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原文传递一种枣花石蜡切片的制备方法

专利名称：	一种枣花石蜡切片的制备方法
摘要：	本发明提供了一种枣花石蜡切片的制备方法，属于石蜡切片技术领域。所述制备方法包括如下步骤：1)将枣花花蕾固定；所述枣花花蕾带有一段长度为0.3～0.5cm的茎段；2)脱水；3)第一透明处理；4)第二透明处理；5)浸蜡；6)包埋；7)修蜡；8)切片；9)展片；10)脱蜡；11)复水；12)二次复水；13)染色；14)盖片、封片。本发明提供的枣花石蜡切片制备方法，能够得到胚囊完整的纵截面，进而方便观察胚囊内部细胞和组织结构的发育变化以及枣花细胞形态，同时通过观察枣花石蜡切片能够得到胚囊发育结构的变化及生殖过程中的基本规律。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	北京林业大学
发明人：	李颖月;黄飞逸;崔艳红;庞晓明;李翔
专利状态：	有效
发布日期：	2019-01-01T00:00:00+0800
申请号：	CN201810137942.2
公开号：	CN108333013A
代理机构：	北京高沃律师事务所 11569
代理人：	刘奇
分类号：	G01N1/30(2006.01)I;G;G01;G01N;G01N1;G01N1/30
申请人地址：	100089 北京市海淀区清华东路35号
主权项：	1.一种枣花石蜡切片的制备方法，包括如下步骤：1)将枣花花蕾置于固定液中，固定24～36h，得到固定枣花；所述枣花花蕾带有长度为0.3～0.5cm的茎段；所述固定液是将体积浓度为38％的甲醛水溶液、冰醋酸和体积浓度为50％的乙醇水溶液按体积比为0.95～1.05:0.95～1.05:17.5～18.5配制得到；2)将所述步骤1)中的固定枣花脱水，得到脱水枣花；3)将所述步骤2)中的脱水枣花与透明剂混合浸泡进行第一透明处理，得到第一透明枣花；所述第一透明剂为无水乙醇和二甲苯按照体积比为0.95～1.05：0.95～1.05混合形成的混合液；4)将所述步骤3)中第一透明枣花与二甲苯混合浸泡进行第二透明处理，得到第二透明枣花和二甲苯体系；5)向所述步骤4)的第二透明枣花依次加入二甲苯和温度为54～57℃液体石蜡，形成的含有第二透明枣花的二甲苯石蜡混合液在39～41℃下烘烤35～37h，再以每1.4～1.6h升温3℃的速率升温到57～59℃保温2.8～3.2h，形成预浸蜡枣花；所述保温后用57～59℃的液体石蜡替换二甲苯石蜡混合液，浸泡预浸蜡枣花，得到浸蜡枣花；6)将所述步骤5)中的浸蜡枣花和57～59℃的液体石蜡倒入包埋盒中进行包埋，2～3s后调整浸蜡枣花的位置，使浸蜡枣花与包埋盒底面平行，冷却，得到包埋枣花蜡块；7)将所述步骤6)中的包埋枣花蜡块进行修蜡，得到修整蜡块；8)将所述步骤7)中的修整蜡块进行切片，得到枣花切片蜡带；所述枣花切片蜡带的厚度为7.5～8.5μm；9)将所述步骤8)得到的枣花切片蜡带转移至23～28℃的水中，将枣花切片蜡带在水中舒展，将舒展后的枣花切片蜡带转移至载玻片上，将负载在载玻片上的枣花切片蜡带展片，得到负载在载玻片上的枣花切片；10)将所述步骤9)得到的负载在载玻片上的枣花切片用二甲苯浸泡脱蜡13～17min，更换二甲苯再次浸泡脱蜡10～15min，得到脱蜡的枣花切片；11)将所述步骤10)得到的脱蜡的枣花切片用复水剂浸泡复水9～11min，得到预复水枣花切片；所述复水剂为二甲苯和无水乙醇按体积比为0.95～1.05：0.95～1.05混合得到的混合液；12)将所述步骤11)得到的预复水枣花切片依次采用无水乙醇、体积浓度为95％、85％、75％、65％、50％和30％的乙醇水溶液浸泡复水，再转入蒸馏水中浸泡170～190s，得到复水枣花切片；所述无水乙醇、体积浓度为95％、85％、75％、65％、50％和30％的乙醇水溶液浸泡的时间独立为170～190s；13)将所述步骤12)得到的复水枣花切片用质量浓度为4％的铁矾溶液浸泡9.5～10.5min后第一水洗，再用苏木精染液浸泡染色23～27min后第二水洗，再用饱和苦味酸溶液浸泡15～30min后第三水洗，得到染色枣花切片；14)将所述步骤13)得到的染色枣花切片用二甲苯浸湿，向浸湿的枣花切片滴入中性树胶，盖片，在37～39℃下烘烤28～35min，得到枣花石蜡切片。
所属类别：	发明专利