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原文传递一种核酸抗体修饰的免疫金探针及其制备方法和应用

专利名称：	一种核酸抗体修饰的免疫金探针及其制备方法和应用
摘要：	本发明公开了一种核酸抗体修饰的免疫金探针及其制备方法和应用。该方法综合使用了点击化学技术和寡核苷酸标记纳米金颗粒技术等一系列工艺，对抗体与DNA的偶联条件，标记寡核苷酸的纳米金颗粒的制备条件进行优化，最大限度地提高标记在纳米金颗粒上的寡核苷酸的稳定性和密度以及结合在纳米金颗粒上的抗体数量，以该方法制备的新型金纳米探针可以用于具有细胞靶向性的特异性检测，病毒的可视化检测，制备超灵敏的检测试纸条，相较于现有技术，以本发明制备的产品具有特异性高，稳定性好，应用领域广泛等特点，加之工艺简便，成本较低，因此有很好的推广前景。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	扬州大学
发明人：	周昕;袁嘉晟;张天宇
专利状态：	有效
申请日期：	2019-04-04T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-05T00:00:00+0800
申请号：	CN201910268840.9
公开号：	CN109975540A
代理机构：	南京苏高专利商标事务所(普通合伙)
代理人：	王艳
分类号：	G01N33/543(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	225009 江苏省扬州市大学南路88号
主权项：	1.一种核酸抗体修饰的免疫金探针，其特征在于，所述的免疫金探针包括纳米金颗粒核心和表面修饰的核酸抗体结合物，所述核酸抗体结合物中的核酸为炔基修饰的长链DNA，所述长链DNA的核苷酸序列为：TT TAT ATA GAG GAG TTTTT TTTTT。 2.根据权利要求1所述的核酸抗体修饰的免疫金探针，其特征在于，所述纳米金颗粒核心为结合了巯基修饰的反义长链DNA和短链DNA的纳米金颗粒，所述反义长链DNA的核苷酸序列为CTC CTCTAT ATA AATTTTTTTTTT TT，所述短链DNA的核苷酸序列为TTTTT TTTTT。 3.根据权利要求1所述的核酸抗体修饰的免疫金探针，其特征在于，所述纳米金颗粒的粒径为15~30nm。 4.权利要求1~3任一项所述的核酸抗体修饰的免疫金探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： 1）将抗体和叠氮化合物按一定比例混合，在室温环境下，摇晃结合一定时间得到样品； 2）将步骤1）结合后的样品吸出，加入透析袋放置于PBS中透析过夜得到抗体叠氮结合物； 3）将透析过夜的抗体叠氮结合物取出，加入炔基修饰的长链DNA和催化剂，室温下摇晃结合得到核酸抗体结合物； 4）将结合好的核酸抗体结合物再次加入透析袋，放置于PBS中，透析过夜，中间换一次透析液，获得背景较为干净的核酸抗体结合物； 5）将纳米金颗粒与巯基修饰的反义长链DNA和短链DNA按一定浓度比例混合，在室温下结合； 6）在巯基修饰的反义长链DNA和短链DNA与纳米金颗粒结合一段时间后，每隔一段时间滴加一定量一定浓度的NaCl溶液获得纳米金颗粒核心； 7）将步骤4）得到的核酸抗体结合物与纳米金颗粒核心在金属浴中结合； 8）将步骤7）结合后的样品离心，重悬，获得浓缩后的核酸抗体修饰的免疫金探针。 5.根据权利要求4所述的核酸抗体修饰的免疫金探针的制备方法，其特征在于，所述步骤1）的抗体和叠氮化合物摩尔比为1:30，结合时间为4~6小时。 6.根据权利要求4所述的核酸抗体修饰的免疫金探针的制备方法，其特征在于，所述步骤3）中的催化剂为硫酸铜，异抗坏血酸钠，THPTA和盐酸氨基胍混合溶液。 7.根据权利要求6所述的核酸抗体修饰的免疫金探针的制备方法，其特征在于，所述硫酸铜浓度为0.5mM，异抗坏血酸钠浓度为0.05mM，THPTA浓度为0.002mM、盐酸氨基胍浓度为0.05mM。 8.根据权利要求4所述的核酸抗体修饰的免疫金探针的制备方法，其特征在于，所述步骤5）的纳米金颗粒与巯基修饰的反义长链DNA和短链DNA摩尔比为1:400:800。 9.根据权利要求4所述的核酸抗体修饰的免疫金探针的制备方法，其特征在于，所述步骤6）NaCl溶液终浓度为5.0M。 10.权利要求1~3任一项所述的核酸抗体修饰的免疫金探针在制备检测试纸条中的应用。
所属类别：	发明专利