详情

原文传递一种定量定向标记抗体的免疫探针及其制备方法

专利名称：	一种定量定向标记抗体的免疫探针及其制备方法
摘要：	本发明公开一种定量定向标记抗体的免疫探针及其制备方法，所述定量定向标记抗体的免疫探针包括DNA四面体、胶体金粒子、连接蛋白以及单克隆抗体，所述胶体金粒子与所述DNA四面体的三个角点相连接；所述连接蛋白的一端与所述DNA四面体的第四个角点相连接；所述单克隆抗体与所述连接蛋白的另一端相连接；其中，所述连接蛋白特异性识别单克隆抗体的可结晶片段，以实现单克隆抗体的定向标记。本发明通过采用共价键结合将DNA四面体的三个点通过共价键偶联在固相载体上，另外一个点偶联连接蛋白，通过DNA四面体可以控制连接蛋白的个数，进一步利用连接蛋白实现抗体定量定向标记。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	湖北;42
申请人：	武汉轻工大学
发明人：	许琳;曲文莉;李杨阳;王桥;段烁;杨庆;宫智勇
专利状态：	有效
申请日期：	2023-05-23T00:00:00+0800
发布日期：	2023-11-10T00:00:00+0800
申请号：	CN202310588443.6
公开号：	CN117031031A
代理机构：	深圳市世纪恒程知识产权代理事务所
代理人：	巩莉
分类号：	G01N33/68;G01N33/577;G01N33/58;G01N33/543;G01N33/531;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/68;G01N33/577;G01N33/58;G01N33/543;G01N33/531
申请人地址：	430000 湖北省武汉市汉口常青花园学府南路68号
主权项：	1.一种定量定向标记抗体的免疫探针，其特征在于，包括： DNA四面体；胶体金粒子，所述胶体金粒子与所述DNA四面体的三个角点相连接；连接蛋白，所述连接蛋白的一端与所述DNA四面体的第四个角点相连接；以及，单克隆抗体，所述单克隆抗体与所述连接蛋白的另一端相连接；其中，所述连接蛋白特异性识别单克隆抗体的可结晶片段，以实现单克隆抗体的定向标记。 2.如权利要求1所述的定量定向标记抗体的免疫探针，其特征在于，所述连接蛋白为重组蛋白，所述重组蛋白包括重组蛋白A或重组蛋白G。 3.如权利要求1所述的定量定向标记抗体的免疫探针，其特征在于，所述DNA四面体为纳米结构的DNA四面体。 4.一种如权利要求1所述的定量定向标记抗体的免疫探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： S10、合成DNA四面体，在胶体金溶液中加入DNA四面体，搅拌后，再加入牛血清白蛋白(BSA)溶液，离心处理后获得第一沉淀； S20、将所述第一沉淀溶解在磷酸盐缓冲液中，获得胶体金-DNA四面体复合物； S30、向所述胶体金-DNA四面体复合物中加入连接蛋白，离心处理后获得第二沉淀； S40、将所述第二沉淀溶解在硼酸盐缓冲液中，获得胶体金-DNA四面体-连接蛋白复合物； S50、向所述胶体金-DNA四面体-连接蛋白复合物中加入单克隆抗体，离心处理后获得第三沉淀； S60、将所述第三沉淀溶解在磷酸盐缓冲液中，获得定量定向标记抗体的免疫探针，即胶体金-DNA四面体-连接蛋白-单克隆抗体复合物。 5.如权利要求4所述的定量定向标记抗体的免疫探针的制备方法，其特征在于，在步骤S10中，所述胶体金溶液中的胶体金粒子和DNA四面体的摩尔比为1：(10～50)。 6.如权利要求4所述的定量定向标记抗体的免疫探针的制备方法，其特征在于，步骤S10包括：合成DNA四面体，在胶体金溶液中加入DNA四面体，搅拌后，反应12～18h，再加入质量浓度(m/v)为0.45～0.55％的BSA溶液，反应40～120min，在9000～15000r/min的转速下离心处理5～15min，离心处理3～8次后获得第一沉淀。 7.如权利要求4所述的定量定向标记抗体的免疫探针的制备方法，其特征在于，步骤S30包括：向所述胶体金-DNA四面体复合物中加入连接蛋白，反应40～120min，再在9000～14000r/min的转速下离心处理5～15min，离心处理2～7次，获得第二沉淀。 8.如权利要求4所述的定量定向标记抗体的免疫探针的制备方法，其特征在于，在步骤S30中，所述胶体金-DNA四面体复合物中的胶体金粒子和连接蛋白的摩尔比为1：(20～50)。 9.如权利要求4所述的定量定向标记抗体的免疫探针的制备方法，其特征在于，步骤S50包括：向所述胶体金-DNA四面体-连接蛋白复合物中加入单克隆抗体，在室温的条件下反应40～120min，再在8000～13000r/min的转速下离心处理5～15min，离心处理2～7次，获得第三沉淀。 10.如权利要求4所述的定量定向标记抗体的免疫探针的制备方法，其特征在于，在步骤S50中，所述胶体金-DNA四面体-连接蛋白复合物中的胶体金粒子和单克隆抗体的摩尔比为1：(5～90)。
所属类别：	发明专利