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原文传递一种肌红蛋白时间分辨荧光免疫层析测定试剂盒

专利名称：	一种肌红蛋白时间分辨荧光免疫层析测定试剂盒
摘要：	本发明提供了一种肌红蛋白时间分辨荧光免疫层析测定试剂盒，包括检测卡以及荧光微球工作液；所述检测卡包括用于检测肌红蛋白的检测卡；荧光微球工作液中含有标记相应抗体的时间分辨荧光微球。检测过程中，结合在检测区和质控区的荧光微球复合物，在激发光的作用下，发射出的荧光，由荧光免疫分析仪采集处理，即可计算出检测结果。本发明具有操作简便、测量准确、灵敏度高和特异性强的优点。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	天津;12
申请人：	天津医科大学
发明人：	汤乃军;刘萍;陈曦;单安琪;闫梦璠
专利状态：	有效
申请日期：	2019-03-28T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-21T00:00:00+0800
申请号：	CN201910242395.9
公开号：	CN109917138A
代理机构：	天津企兴智财知识产权代理有限公司
代理人：	李俊建
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	300070 天津市和平区气象台路22号天津医科大学
主权项：	1.一种肌红蛋白时间分辨荧光免疫层析测定试剂盒，其特征在于：包括检测卡以及荧光微球工作液；所述检测卡包括用于检测肌红蛋白的检测卡；所述的用于检测肌红蛋白的检测卡，包括硝酸纤维素膜，其上分别包被肌红蛋白抗体和链霉亲和素在检测区和质控区；所述荧光微球工作液，包括生物素标记的时间分辩荧光微球与抗体标记的时间分辨微球形成的混储液；抗体标记的时间分辨微球为具有与检测区单抗不同位点的肌红蛋白抗体标记的时间分辨荧光微球。 2.根据权利要求1所述的肌红蛋白时间分辨荧光免疫层析测定试剂盒，其特征在于：以相应的抗体或生物素标记物浓度计，肌红蛋白抗体标记的时间分辨荧光微球的浓度为600～1000ng/mL，生物素标记的时间分辩荧光微球的浓度为40～180ng/mL；优选的，肌红蛋白抗体标记的时间分辨荧光微球的浓度为800ng/mL；生物素标记的时间分辩荧光微球的浓度为110ng/mL。 3.根据权利要求1所述的肌红蛋白时间分辨荧光免疫层析测定试剂盒，其特征在于：所述时间分辨荧光微球的粒径为50～150nm；且微球内包裹的镧系元素为铕，活性官能团为羧基。 4.根据权利要求1所述的肌红蛋白时间分辨荧光免疫层析测定试剂盒，其特征在于：所述的荧光微球工作液的制备方法，包括如下步骤， a)荧光微球的活化：用5-50mM的pH6.0-8.0缓冲液，将荧光微球的质量-体积浓度调整为0.05％-0.2％，优选的浓度为0.1％；向体系中加入10-100μL浓度为10-50mg/mL的碳二亚胺溶液，超声混匀后加入10-100μL浓度为10-50mg/mL的N-羟基硫代琥珀酰亚胺，超声混匀后，常温混匀30-60分钟；离心处理反应后的荧光微球，弃上清后用5-100mM的pH5.0-6.5的MES缓冲液复溶至原体积；2-8℃环境下储存备用； b)荧光微球与抗体蛋白的偶联：向活化好的荧光微球溶液中加入终浓度为50-300μg/mL的抗体或生物素，优选的，抗体的终浓度为80-120ng/mL；生物素终浓度为180-220μg/mL；室温混匀2-4小时后，向其中加入封闭剂，室温混匀0.5-2小时；离心处理，弃上清，沉淀物用至少包含质量浓度0.1％-8％的蔗糖和体积分数0.01％-0.3％的proclin300的PBS或MES作为稀释液重悬至原标记体积，配制成抗体或生物素标记的荧光微球浓储液；优选的，所述的稀释液为含蔗糖质量浓度为8％，海藻糖质量浓度为2％以及体积浓度为0.05％的Procline的pH为6.0的20mM MES；用于稀释浓储配制工作液时，优选的，应包含BSA的质量浓度为0.5％、蔗糖的质量浓度为0.3％、海藻糖的质量浓度为0.2％、Procline的体积浓度为0.05％、tween-20体积浓度为0.05％的pH为7.4的PBS缓冲液。 5.根据权利要求4所述的肌红蛋白时间分辨荧光免疫层析测定试剂盒，其特征在于：步骤b)中，封闭剂为牛血清白蛋白、酪蛋白、甘氨酸或脱脂乳粉中的一种或几种，其质量浓度为0.5-1.5％；优选的，抗体或生物素与荧光微球偶联后，将偶联抗体的荧光微球与偶联生物素的荧光微球按照体积比为1：1-4：1的比例配制成混合浓储液，优选的2：1；将混合浓储液与上述稀释液按体积比1：150～1：750的比例配制成荧光微球工作液；优选的，1:300。 6.根据权利要求1所述的肌红蛋白时间分辨荧光免疫层析测定试剂盒，其特征在于，所述的检测区对应包被的肌红蛋白抗体，肌红蛋白抗体浓度为600-1000ng/mL；质控区包被的链霉亲和素浓度在1-3mg/mL。 7.一种制备如权利要求1～6任一项所述的肌红蛋白时间分辨荧光免疫层析测定试剂盒的方法，其特征在于：包括检测卡的制备以及荧光微球工作液的制备；所述检测卡的制备包括以下步骤， 1)检测区和质控区的制备；将对应的抗体和链霉亲和素均匀分散于含质量浓度为0.5％-1％海藻糖的缓冲液中，均匀的喷涂于硝酸纤维素膜的检测区和质控区，并在35-50℃条件下烘干固化。 2)检测卡组装将吸水纸、含检测区和质控区的硝酸纤维素膜、滤血膜、样品垫依次搭接(1-2mm)的粘贴于底板，裁切成3-4mm的卡条，装入卡壳中，制成肌红蛋白检测卡。 8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于：将对应的抗体和链霉亲和素分别以1000ng/mL和2mg/mL终浓度均匀分散于含质量浓度为1％海藻糖的缓冲液中，均匀的喷涂于硝酸纤维素膜的检测区和质控区，并在35-50℃条件下烘干固化。 9.如权利要求所述的试剂盒或所述的制备方法得到的检测盒在定量检测肌红蛋白的含量的试剂中的应用。
所属类别：	发明专利