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一种近红外荧光蛋白smURFP及直接检测胆绿素的方法
| 专利名称： | 一种近红外荧光蛋白smURFP及直接检测胆绿素的方法 |
| 摘要： | 本发明公开一种近红外荧光蛋白smURFP基因序列以及一种直接检测胆绿素的方法。本发明利用近红外荧光蛋白smURFP与样品中的胆绿素进行共价结合，经642nm激发光激发后通过酶标仪检测器670nm处发射光强度来直接对胆绿素进行定量检测，从而简化了已有的检测手段的操作，避免了成本较高操作要求较苛刻的仪器的使用，同时提高了对胆绿素检测的灵敏性，具有较高的应用价值。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 天津;12 |
| 申请人： | 天津大学 |
| 发明人： | 王泽方;朱夏庆;王俊;杨海涛 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请日期： | 2019-02-27T00:00:00+0800 |
| 发布日期： | 2019-06-25T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN201910144442.6 |
| 公开号： | CN109932347A |
| 代理机构： | 天津市北洋有限责任专利代理事务所 |
| 代理人： | 程小艳 |
| 分类号： | G01N21/64(2006.01);G;G01;G01N;G01N21 |
| 申请人地址： | 300072 天津市南开区卫津路92号 |
| 主权项： | 1.一种用于直接检测胆绿素的近红外荧光蛋白smURFP，其特征在于,基因序列为SEQID NO：1。 2.一种直接检测胆绿素的方法，其特征在于，包括以下步骤： 1)化学合成近红外荧光蛋白smURFP基因，并将近红外荧光蛋白smURFP在宿主细胞中进行大量表达； 2)分离纯化得到纯度>90％的近红外荧光蛋白smURFP溶液，并使用缓冲液将蛋白溶液稀释成所需浓度； 3)将50μl蛋白溶液与50μl含有胆绿素样品的溶液混匀后孵育； 4)使用酶标仪在激发光激发下检测发射光的荧光强度； 5)根据标准曲线计算所测样品的胆绿素含量。 3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述步骤1)中构建含有SEQ ID NO.1基因序列的原核表达载体，转入大肠杆菌E.coli细胞，表达近红外荧光蛋白smURFP。 4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述步骤2)中采用Ni-亲和层析、阴离子交换层析和分子筛层析分离纯化得到近红外荧光蛋白smURFP。 5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述步骤2)中缓冲液体系包括：pH为8.0、9.4、11.0的50mM Tris-HCL和PBS。 6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述步骤2)中缓冲液盐浓度包括：0mM、100mM、200mM、300mM、400mM、500mM、600mM、700mM、800mM、900mM、1000mM Nacl。 7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述步骤2)中稀释后用于检测胆绿素的检测体系中近红外荧光蛋白smURFP的最终浓度为：0.5μM-50μM。 8.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述步骤2)中含有胆绿素的样品为血清时，缓冲液将血清稀释成20％。 9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤3)中荧光蛋白smURFP与胆绿素溶液混合后，孵育条件为4℃，孵育时间为20min-240min。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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