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原文传递一种PEDV IgY抗体胶体金检测试纸条及其制备方法和应用

专利名称：	一种PEDV IgY抗体胶体金检测试纸条及其制备方法和应用
摘要：	本发明公开了一种PEDV IgY抗体胶体金检测试纸条及其制备方法和应用，所述试纸条包括PVC底板、及依次搭接在PVC底板上的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，其中，所述结合垫为包被有兔抗鸡IgG‑胶体金复合物的胶体金垫，所述硝酸纤维素膜上设有由山羊抗兔IgG包被的质控线和PEDV重组抗原包被的检测线。与现有技术相比，本发明填补了PEDV IgY抗体目前无针对性检测试剂的空白，相比较常规ELISA抗体检测方法，本发明更加的方便快捷。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	安徽;34
申请人：	安徽荣达生物技术有限公司
发明人：	卞传忠;董世健;潘翔;刘家荣
专利状态：	有效
申请日期：	2019-04-26T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-05T00:00:00+0800
申请号：	CN201910342175.3
公开号：	CN109975544A
代理机构：	合肥中谷知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	洪玲
分类号：	G01N33/569(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	242299 安徽省宣城市广德县桃州镇高湖社区(荣达禽业股份有限公司内)
主权项：	1.一种PEDV IgY抗体胶体金检测试纸条，包括PVC底板、及依次搭接在PVC底板上的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，其特征在于，所述结合垫为包被有兔抗鸡IgG-胶体金复合物的胶体金垫，所述硝酸纤维素膜上设有由山羊抗兔IgG包被的质控线和PEDV重组抗原包被的检测线。 2.一种如权利要求1所述的PEDV IgY抗体胶体金检测试纸条的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： (1)制备纯化的PEDV重组抗原； (2)制备硝酸纤维素膜：将山羊抗兔IgG和纯化的PEDV重组抗原分别稀释后，包被在硝酸纤维素膜上的质控线和检测线上； (3)制备胶体金； (4)胶体金标记兔抗鸡IgG：取兔抗鸡IgG，将胶体金与兔抗鸡IgG混合，离心，用PBS溶液重悬沉淀，获得兔抗鸡IgG-胶体金复合物； (5)制备金标释放垫：将兔抗鸡IgG-胶体金复合物均匀喷在结合垫上，充分干燥，获得胶体金垫； (6)试纸条的组装：在干燥环境下，将样品垫、胶体金垫、包被好的硝酸纤维素膜和吸水垫粘贴在PVC板上，裁切，获得试纸条。 3.根据权利要求2所述的一种PEDV IgY抗体胶体金检测试纸条的制备方法，其特征在于，制备纯化的PEDV重组抗原的步骤包括：根据已知的PEDV N蛋白基因序列制备PEDV N蛋白的大肠杆菌重组菌，将重组菌发酵表达并离心获得菌体，将菌体破碎，离心取上清，将上清过亲合层析柱，即为纯化的PEDV重组抗原。 4.根据权利要求2所述的一种PEDV IgY抗体胶体金检测试纸条的制备方法，其特征在于，制备硝酸纤维素膜的步骤中，山羊抗兔IgG和纯化的PEDV重组抗原分别以100mM的PBS稀释至终浓度为1mg/ml，再以0.8μL/cm的喷量喷施在质控线和检测线上，充分干燥。 5.根据权利要求2所述的一种PEDV IgY抗体胶体金检测试纸条的制备方法，其特征在于，制备胶体金的方法为柠檬酸三钠还原法，步骤包括：取质量分数为0.01％-0.02％的HAuCl4水溶液100ml，加热煮沸，迅速加入质量分数为1％-5％的柠檬酸三钠水溶液1ml，继续煮沸，溶液由淡黄色变成灰色，继而转成黑色，随后逐渐稳定成酒红色，制成金颗粒。 6.根据权利要求2所述的一种PEDV IgY抗体胶体金检测试纸条的制备方法，其特征在于，胶体金标记兔抗鸡IgG的步骤包括：取高纯度兔抗鸡IgG溶于0.1-0.2ml的PBS中，将胶体金溶液的pH值调至6.9；按以下组合将兔抗鸡IgG与胶体金混合：每60mg兔抗鸡IgG，加入10ml胶体金溶液；混合3min后，加入质量分数为0.05％的PEG6000室温作用结合15min后，先2000r/min低速离心10min，再12000r/min高速离心30min；用100mM/L的pH7.6的含有0.2％质量分数Proclin300的PBS溶液重悬沉淀，即为兔抗鸡IgG-胶体金复合物。 7.根据权利要求2所述的一种PEDV IgY抗体胶体金检测试纸条的制备方法，其特征在于，兔抗鸡IgG-胶体金复合物在结合垫上的喷量为10μL/cm。 8.根据权利要求2所述的一种PEDV IgY抗体胶体金检测试纸条的制备方法，其特征在于，试纸条的组装的方法为：在干燥环境下准备好样品垫、胶体金垫、包被的硝酸纤维素膜、吸水垫和PVC底板，在PVC底板中央贴上包被好的硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜上缘粘贴吸水垫，硝酸纤维素膜下缘粘贴胶体金垫，胶体金垫下缘粘贴样品垫，完成后将试纸板切成条状。 9.一种如权利要求1所述的PEDV IgY抗体胶体金检测试纸条在检测PEDV IgY抗体中的应用，其特征在于，将检测试纸平放于桌面上，取待测血清样品50-100μL，加入样品垫，室温静置15min后，根据以下情况判定结果：试纸有效：在质控线出现紫红色线，即说明本试纸有效；阴性：只在质控线出现紫红色线，在检测线不出现色线；阳性：在质控线和检测线均出现一条紫红色线；且色线深浅与抗体滴度成正比，即抗体滴度越高，色线越深。
所属类别：	发明专利