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原文传递一种组织中泰乐菌素残留的检测方法

专利名称：	一种组织中泰乐菌素残留的检测方法
摘要：	本发明公开一种组织中泰乐菌素残留的检测方法，属于兽药残留检测领域，所述检测方法包括对照品溶液的制备、供试品溶液的制备，之后采用高效液相色谱法以梯度洗脱的方式将所述标准品溶液和供试品溶液注入液相色谱仪中，根据紫外法计算泰乐菌素的残留。本发明通过对液相色谱条件的优选及标准品、供试品制备方法的实验，建立了组织中泰乐菌素残留的检测方法；通过方法学验证试验表明：所建立的方法准确度高、专属性强、重现性良好，能有效的检测组织中泰乐菌素的残留。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	湖北;42
申请人：	华中农业大学
发明人：	袁宗辉;潘源虎;谢书宇;程古月;瞿玮;郝海红;黄安雄;黄玲利;王旭;彭大鹏;陈冬梅;陶燕飞;王玉莲
专利状态：	有效
申请日期：	2019-04-22T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-25T00:00:00+0800
申请号：	CN201910323647.0
公开号：	CN109932460A
代理机构：	北京汇信合知识产权代理有限公司
代理人：	戴凤仪
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	430070 湖北省武汉市狮子山街1号华中农业大学国家兽药残留基准实验室
主权项：	1.一种组织中泰乐菌素残留的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤1、制备供试品样品： (1)将称量好的组织用淋洗溶剂淋洗，匀浆，提取，涡旋，超声，离心处理，得到上清液； (2)重复上述提取步骤一次，第二次离心处理，合并两次上清液； (3)在步骤(2)得到的上清液中加入蛋白沉淀剂，涡旋，离心，取上清液，蒸干，得到残渣； (4)用有机溶剂溶解步骤(3)中的残渣两次，合并两次溶解液； (5)HLB固相萃取小柱净化； (6)氮气吹干洗脱液，加流动相溶解残渣，过滤溶解液，经HPLC检测滤液，制成供试品样品；步骤2、绘制标准曲线取泰乐菌素标准储备液，用流动相依次稀释成10ppm、5ppm、2ppm、1ppm、0.5ppm、0.2ppm和0.1ppm的标准工作品溶液，用HPLC检测，每种浓度每天重复测定5次，重复操作5天，将所得峰面积均值与对应浓度作线性回归，绘制标准曲线并得到线性回归方程和相关系数；步骤3、测定吸取上述标准工作品溶液和供试品样品进行检测，根据外标法计算泰乐菌素残留量；采用高效液相色谱仪对组织中残留的泰乐菌素进行检测。 2.根据权利要求1所述的一种组织中泰乐菌素残留的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、制备供试品样品： (1)用淋洗溶剂将组织淋洗干净，5000r/min匀浆5min，然后将组织置于50mL离心管中，加入提取剂，涡旋5～6min，超声10min，4℃，4000r/min离心10min，取上清液于另一离心管中； (2)重复提取步骤一次，第二次10000r/min离心，合并两次上清液； (3)将步骤(2)得到的上清中液加入0.5mL蛋白沉淀剂，涡旋2min，4℃，10000r/min离心10min，取上清液于旋转蒸发瓶中，置于旋转蒸发仪上蒸干，得到残渣； (4)用有机溶剂溶解步骤(3)中的残渣两次，合并两次溶解液； (5)HLB固相萃取小柱净化，HLB小柱净化过程如下：HLB柱先依次用3mL甲醇、3mL水活化，将上述溶解液倾倒至HLB柱中，控制流速小于3mL/min，用3mL5％氨水、3mL水先后淋洗，抽干，6mL乙腈洗脱，收集洗脱液； (6)置45℃氮气吹干，加流动相1mL溶解残渣，溶解液过0.22μm有机滤膜，滤液经HPLC检测；步骤2、绘制标准曲线取泰乐菌素标准储备液，用流动相依次稀释成10ppm、5ppm、2ppm、1ppm、0.5ppm、0.2ppm和0.1ppm的标准工作品溶液，用HPLC检测，每种浓度每天重复测定5次，重复操作5天，将所得峰面积均值与对应浓度作线性回归，绘制标准曲线并得到线性回归方程和相关系数；步骤3、测定吸取上述标准工作品溶液和供试品样品进行检测，根据外标法计算泰乐菌素残留量；采用高效液相色谱仪对组织中残留的泰乐菌素进行检测。 3.根据权利要求2所述的一种组织中泰乐菌素残留的检测方法，其特征在于：所述淋洗溶剂为3mL体积分数5％氨水、3mL水。 4.根据权利要求2所述的一种组织中泰乐菌素残留的检测方法，其特征在于：所述提取剂为乙腈。 5.根据权利要求2所述的一种组织中泰乐菌素残留的检测方法，其特征在于：所述组织与提取剂的料液比为1:4。 6.根据权利要求2所述的一种组织中泰乐菌素残留的检测方法，其特征在于：所述流动相为0.1M的甲酸铵-乙腈混合液。 7.根据权利要求2所述的一种组织中泰乐菌素残留的检测方法，其特征在于：所述蛋白沉淀剂为体积分数为10％的乙酸锌溶液。 8.根据权利要求2所述的一种组织中泰乐菌素残留的检测方法，其特征在于：步骤(4)中所述有机溶剂为体积分数为的2％偏磷酸和体积分数为20％甲醇的水溶液。 9.根据权利要求2所述的一种组织中泰乐菌素残留的检测方法，其特征在于：所述HPLC检测条件为波长282nm，进样40μL，柱温30℃，流速1mL/min。 10.根据权利要求2所述的一种组织中泰乐菌素残留的检测方法，其特征在于：步骤3中高效液相色谱仪的洗脱梯度为0min(A70：B30)－8min(A70:B30)－15min(A0:B100)－15.1min(A70:B30)－20min(A70:B30)。
所属类别：	发明专利