详情

原文传递一种检测食品中广谱型沙门氏菌的试纸条及其制备、使用方法

专利名称：	一种检测食品中广谱型沙门氏菌的试纸条及其制备、使用方法
摘要：	本发明涉及生物技术领域，具体公开一种检测食品中广谱型沙门氏菌的试纸条及其制备、使用方法。所述试纸条，包括PVC底板及结合在PVC底板至少一表面中段的硝酸纤维素膜，设置在所述PVC底板至少一表面的一端、且与所述硝酸纤维素膜邻接的吸水滤纸，设置在所述PVC底板至少一表面的另一端、且与所述硝酸纤维素膜邻接的结合垫，以及设置在远离所述硝酸纤维素膜的一端、且与所述结合垫邻接的样品垫；其中，所述硝酸纤维素膜分别在临近结合垫和吸水滤纸处设有检测线和质控线。本发明提供的试纸条能够快速、简便、广谱地检测多个血清群的沙门氏菌，从而能够方便快捷地检测食品中可能污染的沙门氏菌。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广东;44
申请人：	广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心
发明人：	翁文川;陈声;郭九标;凌莉
专利状态：	有效
申请日期：	2017-12-15T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-25T00:00:00+0800
申请号：	CN201711351523.0
公开号：	CN109932505A
代理机构：	深圳中一联合知识产权代理有限公司
代理人：	张全文
分类号：	G01N33/532(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	510000 广东省广州市珠江新城花城大道66号广东国检大厦B座
主权项：	1.一种检测食品中广谱型沙门氏菌的试纸条，其特征在于：包括PVC底板及结合在PVC底板至少一表面中段的硝酸纤维素膜，设置在所述PVC底板至少一表面的一端、且与所述硝酸纤维素膜邻接的吸水滤纸，设置在所述PVC底板至少一表面的另一端、且与所述硝酸纤维素膜邻接的结合垫，以及设置在远离所述硝酸纤维素膜的一端、且与所述结合垫邻接的样品垫；其中，所述硝酸纤维素膜分别在临近结合垫和吸水滤纸处设有检测线和质控线；所述检测线包被有沙门氏菌单克隆抗体SP1；所述质控线包被有羊抗兔IgG抗体；所述结合垫包被有胶体金标记的沙门氏菌多单克隆抗体DSP1。 2.如权利要求1所述的检测食品中广谱型沙门氏菌的试纸条，其特征在于：所述检测线包被有沙门氏菌多单克隆抗体DSP1；所述质控线包被有羊抗兔IgG抗体；所述结合垫包被有胶体金标记的沙门氏菌单克隆抗体SP1。 3.如权利要求1所述的检测食品中广谱型沙门氏菌的试纸条，其特征在于：所述吸水滤纸邻近所述硝酸纤维素膜的一端叠合设置在所述硝酸纤维素膜表面；和/或所述结合垫邻近所述硝酸纤维素膜的一端叠合设置在所述硝酸纤维素膜表面；和/或所述样品垫邻近所述结合垫的一端叠合设置在所述结合垫表面。 4.如权利要求1-3任一项所述的检测食品中广谱型沙门氏菌的试纸条的制备方法，其特征在于：包括以下步骤： a.利用氯金酸溶液和柠檬酸钠溶液制备胶体金，得到胶体金溶液； b.在碱性条件下，向所述胶体金溶液中加入沙门氏菌多单克隆抗体DSP1进行标记处理，经封闭处理、离心、重悬，得到胶体金标记的沙门氏菌多单克隆抗体DSP1； c.将玻璃纤维素膜置于结合垫处理液中浸泡处理，制备金标垫；用胶体金标记的沙门氏菌多单克隆抗体DSP1对所述金标垫进行喷金处理后，干燥后得到结合垫； d.取沙门氏菌单克隆抗体SP1、羊抗兔IgG抗体，采用划膜仪分别划至硝酸纤维素膜的检测线、质控线的位置； e.将玻璃纤维素膜置于样品垫处理液中浸泡处理，干燥后得到样品垫； f.将吸水滤纸贴于PVC底板上，且所述吸水滤纸的一端叠合在所述硝酸纤维素膜的一端表面；将结合垫的一端叠合在所述硝酸纤维素膜的另一端表面；将样本垫的一端叠合在所述结合垫的另一端表面，进行切割处理，得到检测食品中广谱型沙门氏菌的试纸条。 5.如权利要求4所述的检测食品中广谱型沙门氏菌的试纸条的制备方法，其特征在于：步骤c、e中，所述浸泡处理的时间为10-60s；和/或步骤c、e中，所述干燥的的时间为12-18h；和/或步骤c中，干燥的条件为温度36-38℃，湿度10％-30％；和/或步骤e中，干燥的条件为温度36-38℃。 6.如权利要求4所述的检测食品中广谱型沙门氏菌的试纸条的制备方法，其特征在于：所述胶体金溶液的制备方法为：量取纯化水装入锥形瓶中，加热至340℃，搅拌至沸腾，加入浓度为1％的氯金酸，加热并快速加入等体积的浓度为2％的柠檬酸钠，继续加热，液体颜色稳定为酒红色，室温冷却，得到粒径为35-45nm的胶体金溶液。 7.如权利要求4所述的检测食品中广谱型沙门氏菌的试纸条的制备方法，其特征在于：所述胶体金标记的沙门氏菌多单克隆抗体DSP1的标记方法为：量取10mL胶体金溶液，加入0.2M的K2CO3溶液，至pH为8.2±0.05，放置在速度为70-90rpm的摇床上3-5min，加入150μg沙门氏菌多单克隆抗体DSP1，进行标记处理25-35min，加入100Μ的10％的BSA溶液，进行封闭处理25-35min，15000rpm、4℃离心10-15min，弃上清液，沉淀用600μL金标重悬液重悬，得到胶体金标记的沙门氏菌多单克隆抗体DSP1，2-8℃备用。 8.如权利要求4所述的检测食品中广谱型沙门氏菌的试纸条的制备方法，其特征在于：步骤c中，所述喷金处理采用三维平面划膜仪实现；和/或步骤d中，所述划膜仪的划膜量为1μL/cm，平台移动速度为50mm/s。 9.如权利要求1-3任一项所述的检测食品中广谱型沙门氏菌的试纸条的使用方法，其特征在于：包括以下步骤： (1)将样品经缓冲蛋白胨营养液富集培养后，取培养液菌体进行煮沸灭活处理，得到灭火后样本； (2)取灭活后样本100-200uL加入到放有检测食品中广谱型沙门氏菌的试纸条的试纸外壳的检测孔，静置15-30min； (3)从试纸外壳的观察孔观察试纸条，硝酸纤维素膜上出现检测线、质控线两条线则为阳性，只出现质控线，则为阴性；无质控线，检测条出现品质问题，需更换检测条重新检测。 10.如权利要求9所述的检测食品中广谱型沙门氏菌的试纸条的使用方法，其特征在于：所述检测食品中广谱型沙门氏菌的试纸条的样品垫在试纸外壳的检测处；试纸条的硝酸纤维素膜在试纸外壳的观察孔处。
所属类别：	发明专利