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原文传递使用氨基酸分析仪测定氨甲环酸含量的方法

专利名称：	使用氨基酸分析仪测定氨甲环酸含量的方法
摘要：	公开了一种使用氨基酸分析仪测定氨甲环酸含量的方法，采用离子交换色谱分离、标准曲线法测定氨甲环酸含量的方法。其色谱条件为4μm预洗柱和8μm分析柱，离子交换树脂为Biochrom30+高效氨基酸自动分析仪专用树脂；检测波长570nm；泵流速35ml/h；梯度洗脱程序：0～1min缓冲液1，1～2min缓冲液2，2～20min缓冲液5，20～21.5min缓冲液6，21.5～23.5min缓冲液1；柱温44℃；反应温度135℃；进样体积20μl。氨甲环酸含量测定采用的氨基酸分析仪具有商品化和自动化程度高的特点，采用氨基酸分析仪测定氨甲环酸含量的方法具有操作简便，标准化强，灵敏度高，快速高效等优点。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	北京市药品检验所
发明人：	郭洁;刘成浩;张蓉;邬国庆
专利状态：	有效
申请日期：	2019-04-09T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-02T00:00:00+0800
申请号：	CN201910280604.9
公开号：	CN109959736A
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	102206 北京市昌平区北清路中关村生命科学园25号
主权项：	1.使用氨基酸分析仪测定制品中的氨甲环酸的方法，包括如下步骤： (1)提供分析仪器氨基酸分析仪，例如Biochrom30+高效氨基酸自动分析仪； (2)提供作为预洗柱和分析柱的色谱柱，例如均为离子交换树脂柱，例如预洗柱长度5-15cm且直径3-6mm，例如分析柱长度10-30cm且直径3-6mm，例如预洗柱长度10cm且直径4.6mm，例如分析柱长度20cm且直径4.6mm，例如色谱柱的离子交换树脂为Biochrom30+高效氨基酸自动分析仪专用树脂； (3)提供色谱洗脱用流动相，该流动相为pH2-7缓冲液(例如包含柠檬酸钠的缓冲液)； (4)色谱分析条件：氨基酸分析仪泵流速10-100ml/h，色谱柱柱温30-100℃，反应温度30-150℃，色谱分析时间0-60min，检测波长200-800nm，进样量2-50μl(例如，氨基酸分析仪泵流速20-50ml/h，色谱柱柱温30-50℃，反应温度100-150℃，色谱分析时间0-40min例如0-25min例如0-20min，检测波长500-600nm，进样量10-30μl；例如，氨基酸分析仪泵流速35ml/h，色谱柱柱温40℃，反应温度135℃，色谱分析时间0-40min例如0-25min例如0-20min，检测波长570nm，进样量20μl)； (5)供试品溶液的制备：取相当于含5mg-15mg例如10mg氨甲环酸的供试品，精密称定，置于10ml容量瓶中，加50％甲醇溶液溶解，得A液，再从A液中取1mL，置于60℃电热板上挥干后用10mL的Sodium Loading Buffer溶解，得B液，作为测定用的供试品溶液； (6)对照品溶液(亦可称为标液)的制备：精密称取氨甲环酸标准物质(即对照品)，用Sodium Loading Buffer溶解、定容后，再用Sodium Loading Buffer配制成不同浓度的标液； (7)任选的辅料溶液的制备：如果所述制品中存在辅料且已知其组成，则按处方比例称取与供试品溶液制备时所取供试品相当量的辅料，精密称定，用Sodium Loading Buffer溶解、稀释成与供试品溶液相当的浓度；如果辅料组成未知，则不配制辅料溶液； (8)在上述色谱分析条件下，采用氨基酸分析仪分析，分别将对照品溶液、供试品溶液及辅料溶液注入色谱仪，记录色谱图(具体是，例如，待氨基酸分析仪的柱温稳定后，测定标液和B液，先注入标液，两次注入标液的面积变化小于1％后，进行B液测定，在两次标液注入的中间注入B液)；读取对照品溶液和供试品溶液色谱图中氨甲环酸的保留时间和峰面积；使用对照品溶液浓度与峰面积计算其线性回归方程，在该线性回归方程的相关系数大于0.999％的情况下，利用样品保留时间对供试品进行定性，利用线性回归方程对供试品进行定量。 2.根据权利要求1的方法，其中所述制品选自：包含氨甲环酸的化妆品、日化用品、食品、保健食品、药品，或者制备它们的原料。 3.根据权利要求1的方法，其中预洗柱离子交换树脂柱的粒度为4μm。 4.根据权利要求1的方法，其中分析柱离子交换树脂柱的粒度为8μm。 5.根据权利要求1的方法，其中所述辅料色谱图中应未出现与对照品溶液色谱图主峰保留时间一致色谱峰。 6.根据权利要求1的方法，其中所述流动相是pH3～pH7的盐酸/柠檬酸钠缓冲液；或者，所述流动相是商品化的pH3～pH7的盐酸/柠檬酸钠缓冲液。 7.根据权利要求1的方法，所述流动相是商品化的pH3～pH7的盐酸/柠檬酸钠缓冲液，包括：缓冲液1：pH＝3.20的盐酸-柠檬酸钠缓冲液；缓冲液2：pH＝4.25的盐酸-柠檬酸钠缓冲液；缓冲液5：pH＝6.45的盐酸-柠檬酸钠缓冲液。 8.根据权利要求1的方法，其中所述流动相是商品化的pH3～pH7的盐酸/柠檬酸钠缓冲液，包括：缓冲液1：pH＝3.20的盐酸-柠檬酸钠缓冲液(例如，其为英国Biochrom Ltd.产、货号80-2037-68的Sodium Hydrolysate Buffer1)；缓冲液2：pH＝4.25的盐酸-柠檬酸钠缓冲液例如，其为英国Biochrom Ltd.产、货号80-2038-08的Sodium Hydro/Oxid Buffer2)；缓冲液5：pH＝6.45的盐酸-柠檬酸钠缓冲液(例如，其为英国Biochrom Ltd.产、货号80-2038-09的Sodium Hydrolysate Buffer5)。 9.根据权利要求1的方法，其特征在于：所述流动相中还包括称为缓冲液6的再生溶液；所述流动相中还包括称为缓冲液6的再生溶液，例如，其为英国Biochrom Ltd.产、货号80-2037-57的Sodium Regeneration Buffer6；所述氨基酸分析仪泵流速为25～50ml/h，例如35ml/h；所述色谱柱柱温30-50℃；所述反应温度120-150℃；所述色谱分析时间0-50min，例如0-40min，例如0-30min；所述检测波长550-600nm，例如570nm；其中进样量10-30μl，例如20μl；步骤(5)中，取相当于或者包含相当于10mg氨甲环酸的供试品；步骤(6)中，制成浓度为1-1000mg/L的对照品溶液(例如用于线性相关性试验)；和/或制成浓度为5-600mg/L的对照品溶液，例如制成浓度约为10-500mg/L对照品溶液，例如制成浓度约为10、50、100、250、500mg/L的对照品溶液。 10.根据权利要求1的方法，其中步骤(8)中，在用氨基酸分析仪对测试溶液进行分析时，进行梯度洗脱，梯度洗脱的程序为：时间/min 流动相组成 0 缓冲液1 1 缓冲液2 2 缓冲液5 20 缓冲液6 21.5 缓冲液1 。
所属类别：	发明专利