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原文传递一种人体脂肪组织的石蜡切片的制备方法

专利名称：	一种人体脂肪组织的石蜡切片的制备方法
摘要：	本发明涉及石蜡切片的技术领域，具体涉及一种人体脂肪组织的石蜡切片的制备方法。一种人体脂肪组织的石蜡切片的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：取样、固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、贴片、脱蜡、水化、染色、去浮色和封片。一种人体脂肪组织的石蜡切片的制备方法，此制备方法制备出的人体脂肪石蜡切片结构完整、清晰、便于观察。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	江苏护理职业学院
发明人：	秦双立;张晓蕾;王士珍
专利状态：	有效
申请日期：	2019-09-12T00:00:00+0800
发布日期：	2019-12-31T00:00:00+0800
申请号：	CN201910865543.2
公开号：	CN110631881A
代理机构：	北京鱼爪知识产权代理有限公司
代理人：	曹治丽
分类号：	G01N1/30(2006.01);G;G01;G01N;G01N1
申请人地址：	223005 江苏省淮安市高教园区科技路9号
主权项：	1.一种人体脂肪组织的石蜡切片的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1：固定：将离体人体脂肪组织用卡诺氏固定液固定；步骤2：脱水：将固定后的人体脂肪组织用乙醇进行脱水处理；步骤3：透明：先将脱水后的人体脂肪组织用无水乙醇与透明剂的混合液浸泡1.5-1.8h，再用纯透明剂浸泡1.5-1.8h；步骤4：浸蜡：先将浸蜡后的人体脂肪组织用液体石蜡和透明剂的混合液进行预浸蜡，经过预浸蜡后的人体脂肪组织用液体石蜡浸泡，得到浸蜡人体脂肪组织；步骤5：包埋：将浸蜡人体脂肪组织倒入包埋盒中进行冷却包埋，得到包埋人体脂肪组织蜡块，再将包埋人体脂肪组织蜡块进行修整；步骤6：切片：将修整好的包埋人体脂肪组织蜡块用轮转式切片机切成人体脂肪组织蜡片带；步骤7：贴片：将载玻片用无菌水冲洗，在烘干，在烘干上的载玻片上涂抹粘片剂，同时在载玻片上滴5-7滴无菌水，将人体脂肪组织蜡片带断开成人体脂肪组织蜡片，再将人体脂肪组织蜡片放置于载玻片上，将人体脂肪组织蜡片展开，再用滤纸吸掉载玻片上的无菌水，再将载玻片烘干；步骤8：脱蜡：将将载玻片上的人体脂肪组织蜡片浸泡在二甲苯中进行脱蜡；步骤9：水化：先将脱蜡后的人体脂肪组织蜡片用二甲苯与无水乙醇的混合液浸,8-10min，所述二甲苯与无水乙醇的比例为1:1，再将人体脂肪组织蜡片依次用无水乙醇、体积浓度为95％的乙醇水溶液、体积浓度为95％的乙醇水溶液、体积浓度为90％的乙醇水溶液、体积浓度为80％的乙醇水溶液、体积浓度为70％的乙醇水溶液、体积浓度为60％的乙醇水溶液、体积浓度为50％的乙醇水溶液、体积浓度为30％的乙醇水溶液和蒸馏水依次浸泡150s-170s，得到水化后的人体脂肪组织蜡片；步骤10：染色：将水化后的人体脂肪组织蜡片先用质量浓度为4％的铁矾溶液浸泡，然后再用无菌水洗，经过无菌水洗后人体脂肪组织蜡片用番红溶液进行染色，再将用番红染色后的人体脂肪组织蜡片用浓度为75％的乙醇溶液中浸泡，在放入固绿溶液中进行染色；步骤11：去浮色：将染色后的人体脂肪组织蜡片依次放入体积浓度为90％的乙醇水溶液、体积浓度为95％的乙醇水溶液和无水乙醇中去浮色；步骤12：封片：将去浮色后的人体脂肪组织蜡片用二甲苯浸湿，再向浸湿的人体脂肪组织蜡片滴入中性树胶，再盖片，再将载玻片烘烤得到人体脂肪石蜡切片。 2.根据权利要求1所述的人体脂肪组织的石蜡切片的制备方法，其特征在于：所述步骤1中的人体脂肪组织用卡诺氏固定液固定20min-40min。 3.根据权利要求1所述的人体脂肪组织的石蜡切片的制备方法，其特征在于：所述步骤2中脱水具体为：先将固定后的人体脂肪组织用体积浓度为30％的乙醇冲洗两次，再依次采用体积浓度为50％的乙醇水溶液、体积浓度为60％的乙醇水溶液、体积浓度为70％的乙醇水溶液、体积浓度为80％的乙醇水溶液、体积浓度为90％的乙醇水溶液和无水乙醇浸泡，所述人体脂肪组织在体积浓度为50％的乙醇水溶液、体积浓度为60％的乙醇水溶液、体积浓度为70％的乙醇水溶液、体积浓度为80％的乙醇水溶液和体积浓度为90％的乙醇水溶液中均浸泡2-2.5h，所述人体脂肪组织最后在无水乙醇中浸泡1-1.5h。 4.根据权利要求1所述的人体脂肪组织的石蜡切片的制备方法，其特征在于：所述步骤3中采用的无水乙醇与透明剂的混合液中无水乙醇与透明剂的体积比为1:1。 5.根据权利要求1所述的人体脂肪组织的石蜡切片的制备方法，其特征在于：所述步骤4中液体石蜡和透明剂的混合液中液体石蜡与透明剂的体积比为1:1，所述预浸蜡过程中将透明后人体脂肪组织在液体石蜡和透明剂的混合液中浸泡41-43h，所述混合液的温度保持在65-68℃；将所述预浸蜡后的人体脂肪组织用液体石蜡浸泡3-4h，所述液体石蜡的温度保持在63-66℃。 6.根据权利要求1所述的人体脂肪组织的石蜡切片的制备方法，其特征在于：所述步骤7中采用的粘片剂为明胶甘油液。 7.根据权利要求1所述的人体脂肪组织的石蜡切片的制备方法，其特征在于：所述步骤8脱蜡的具体操作为：将载玻片上的人体脂肪组织蜡片浸泡在纯的二甲苯溶液中进行第一次脱蜡1h，再更换二甲苯溶液，将第一次脱蜡后的人体脂肪组织蜡片放入新的二甲苯溶液进行第二次脱蜡45min，再次更换二甲苯溶液，将第二次脱蜡后的人体脂肪组织蜡片放入新的二甲苯溶液进行第三次脱蜡30min。 8.根据权利要求1所述的人体脂肪组织的石蜡切片的制备方法，其特征在于：所述步骤10中先将水化后的人体脂肪组织蜡片先用质量浓度为4％的铁矾溶液浸泡7-9min，然后再用无菌水洗两次，将经过无菌水洗后人体脂肪组织蜡片用番红溶液进行染色13-14h，再将用番红染色后的人体脂肪组织蜡片用浓度为75％的乙醇溶液中浸,3-5s，所述75％的乙醇溶液中滴入醋酸，所述乙醇溶液与醋酸的体积比为1200-1300:1，再将人体脂肪组织蜡片放入固绿溶液中染色3-5s。 9.根据权利要求1所述的人体脂肪组织的石蜡切片的制备方法，其特征在于：所述步骤11中将染色后的人体脂肪组织蜡片依次放入体积浓度为90％的乙醇水溶液、体积浓度为95％的乙醇水溶液和无水乙醇中10-12s去浮色。 10.根据权利要求1所述的人体脂肪组织的石蜡切片的制备方法，其特征在于：所述步骤12中中性树胶的使用量为15～18μL/片。
所属类别：	发明专利