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原文传递一种用于胸椎黄韧带骨化诊断的生物标记物

专利名称：	一种用于胸椎黄韧带骨化诊断的生物标记物
摘要：	本发明公开了一种用于胸椎黄韧带骨化诊断的生物标记物，所述生物标记物为尿酸，所述生物标记物尿酸在胸椎黄韧带骨化患者血清中相比健康对照者血清中表达量降低。本发明还公开了一种用于胸椎黄韧带骨化诊断的生物标记物的筛选方法。本发明采用血清代谢组学技术以及数据统计分析技术得到用于胸椎黄韧带骨化诊断的生物标记物及其筛选方法，可操作性强，准确性高，通过取血就能实现诊断，快速便捷，花费低，利用本发明的生物标记物尿酸诊断胸椎黄韧带骨化具有较高的特异性，有利于胸椎黄韧带骨化的早发现、早治疗，具有良好的临床使用和推广价值。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	中国医学科学院北京协和医院
发明人：	赵宇;于凌佳;喻译锋;屈昊
专利状态：	有效
申请日期：	2017-12-21T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-28T00:00:00+0800
申请号：	CN201711391408.6
公开号：	CN109946467A
分类号：	G01N33/96(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	100730 北京市东城区王府井帅府园1号
主权项：	1.一种用于胸椎黄韧带骨化诊断的生物标记物，其特征在于，所述生物标记物为尿酸。 2.如权利要求1所述的生物标记物，其特征在于，所述生物标记物为血清代谢物。 3.如权利要求1所述的生物标记物，其特征在于，所述生物标记物尿酸在胸椎黄韧带骨化患者血清中相比健康对照者血清中表达量降低。 4.如权利要求1-3任意一项所述的生物标记物在制备诊断胸椎黄韧带骨化的试剂盒中的应用。 5.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述试剂盒包括检测尿酸浓度的试剂。 6.一种如权利要求1-3任意一项所述的用于胸椎黄韧带骨化诊断的生物标记物的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤： (1)样本收集：收集胸椎黄韧带骨化患者和健康对照者血清样本； (2)液相色谱质谱采集：通过液相色谱对样本进行预分离，质谱采集一级母离子与二级子离子信息； (3)模式识别分析代谢物谱：使用Progenesis QI软件处理原始数据，校正质量分数和保留时间，对样本进行分组，导入EZinfo软件进行主成分分析和正交偏最小二乘法-判别分析，正交偏最小二乘法-判别分析得到的OPLS-DA模型用交叉验证法进行检验； (4)筛选：根据上述正交偏最小二乘法-判别分析得到的OPLS-DA模型的变量重要性评分和P值进行差异代谢物筛选，筛选标准为：VIP>2，P值<0.05； (5)鉴定：通过人类代谢组数据库和美国国家标准与技术局化学数据库搜库鉴定差异代谢物。 7.如权利要求6所述的筛选方法，其特征在于，所述方法还包括采用层次聚类分析方法、代谢通路分析方法、ROC曲线分析方法中的一种或多种方法对筛选到的差异代谢物进一步筛选。 8.如权利要求6所述的筛选方法，其特征在于，所述液相色谱质谱采集时，每10个样本加入一个质量控制样品，用于实时监测分析样本从进样前处理到分析过程中的质量控制情况。 9.如权利要求6所述的筛选方法，其特征在于，所述样本进样前进行以下处理：100uL血清加入300uL在-20℃预冷的乙腈，涡旋振荡1min后，于-20℃静置过夜；4℃离心机中1,2000rpm,离心20min，取上清，1×水稀释。 10.如权利要求6所述的筛选方法，其特征在于，液相色谱所用色谱柱为Waters HSST3column色谱柱，柱温为45℃，样品温度为4℃，液相流速0.45ml/min，色谱流动相包含两种溶剂A和B：流动相A为0.1％甲酸水溶液，流动相B为0.1％甲酸的乙腈溶液，色谱梯度洗脱条件为：0-1min为1％B，1-1.5min为1％B-20％B逐渐增加，1.5-11min为20％B-99％B逐渐递增，11-11.5min为由99％B减为98％B，11.5-14min为1％B平衡色谱柱；质谱检测使用四极杆串联飞行时间质谱仪Q-TOF，并采用电喷雾离子源的负离子模式ESI-，毛细管电压为2.5kV，锥孔电压为24V，离子源温度为100℃，去溶剂气流速800L/h，锥孔气流速50L/h，图谱数据采集的质荷比范围为50～2000m/z，采集的扫描频率为0.2s/循环。
所属类别：	发明专利