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原文传递基于电致化学发光能量转移的多巴胺检测传感器和检测方法

专利名称：	基于电致化学发光能量转移的多巴胺检测传感器和检测方法
摘要：	本发明公开了一种基于电致化学发光能量转移的多巴胺检测传感器和检测方法，该传感器通过先在电极表面修饰CNT‑AuNP和碱水解g‑C3N4(H‑g‑C3N4)，再修饰金纳米簇得到。其具体包括以下步骤：1)制备H‑g‑C3N4；2)制备CNT‑AuNP；3)制备金纳米簇；4)电极修饰：在电极表面依次修饰CNT‑AuNP和H‑g‑C3N4后，再将金纳米簇修饰在电极表面，得到用于检测多巴胺的传感器。本发明的传感器，设计了“on_off_on”的传感模式，降低了背景信号，消除了伪正信号；本发明的传感器具有灵敏度高、选择性强、抗干扰性强等优点。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	中国科学院苏州生物医学工程技术研究所
发明人：	邵昊华;董文飞;梅茜;李力;葛明峰;常智敏
专利状态：	有效
申请日期：	2019-03-13T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-05T00:00:00+0800
申请号：	CN201910189281.2
公开号：	CN109975272A
代理机构：	北京远大卓悦知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	韩飞
分类号：	G01N21/66(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	215163 江苏省苏州市高新区科技城科灵路88号
主权项：	1.一种基于电致化学发光能量转移的多巴胺检测传感器，其特征在于，该传感器通过先在电极表面修饰CNT-AuNP和H-g-C3N4，再修饰金纳米簇得到，其中，所述H-g-C3N4为碱水解g-C3N4。 2.根据权利要求1所述的基于电致化学发光能量转移的多巴胺检测传感器，其特征在于，所述传感器的制备方法具体包括以下步骤： 1)制备H-g-C3N4； 2)制备CNT-AuNP； 3)制备金纳米簇； 4)电极修饰：在电极表面依次修饰CNT-AuNP和H-g-C3N4后，再将金纳米簇修饰在电极表面，得到用于检测多巴胺的传感器。 3.根据权利要求2所述的基于电致化学发光能量转移的多巴胺检测传感器，其特征在于，所述步骤4)包括：先将CNT-AuNP滴加在预处理后的电极表面，干燥后滴加H-g-C3N4，干燥后再滴加EDC/NHS，然后滴加氨基修饰的DNA-1，使DNA-1通过酰胺键与电极结合，最后加入连接有DNA-2的金纳米簇，其中，DNA-1与DNA-2可互补配对。 4.根据权利要求3所述的基于电致化学发光能量转移的多巴胺检测传感器，其特征在于，所述步骤1)具体包括：将30mg g-C3N4和2.5gNaOH溶于25mL水中，超声1.5h使其分散充分，然后在65℃下搅拌过夜，之后补加1.0gNaOH，再超声2h；将得到的溶液转移到透析袋中，溶液透析持续48小时，每12h换一次水，以除去NaOH，完成后取内液转移至离心管，6500rpm下离心15min，除去颗粒和大片层，保留上清液，得到H-g-C3N4水溶液。 5.根据权利要求4所述的基于电致化学发光能量转移的多巴胺检测传感器，其特征在于，所述步骤2)具体包括： 2-1)以氯金酸溶液和柠檬酸钠为原料制备胶体AuNP； 2-2)PDDA功能化CNT的制备：将CNT分散在超纯水中，浓度为1.0mgmL-1，使用体积比为3:1的硫酸、HNO3混合液对其进行超声波处理2h，以获得羧基官能化CNT；然后，将1.0mL羧基官能化CNT溶液分散到5mL的1wt％PDDA水溶液中，并进行超声处理1h，以获得均匀的CNT；之后通过16000rpm离心15min，去除残留的PDDA，用超纯水洗涤沉淀3次，得到PDDA功能化CNT； 2-3)将1.0mL PDDA功能化CNT分散到5.0mL制备好的胶体AuNP中并超声处理10分钟，16000rpm离心10min，获得CNT-AuNP复合材料，再用水冲洗，制成1.0mg/mL的水溶液。 6.根据权利要求5所述的基于电致化学发光能量转移的多巴胺检测传感器，其特征在于，所述步骤3)具体包括：将0.15mL 100mM谷胱甘肽溶液加入洁净的样品瓶，用超纯水稀释至5mL，剧烈搅拌下，加入0.5mL 20mM的氯金酸溶液，在70℃恒温水浴锅中反应24h，反应完成后，自然冷却至室温，透析48h除去未反应杂质，冻干保存。 7.根据权利要求6所述的基于电致化学发光能量转移的多巴胺检测传感器，其特征在于，所述步骤4)具体包括： 4-1)将饱和甘汞电极先后用0.3μM和0.05μM Al2O3粉末抛光，之后先后在酒精和超纯水中超声，最后用N2吹干； 4-2)滴5μL步骤2)制得的CNT-AuNP于电极上，自然干燥；之后滴加5μL步骤1)制得的H-g-C3N4，自然干燥； 4-3)滴加20μL 1mg/mL EDC/NHS于电极上，活化材料表面羧基，而后将过量的氨基修饰的DNA-1滴于活化的底物电极表面，在4℃下孵育过夜，使DNA-1通过酰胺键与底物电极结合； 4-4)用DEPC水冲洗电极后，加入连接有DNA-2的金纳米簇，孵育2h；最后将20μL含2mMMCH和1％BSA的溶液滴在电极上，在室温下孵育1小时，以封闭非特异性结合位点，用DEPC水冲洗后待用。 8.根据权利要求1所述的基于电致化学发光能量转移的多巴胺检测传感器，其特征在于，所述DNA-1结构为：5’-NH2-ATACCAATATCCGCTTTAT-3’；所述DNA-1结构为：3’-TATGGTTATAGGCGAAATA-SH-5’。 9.一种基于电致化学发光能量转移的多巴胺检测方法，其特征在于，采用如权利要求1-8中任意一项制得的传感器进行多巴胺检测。
所属类别：	发明专利