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原文传递一种测定肝脏组织中NNN代谢产物含量及预测NNN暴露风险的方法

专利名称：	一种测定肝脏组织中NNN代谢产物含量及预测NNN暴露风险的方法
摘要：	本发明涉及一种测定肝脏组织中NNN代谢产物含量及预测NNN暴露风险的方法，属于生物化学分析技术领域。本发明的方法通过测定血液中的NNN直接代谢产物及肝脏组织内NNN的间接代谢产物，在获得NNN及其代谢物的入体循环相对量的基础上，分别根据血液中α‑羟基化代谢途径产物总量与进入体循环的NNN相对量的比值和主要代谢器官内代表性DNA加合物的产量来评价NNN暴露后在不同个体内的α‑羟基化反应程度。本发明的方法评价结果准确、可靠，具有可比性，开创了一种新的可用于NNN早期暴露风险评估的方法。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	河南;41
申请人：	中国烟草总公司郑州烟草研究院
发明人：	毛健;孙世豪;洪广峰;宗永立;张建勋;张启东;柴国璧;刘俊辉;宋瑜冰;史清照;范武;席辉
专利状态：	有效
申请日期：	2019-04-12T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-09T00:00:00+0800
申请号：	CN201910296034.2
公开号：	CN109991331A
代理机构：	郑州睿信知识产权代理有限公司
代理人：	张兵兵
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	450001 河南省郑州市高新区枫杨街2号
主权项：	1.一种预测NNN暴露风险的方法，其特征在于：包括如下步骤： (1)将肝脏组织进行水解、孵育，然后固液分离； (2)将步骤(1)固液分离后的液体过固相萃取柱，洗脱，洗脱液除去溶剂得到固体样品； (3)将步骤(2)得到的固体样品用乙腈溶解得到测试样品，将测试样品采用液相色谱-质谱联用法测试分析O2-POB-dT含量； (4)根据肝脏组织中O2-POB-dT含量确定NNN在动物体内的代谢程度，并预测NNN对动物体的暴露风险。 2.根据权利要求1所述的预测NNN暴露风险的方法，其特征在于：步骤(1)所述的水解是在酸溶液中水解。 3.根据权利要求1所述的预测NNN暴露风险的方法，其特征在于：步骤(1)所述的孵育是在80℃水浴中孵育30min。 4.根据权利要求1所述的预测NNN暴露风险的方法，其特征在于：步骤(1)所述的固液分离是使用0.22μm的有机相针式滤膜过滤。 5.根据权利要求1所述的预测NNN暴露风险的方法，其特征在于：还包括如下步骤：测定动物血液样品中NNN的α-羟基化途径代谢产物的含量，计算α-羟基化系数，并结合动物肝脏中O2-POB-dT含量，确定NNN在动物体内的代谢程度，并预测NNN对动物体的暴露风险。 6.根据权利要求1所述的预测NNN暴露风险的方法，其特征在于：所述过固相萃取柱的上样速度为1～2mL/min。 7.根据权利要求1所述的预测NNN暴露风险的方法，其特征在于：步骤(2)所述的洗脱溶剂为甲醇或甲醇水溶液。 8.根据权利要求1所述的预测NNN暴露风险的方法，其特征在于：所述液相色谱的条件为：Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18色谱柱；柱温50℃；流动相A为体积分数为0.1％甲酸水溶液，流动相B为乙腈，二者体积比为32：68；等度洗脱，流速0.25mL/min；进样量10μL。 9.根据权利要求1所述的预测NNN暴露风险的方法，其特征在于：所述质谱的条件为：电加热喷雾离子源，正离子模式，喷雾电压3.5kV；鞘气流速为9.9L/min，辅助气流速为3.3L/min，毛细管加热温度为320℃，加热器温度为300℃；扫描模式采用Full MS/ddMS2，一级全扫描分辨率为70000，范围为100～400m/z，自动增益控制为1e6，离子最大注入时间为50ms；二级扫描为数据依赖扫描，分辨率为17500，AGC为1e5，最大注入时间为50ms，归一化的碰撞能量为35％。 10.一种测定肝脏组织中NNN代谢产物含量的方法，其特征在于：包括如下步骤： (1)将肝脏组织进行水解、孵育，然后固液分离； (2)将步骤(1)固液分离后的液体过固相萃取柱，洗脱，洗脱液除去溶剂得到固体样品； (3)将步骤(2)得到的固体样品用乙腈溶解得到测试样品，将测试样品采用液相色谱-质谱联用法测试分析O2-POB-dT含量。
所属类别：	发明专利