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原文传递一种马尾松树脂道石蜡切片的制备方法

专利名称：	一种马尾松树脂道石蜡切片的制备方法
摘要：	本发明公开了一种马尾松树脂道石蜡切片的制备方法，所述方法步骤包括：一、取材及固定；二、软化；三、脱水、透明及浸蜡；四、渗蜡与包埋；五、切片、粘片及展片；六、脱蜡、番红染色及复水；七、固绿染色及封片，所述步骤二软化包括：将步骤一固定后的马尾松针叶与茎段依次放入装有软化剂HF的离心管中，茎段软化为时间为200‑280 h，针叶软化时间为90‑140 h。采用本发明的技术方案，比传统石蜡切片更高效，制作的切片组织结构清晰完整、细胞界限清楚，易于观察，取得了很好的使用效果。
专利类型：	发明专利
申请人：	贵州大学
发明人：	文晓鹏;骆晶;李正春;梅利那
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T16:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T03:00:00+0805
申请号：	CN201911292935.0
公开号：	CN110954384A
代理机构：	贵阳中新专利商标事务所
代理人：	吴无惧
分类号：	G01N1/28;G01N1/30;G;G01;G01N;G01N1;G01N1/28;G01N1/30
申请人地址：	550025 贵州省贵阳市花溪区贵州大学花溪北校区科技处
主权项：	1.一种马尾松树脂道石蜡切片的制备方法，其特征在于：所述方法步骤包括：一、取材及固定；二、软化；三、脱水、透明及浸蜡；四、渗蜡与包埋；五、切片、粘片及展片；六、脱蜡、番红染色及复水；七、固绿染色及封片，所述步骤二软化包括：将步骤一固定后的马尾松针叶与茎段依次放入装有软化剂HF的离心管中，茎段软化时间为200-280 h，针叶软化时间为90-140 h。 2.根据权利要求1所述的马尾松树脂道石蜡切片的制备方法，其特征在于：所述步骤一为：选取长势一致，生长健壮的马尾松无性系枝条，将每条枝条截取为2 cm茎段，并将采集的针叶束剪去顶部 1/3 和基部 1/3，留取针叶中部 1/3，用蒸馏水洗净后放入配好的 FAA固定液中，进行抽真空处理，使固定液完全浸入样品中，固定48 h以上，并在4℃下保存。 3.根据权利要求1所述的马尾松树脂道石蜡切片的制备方法，其特征在于：所述步骤三为：将步骤二中软化后的马尾松针叶与茎段，先用70％乙醇冲洗2-3次后，放入70％乙醇溶液中脱水3次，每次处理2 h，样品可在第三次脱水的70％乙醇溶液中长久放置保存；次日，将取出样品依次放入85％乙醇、95％乙醇继续进行每梯度各2 h脱水，再放入100％乙醇溶液进行2次各50 min脱水；脱水结束后，将样品放入体积比为1:1，且已加入0.5g番红的100％乙醇和二甲苯混合溶液中浸泡2 h；再将样品放入纯二甲苯浸泡2 h，期间每小时换一次纯二甲苯；最后将浸泡在纯二甲苯中的样品取出，放入体积比为1:1的纯二甲苯溶液和石蜡屑中，并再放置到温度40℃的恒温箱中过夜。 4.根据权利要求1所述的马尾松树脂道石蜡切片的制备方法，其特征在于：所述步骤四为：将步骤三中的样品放置在60℃恒温箱中，并分4次换样品中的纯石蜡溶液，第一次换的时间间隔为4 h，第二次、第三次、第四次纯石蜡溶液间隔时间为2 h，在最后一次换石蜡溶液的样品中间隔两小时后，将样品从石蜡溶液中取出并进行包埋。 5.根据权利要求1所述的马尾松树脂道石蜡切片的制备方法，其特征在于：所述步骤五为：将步骤四所得的蜡块修整为正梯形后，放置在切片机上进行切片，切片厚度为8 μm，将切好的蜡带轻放到涂有粘贴液的载玻片上，然后将载玻片放置40℃烘片机上烘40 min后，最后将含有蜡带的载玻片放入40℃恒温箱直到蜡带展开。 6.根据权利要求1所述的马尾松树脂道石蜡切片的制备方法，其特征在于：所述步骤六为：将步骤五所得的烘干切片放入二甲苯溶液30-50 min，取出后再放入新的二甲苯溶液30min脱蜡，之后将切片依次放入体积比1:1的二甲苯和100％乙醇混合溶液、100％乙醇溶液、100％乙醇溶液、95％乙醇溶液、85％乙醇溶液、70％乙醇溶液、50％乙醇溶液中，间隔时间均为3 min，最后将切片放入1％番红溶液中染色，染色时间大于12 h。 7.根据权利要求1所述的马尾松树脂道石蜡切片的制备方法，其特征在于：所述步骤七为：将步骤六中染色后的切片，依次放入50％乙醇溶液、70％乙醇溶液、85％乙醇溶液、95％乙醇溶液、1％固绿溶液、95％乙醇溶液、100％乙醇溶液、100％乙醇溶液、体积比1:1的二甲苯和100％乙醇混合溶液、二甲苯溶液、二甲苯溶液中，切片浸泡在50％乙醇溶液、1％固绿溶液中时间均为10-20 s，其他溶液的间隔时间均为2 min，最后将浸泡在二甲苯溶液中的切片取出，并在载玻片上滴1滴中性树胶，由同一侧轻放盖玻片，将封好的片放置常温下晾干，即为永久切片。 8.根据权利要求2所述的马尾松树脂道石蜡切片的制备方法，其特征在于：所述步骤一中的FAA 固定液为体积比为5：5：90的甲醛、乙酸和70%乙醇的混合液。 9.根据权利要求5所述的马尾松树脂道石蜡切片的制备方法，其特征在于：所述步骤五中的粘贴液包括甲液与乙液，甲液组分为：1.5 g明胶、100 ml蒸馏水、15 ml甘油和2 g苯酚；乙液组分为：4 ml甲醛和100 ml蒸馏水，使用时，分别先滴1滴甲液再滴1滴乙液于载玻片上，并用牙签将载玻片上的混合液均匀展开，以能保证蜡带粘贴的牢固。
所属类别：	发明专利