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原文传递重楼块根的石蜡切片方法

专利名称：	重楼块根的石蜡切片方法
摘要：	本发明公开了一种重楼块根的石蜡切片方法，其中，包括：将重楼块根样品依次经过固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、展片、脱蜡、染色和封片后得到所述重楼块根的石蜡切片；其中，所述固定的方法为：将重楼块根样品置于固定液、负压以及红外照射的环境中24小时及以上。本发明使用红外照射结合负压的方式对重楼块根进行固定处理，红外照射能够使得重楼块根组织变得活跃，结合负压的作用，组织内部的气体及时跑出，固定液能够更加快速的进入到重楼块根组织内部完成细胞结构的固定，提高了固定的效果和效率。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广西;45
申请人：	广西壮族自治区药用植物园
发明人：	周雅琴;谢月英;农东新;王春丽;余丽莹
专利状态：	有效
申请日期：	2019-04-25T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-09T00:00:00+0800
申请号：	CN201910338345.0
公开号：	CN109991063A
代理机构：	北京远大卓悦知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	靳浩
分类号：	G01N1/28(2006.01);G;G01;G01N;G01N1
申请人地址：	530023 广西壮族自治区南宁市兴宁区长岗路189号
主权项：	1.一种重楼块根的石蜡切片方法，其中，包括：将重楼块根样品依次经过固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、展片、脱蜡、染色和封片后得到所述重楼块根的石蜡切片；其中，所述固定的方法为：将重楼块根样品置于固定液、负压以及红外照射的环境中24小时及以上。 2.如权利要求1所述的重楼块根的石蜡切片方法，其中，所述固定液为FAA固定液，所述FAA固定液中混合有丙三醇；所述负压为-0.01～-0.09Mpa：所述重楼块根样品的长宽高均为5厘米；所述红外照射为波长600～1000nm的红外光照射。 3.如权利要求2所述的重楼块根的石蜡切片方法，其中，所述负压呈以下周期变化： -0.01Mpa下保持5分钟；-0.03Mpa下保持15分钟；-0.05Mpa下保持20分钟；-0.07Mpa下保持15分钟；-0.09Mpa下保持5分钟，以此形成一个周期并循环直至固定结束。 4.如权利要求1所述的重楼块根的石蜡切片方法，其中，所述脱水的步骤为：将重楼块根样品在冻存管中按照50％、70％、85％、95％乙醇浓度逐级各脱水一次，每次1.5～2h，再放入95％乙醇脱水1h，最后100％乙醇脱水两次，每次各30～45min。 5.如权利要求4所述的重楼块根的石蜡切片方法，其中，所述透明的步骤为：先采用1/2无水乙醇+1/2环保透明剂对重楼块根样品透明处理两次；再用环保透明剂对重楼块根样品透明处理两次；每次透明处理的时间为1～2小时。 6.如权利要求5所述的重楼块根的石蜡切片方法，其中，所述浸蜡的步骤为：将重楼块根样品放入安瓿瓶中，加入环保透明剂浸过重楼块根样品，按环保透明剂:碎石蜡的质量比＝1:0.3加入碎石蜡，待碎石蜡完全溶解后，再按同样的质量比加入2～3次碎石蜡，然后将安瓿瓶放入37℃烘箱中6～12小时；然后将烘箱温度升高至42℃，分3-4次加入碎石蜡，直到饱和；再将烘箱温度升高到60℃，再按同样的质量比加入3-4次碎石蜡后保持6～12小时；然后将重楼块根样品转移到纯的液态石蜡中，保持4小时后，可进行后续的包埋；其中，所述碎石蜡的制备方法为：将新蜡和使用过三次以上的老蜡按照1:1的质量比混合，然后置于85℃的烘箱中充分溶解，采用300目的尼龙网过滤后冷却成型，再割碎得到所述碎石蜡。 7.如权利要求6所述的重楼块根的石蜡切片方法，其中，所述包埋的步骤为：将所述碎石蜡在85℃的烘箱中充分溶解得到液态蜡，将重楼块根样品放入到所述液态蜡中，待液态蜡表面冷凝后，立即放在预先准备的冰冷水中，促进蜡快速凝固成型。 8.如权利要求7所述的重楼块根的石蜡切片方法，其中，使用切片机切片得到厚度为10～14微米的薄片；再对所述薄片进行脱蜡，所述脱蜡的步骤为：环保透明剂10min；1/2环保透明剂和1/2纯无水乙醇3min；100％、95％、85％、70％、50％酒精和蒸馏水各5～10分钟。 9.如权利要求8所述的重楼块根的石蜡切片方法，其中，所述染色的步骤为：将脱蜡后的薄片放于0.5％-1％番红水溶液中染色15～20h，蒸馏水洗去多余染液，分别经过30％、50％、70％、80％、95％酒精脱水，每级5分钟，再用含0.1％固绿的95％酒精复染10～40秒。 10.如权利要求3所述的重楼块根的石蜡切片方法，其中，使用专用固定装置进行所述固定步骤，所述专用固定装置包括：外体，其内部具有容纳空间，所述外体的上端封闭并在中心位置预留有插入口；内胆，其从所述插入口竖直到所述外体内，所述内胆与外体之间形成隔离空间，所述内胆内具有用于容纳固定液的空间，所述内胆上端开口；盖体，其包括盖板和竖部，所述竖部垂直连接至所述盖板，所述盖体盖合至所述外体上端时，所述竖部伸入到所述内胆内，所述盖板将所述内胆的上端开口封闭，其中所述竖部的下端设置有用于放置重楼块根样品的篮子，所述篮子的侧壁设置有网孔使得篮子内外连通；抽气泵，其通过气管连通至所述内胆的上部侧壁，所述气管在所述隔离空间内呈U型设置，所述气管的U型底部形成液体沉积部，所述液体沉积部设置有排液管伸延至外体外部，所述排液管上设置有阀体；红外灯，其设置在所述隔离空间内并朝向所述内胆；控制模块，其包括用于测量内胆内部气压的气压传感器、用于感应内胆内部温度的温度传感器、控制器；所述控制器与气压传感器、温度传感器、抽气泵以及红外灯连接，所述控制器根据气压传感器的气压控制所述抽气泵，根据所述温度传感器的温度信号控制所述红外灯。
所属类别：	发明专利