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原文传递鱼体内磺胺类药物的高分辨质谱筛查方法及其与蛋白大分子相互作用的分析方法

专利名称：	鱼体内磺胺类药物的高分辨质谱筛查方法及其与蛋白大分子相互作用的分析方法
摘要：	本发明鱼体内磺胺类药物的高分辨质谱筛查方法及其与蛋白大分子相互作用的分析方法，筛查方法通过孵育得到待测样液，采用超高效液相色谱‑四极杆飞行时间质谱，用优化后的色谱质谱条件对BSA标准溶液与待测样液进行检测，通过计算得到部分磺胺类药物与鱼体内蛋白大分子存在相互作用；分析方法通过优化提取溶液的成分、除水剂和吸附剂的种类、用量以最佳效率除去样品中的杂质，将磺胺类药物提取到有机相中，消除了蛋白大分子与磺胺类药物之间的相互作用，采用优化后的色谱质谱条件能对磺胺类药物A和BSA的含量进行定量检测，进而提高鱼类样品中磺胺类药物的回收率，达到准确定量的目的，为监管鱼类食品质量安全具有重要意义。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	陕西;61
申请人：	陕西科技大学
发明人：	贾玮;张焱茜
专利状态：	有效
申请日期：	2019-04-15T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-12T00:00:00+0800
申请号：	CN201910299085.0
公开号：	CN110007023A
代理机构：	西安通大专利代理有限责任公司
代理人：	徐文权
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	710021 陕西省西安市未央区大学园1号
主权项：	1.鱼体内磺胺类药物与蛋白大分子相互作用的分析方法，其特征在于，包括以下步骤，步骤1，将BSA标准溶液和磺胺类药物标准溶液A加入乙酸铵缓冲液A中混合均匀得到混合体系A；其中BSA标准溶液与磺胺类药物标准溶液A的浓度比为1:3；BSA标准溶液的溶剂为乙酸铵缓冲液B，磺胺类药物标准溶液A的溶剂为甲醇；所述乙酸铵缓冲液A和乙酸铵缓冲液B的浓度均为0.01mol/L，并调节乙酸铵缓冲液A和乙酸铵缓冲液B的pH均至7.4；步骤2，将混合体系A在37℃下孵育30～120min后得到待测样液；步骤3，采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱，在正离子模式下对BSA标准溶液与待测样液进行检测；检测参数包括色谱参数和质谱参数，所述色谱参数为：流动相为乙腈水溶液，其中水和乙腈的体积比为95:5；进样量为2～10μL；进样速度为0.05～0.2mL/min；所述质谱参数为：毛细管电压4.0kV，喷嘴电压1.0kV，干燥气温度150.0℃，干燥气流量11.0L/min，雾化气压力20.0psi，鞘气温度180.0℃，鞘气流量9.0L/min，碎裂电压150v，雾化气、干燥气和鞘气为氮气；步骤4，检测BSA与磺胺类药物结合前后的质量数位移，计算BSA与磺胺类药物结合前后同一带电数下复合物及BSA的质荷比差值，若质荷比差值和带电荷数的乘积S1与磺胺类药物A的质荷比M1满足如下关系时，则可断定BSA与磺胺类药物存在相互作用； 2.根据权利要求1所述的鱼体内磺胺类药物与蛋白大分子相互作用的分析方法，其特征在于，步骤1采用氨水调节乙酸铵缓冲液A和乙酸铵缓冲液B的pH均至7.4。 3.根据权利要求1所述的鱼体内磺胺类药物与蛋白大分子相互作用的分析方法，其特征在于，步骤1通过震荡与涡旋将加入乙酸铵缓冲液中的BSA标准溶液和磺胺类药物标准溶液A混合均匀。 4.根据权利要求1所述的鱼体内磺胺类药物与蛋白大分子相互作用的分析方法，其特征在于，步骤1中量取500μL浓度为100μmol/L的BSA标准溶液，加入75μL浓度为2mmol/L的磺胺类药物标准溶液A，用乙酸铵缓冲液定容至10mL，混合均匀得到混合体系A。 5.根据权利要求1所述的鱼体内磺胺类药物与蛋白大分子相互作用的分析方法，其特征在于，所述的磺胺类药物为磺胺甲噻二唑或磺胺多辛。 6.鱼体内磺胺类药物的高分辨质谱筛查方法，其特征在于，包括以下步骤，步骤1，称取鱼样品1.0～5g，加入BSA和磺胺类药物A，用乙酸铵缓冲液C定容至1mL，混合均匀得到混合体系B；其中，BSA的浓度为2～5μmol/L，BSA与磺胺类药物B的浓度比为1:3，乙酸铵缓冲液C的浓度为0.01mol/L，并调节乙酸铵缓冲液C的pH至7.4；；步骤2，将混合体系B在37℃下孵育30～120min得到混合体系C，向混合体系C中加入甲醇2.0～3.0mL，用经乙酸酸化的乙腈水溶液定容至15mL，混合均匀得到混合体系D，其中乙酸酸化的乙腈水溶液中，乙腈与水的体积比为84:16，乙酸体积占溶液体积的1％；步骤3，向混合体系D中加入无水硫酸镁3.0～6.0g、乙酸钠1.9g和氯化钠1.5g，混合均匀后离心得到上清液A，向上清液A中加入C18 0.4g、PSA 0.4g和无水硫酸镁0.1g～0.5g，混合均匀后离心得到上清液B；步骤4，将上清液B经0.22μm滤膜过滤，将得到的样液分为两份，其中一份样液稀释100倍对磺胺类药物A进行定量检测，另一份样液直接检测BSA的含量；其中，采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱进行检测，磺胺类药物A的检测包括色谱参数和质谱参数，所述色谱参数为：采用正离子模式，色谱柱：Thermo Hypersil GOLD AQ柱，参数为100mm×4.6mm，5μm；柱温：35℃；流动相A为水、甲酸和甲酸铵的混合溶液，其中甲酸体积占混合溶液体积的0.2％，甲酸铵的浓度为4.0mmol/L；流动相B为甲醇、甲酸和甲酸铵的混合溶液，其中甲酸体积占混合溶液体积的0.2％，甲酸铵的浓度为4.0mmol/L；梯度洗脱程序为：0.0～1.0min内，流动相A的比例保持100％；1.0～7.0min内，流动相A的比例由100％线性减少至0％；7.0～15.0min内，流动相A的比例保持0％；15.0～17.0min内，流动相A的比例由0％线性增加至100％；17.0～25.0min内，流动相A的比例保持100％；流速：0.3mL/min；进样量：10.0μL；所述质谱参数为：采用电喷雾离子源，在正离子模式下进行检测；毛细管电压4.0kV，喷嘴电压1.0kV；干燥气温度280.0℃；干燥气流量13.00L/min；雾化气压力20.0psi；鞘气温度350.0℃；鞘气流量12.0L/min；采用氮气作为雾化气、干燥气和鞘气； BSA的检测包括色谱参数和质谱参数，所述色谱参数为：流动相为乙腈水溶液，其中水和乙腈的体积比为95:5；进样量为2～10μL；进样速度为0.05～0.2mL/min；所述质谱参数为：毛细管电压：4.0kV，喷嘴电压：1.0kV，干燥气温度150.0℃，干燥气流量11.0L/min，雾化气压力20.0psi，鞘气温度180.0℃，鞘气流量9.0L/min，碎裂电压：150v，雾化气、干燥气和鞘气为氮气。 7.根据权利要求6所述的鱼体内磺胺类药物的高分辨质谱筛查方法，其特征在于，步骤1、步骤2和步骤3均通过震荡和涡旋混合均匀。 8.根据权利要求6所述的鱼体内磺胺类药物的高分辨质谱筛查方法，其特征在于，步骤3的离心转速和离心时间均分别为6000～10000r/min和5～10min。 9.根据权利要求6所述的鱼体内磺胺类药物的高分辨质谱筛查方法，其特征在于，步骤1所述的鱼样品为均质后的样品。 10.根据权利要求6所述的鱼体内磺胺类药物的高分辨质谱筛查方法，其特征在于，其特征在于，所述的磺胺类药物为磺胺甲噻二唑或磺胺多辛。
所属类别：	发明专利