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原文传递一种DDT单克隆抗体及其制备方法与应用

专利名称：	一种DDT单克隆抗体及其制备方法与应用
摘要：	本发明涉及一种DDT单克隆抗体及其制备方法与应用；与现有技术相比，本发明的优点是：1)特异性强，敏感性高；2)简便、快速。在使用制得的胶体金试纸条时，无需任何其他辅助仪器，可现场操作，只要将检测样加入样品垫，在3至5分钟内即可判定检测结果；3)结果显示形象、直观、准确；4)节省费用，适用范围广，便于推广；所应用制得的胶体金试纸条，无需专业操作人员及任何辅助类仪器，根据反应所显现的条带几分钟内即可判定结果，不仅操作简便、快速、结果直观准确、成本低，并且可以在室外进行检测。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	苏州快捷康生物技术有限公司
发明人：	盛相国
专利状态：	有效
申请日期：	2018-12-25T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-28T00:00:00+0800
申请号：	CN201811590548.0
公开号：	CN109946455A
代理机构：	北京轻创知识产权代理有限公司
代理人：	谈杰
分类号：	G01N33/559(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	215128 江苏省苏州市吴中经济开发区田上江路105号15幢302室
主权项：	1.一种DDT单克隆抗体，其特征在于：其抗体重链可变区氨基酸序列为： QVQLKQSGPGLVKPSQSLSLTCSVTGYSITSGYYWNWIRQFPGNKLEWMGYISYDGSNNYSPSLKNRISITRDTSKNQFFLKLNSVTTEDTATYYCAKGDYWLKLVYFDYWGQGTTVTVSS；抗体轻链可变区氨基酸序列为：MSASPGEKVTMTCSASSSVSYMHWYQQKDYTSPKWWIYDTSKLASGVPFRFSGSGSGNSYSLTISSMEAEDAATYYCFQRSRYPLTFGAGTKLEIKR。 2.一种DDT单克隆抗体的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤1)DDT半抗原的合成；步骤2)DDT半抗原与载体蛋白偶联，并制备包被抗原；步骤3)DDT单克隆抗体的制备。 3.根据权利要求2所述的一种DDT单克隆抗体的制备方法，其特征在于：所述步骤2)DDT半抗原与载体蛋白通过活泼酯法实现偶联，所述载体蛋白为KLH蛋白。 4.根据权利要求2所述的一种DDT单克隆抗体的制备方法，其特征在于：所述步骤2)中制备包被抗原采用活泼酯法，并采用BSA蛋白作为载体蛋白。 5.根据权利要求2所述的一种DDT单克隆抗体的制备方法，其特征在于：所述步骤3)DDT单克隆抗体的制备包括以下步骤：步骤a:采用相同剂量的包被抗原对若干只小鼠进行多次免疫，最后一次超强免疫后3天在无菌条件下取出小鼠脾细胞；步骤b：将步骤a中所取得的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合与培养，得到培养细胞；步骤c：对步骤b中所得的培养细胞进行筛选，选择强阳性、抑制率高、细胞生长旺盛的培养细胞进行亚克隆，然后扩大培养，建立杂交瘤细胞株；步骤d：使用步骤c中所得的杂交瘤细胞株制备腹水，并依次进行抗体纯化、去盐、冷冻抽干和保存。 6.根据权利要求5所述的一种DDT单克隆抗体的制备方法，其特征在于：所述步骤a中包被抗原的剂量为100ug/只，所述的小鼠为6～8周龄健康的雌性BALB/c小鼠，所述的多次免疫间隔时间为2-3周。 7.根据权利要求5所述的一种DDT单克隆抗体的制备方法，其特征在于：所述步骤b中小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞的融合比例为10：1，并采用PEG介导方法融合，所述的培养的条件为37℃、5％CO2。 8.根据权利要求5所述的一种DDT单克隆抗体的制备方法，其特征在于：所述步骤c中采用间接竞争ELISA法对步骤b中所得的培养细胞进行筛选，所述亚克隆的次数大于或等于3，所述步骤d中的抗体纯化采用ProteinA进行抗体纯化，所述的保存为在-20℃下冻存。 9.一种DDT单克隆抗体的应用，其特征在于：包括以下步骤： 1)金标抗体和金标结合物垫的制备； 2)采用DDT单克隆抗体进行纤维素膜的制备； 3)采用1)中所得的金标结合物垫与2)中所得的纤维素膜组装胶体金试纸条。
所属类别：	发明专利