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一种磷酸化蛋白的富集方法和磷酸化蛋白的检测方法
| 专利名称： | 一种磷酸化蛋白的富集方法和磷酸化蛋白的检测方法 |
| 摘要： | 本发明提供了一种磷酸化蛋白的富集方法和磷酸化蛋白的检测方法，属于磷酸化蛋白富集检测技术领域。本发明所述磷酸化蛋白的富集方法包括以下步骤：将磷酸化蛋白样品、缓冲溶液与壳聚糖功能化磁性材料混合，磁分离后，得到富集有磷酸化蛋白的磁性材料；将所述富集有磷酸化蛋白的磁性材料与酸液混合，磁分离后，得到磷酸化蛋白的富集液；所述壳聚糖功能化磁性材料的内核为Fe3O4，Fe3O4外层依次包裹二氧化硅和壳聚糖聚合材料。本发明提供的富集方法能够克服传统免疫沉淀富集方法抗体的局限，具有广泛的适用性。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 天津;12 |
| 申请人： | 军事科学院军事医学研究院环境医学与作业医学研究所 |
| 发明人： | 周焕英;高志贤;梁俊;王蕊;王永辉 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请日期： | 2019-03-29T00:00:00+0800 |
| 发布日期： | 2019-06-21T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN201910248577.7 |
| 公开号： | CN109916701A |
| 代理机构： | 北京高沃律师事务所 |
| 代理人： | 代芳 |
| 分类号： | G01N1/40(2006.01);G;G01;G01N;G01N1 |
| 申请人地址： | 300041 天津市和平区大理道1号 |
| 主权项： | 1.一种磷酸化蛋白的富集方法，包括以下步骤： 将磷酸化蛋白样品、缓冲溶液与壳聚糖功能化磁性材料混合，磁分离后，得到富集有磷酸化蛋白的磁性材料； 将所述富集有磷酸化蛋白的磁性材料与酸液混合，磁分离后，得到磷酸化蛋白的富集液； 所述壳聚糖功能化磁性材料的内核为Fe3O4，所述Fe3O4外层依次包裹二氧化硅和壳聚糖聚合材料。 2.根据权利要求1所述的富集方法，其特征在于，所述壳聚糖功能化磁性材料由包括Fe3O4、水、正硅酸乙酯、交联剂和壳聚糖的原料制备得到。 3.根据权利要求1所述的富集方法，其特征在于，所述缓冲溶液的pH值为10～12。 4.根据权利要求1～3任一项所述的富集方法，其特征在于，所述壳聚糖功能化磁性材料以悬浮液的形式提供，所述悬浮液中壳聚糖功能化磁性材料的浓度为1～10mg/mL。 5.根据权利要求4所述的富集方法，其特征在于，所述悬浮液中的液态物质为3wt.％的冰乙酸水溶液。 6.根据权利要求4所述的富集方法，其特征在于，所述悬浮液与缓冲溶液的体积比为1：(1～100)。 7.根据权利要求4所述的富集方法，其特征在于，所述酸液为质量浓度0.1％的三氟乙酸的水溶液。 8.根据权利要求7所述的富集方法，其特征在于，所述酸液与悬浮液的体积比为1:1。 9.一种磷酸化蛋白的检测方法，包括以下步骤：将权利要求1～8任一项所述富集方法得到的磷酸化蛋白的富集液与芥子酸混合后，点在靶板上，采用基质辅助激光解吸飞行时间质谱仪对磷酸化蛋白的含量进行测定。 10.根据权利要求9所述的检测方法，其特征在于，所述磷酸化蛋白的富集液与芥子酸的体积比为1:(1～3)。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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