免疫金溶液,将混合免疫金溶液吸附于玻璃纤维上,制得包被有胶体金标记的鼠抗甲型流感病毒单克隆抗体和胶体金标记的鼠抗乙型流感病毒单克隆抗体的胶体金垫; NC膜制备步骤: 用包被液分别稀释羊抗鼠多克隆抗体、鼠抗乙型流感病毒单克隆抗体和鼠抗甲型流感单克隆抗体,分别得到C线工作液、T1线检测工作液和T2线检测工作液; 将C线工作液、T1线检测工作液和T2线检测工作液在硝酸纤维素膜上的不同位置进行划线处理形成具有质控线C、乙型流感检测线T1和甲型流感检测线T2的NC膜,其中,质控线C位置包被有羊抗鼠多克隆抗体、乙型流感检测线T1位置包被有鼠抗乙型流感病毒单克隆抗体和甲型流感检测线T2位置包被有鼠抗甲型流感单克隆抗体; 胶体金层析试纸条制备步骤: 将经干燥处理后的样品垫、所述胶体金垫、所述NC膜和吸水纸依次搭接在底板上,形成胶体金层析试纸条; 优选的,所述壳体为塑料壳体; 优选的,所述塑料壳体的材质选自HDPE、LDPE、PP、ABS中的一种或多种; 优选的,所述底板的材质为聚氯乙烯; 优选的,每25cm×30cm面积的玻璃纤维上吸附体积为25~35mL的混合免疫金; 优选的,免疫金溶液A的OD540大于4.0;免疫金溶液B的OD540大于4.0;混合免疫金溶液的OD540大于8。 8.如权利要求6所述的甲型和乙型流感病毒抗原胶体金法联合检测试剂盒的制备方法,其特征在于,在胶体金垫制备步骤之前,所述制备方法还包括:免疫金溶液制备步骤; 所述免疫金溶液制备步骤包括: 向胶体金溶液中加入鼠抗甲型流感病毒单克隆抗体或鼠抗乙型流感病毒单克隆抗体以及牛血清白蛋白溶液,离心得到沉淀,所述沉淀用金标稀释液重悬,得到含胶体金标记的鼠抗甲型流感病毒单克隆抗体的免疫金溶液A或含胶体金标记的鼠抗乙型流感病毒单克隆抗体的免疫金溶液B; 优选的,在所述免疫金溶液制备步骤中,每1mL所述胶体金溶液加入5μg鼠抗甲型流感病毒单克隆抗体或5μg鼠抗乙型流感病毒单克隆抗体; 优选的,在所述免疫金溶液制备步骤中,所述胶体金溶液的紫外可见光最大吸收峰值为523~540nm; 优选的,在所述免疫金溶液制备步骤中,所述金标稀释液为10~30mM的Tris-HCL缓冲液,pH8.0-8.2,其含有:0.5%~1.5%BSA、5%~10%蔗糖、1%~5%海藻糖以及0.1%~1%TritonX-100。 9.如权利要求7所述的甲型和乙型流感病毒抗原胶体金法联合检测试剂盒的制备方法,其特征在于,在所述胶体金层析试纸条制备步骤中,干燥处理条件为:相对湿度小于30%、环境温度37℃~45℃,干燥时间为6~18小时; 优选的,所述干燥处理的干燥方式为鼓风干燥、晾干、真空干燥中的一种或多种。 10.如权利要求7所述的甲型和乙型流感病毒抗原胶体金法联合检测试剂盒的制备方法,其特征在于,在所述NC膜制备步骤中,所用的包被液为12.5mM~50mM的硼砂缓冲液,pH9.5-9.7,其含有1%~5.0%的海藻糖; 优选的,在所述NC膜制备步骤中,C线工作液中的羊抗鼠多克隆抗体浓度为0.5~2.0mg/mL,T1线检测工作液中的鼠抗乙型流感病毒单克隆抗体浓度为0.5~2.0mg/mL,T2线检测工作液中的鼠抗甲型流感单克隆抗体浓度为0.5~2.0mg/mL。 |
所属类别: |
发明专利 |