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原文传递一种人体尿液中多种有机酸的定量检测方法

专利名称：	一种人体尿液中多种有机酸的定量检测方法
摘要：	本发明涉及生化检测技术领域，具体涉及一种同步定量检测人体尿液中多种有机酸含量的方法。该检测方法首先将人体尿液与内标液混合，然后通过有机溶剂萃取的方式将目标有机酸提取纯化，随后用强阴离子交换柱纯化后采用液相色谱分离与质谱子母离子对检测联用的方法对目标有机酸进行同步定性和定量分析。萃取纯化步骤保证了尿液中目标有机酸的充分溶出，排除尿液中杂质的干扰，确保了检测结果的准确性和稳定性。该方法适用于人体尿液中结构类别多样的有机酸的同步批量检测，具有灵敏度高、精密度高、重复性好、检测速度快等优点。充分满足了临床检验的需要，具有较高的临床应用价值。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	四川;51
申请人：	成都益康谱科技有限公司
发明人：	邬智刚;朱文漓;叶尚宇
专利状态：	有效
申请日期：	2019-05-17T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-12T00:00:00+0800
申请号：	CN201910410353.1
公开号：	CN110007044A
分类号：	G01N30/88(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	610000 四川省成都市温江区永宁镇八一路北段18号1栋4单元301号
主权项：	1.一种人体尿液中多种有机酸的定量检测方法，其特征在于，所述检测方法包括如下步骤： 1)尿液与内标液混合后通过有机溶剂将目标有机酸萃取纯化，氮气吹干后溶于水中，然后用强阴离子交换柱纯化，有机溶剂洗脱后氮气吹干，溶于水中得到待测样本； 2)将上述待测样本通过液相色谱和质谱联用检测，同步对多种有机酸进行定性和定量的批量检测。 2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于所述步骤中萃取所用的有机溶剂包括乙酸乙酯、正己烷、二氯甲烷、三氯甲烷和叔丁基甲醚，优选的有机萃取溶剂为乙酸乙酯。 3.根据权利要求1所述的检测方法，所述步骤中强阴离子交换柱的洗脱溶剂为甲醇或丙酮(加2％甲酸)。 4.根据权利要求1-3项任一项所述的检测方法，其特征在于，所述步骤具体包括以下步骤：步骤1)称取各种有机酸标准品，用甲醇溶解得到不同浓度的标准液；步骤2)称取内标样品定容为内标液，随后加入步骤1)中的标准液，超纯水定容后离心，取上清液作为待测标准液；步骤3)将步骤2)中得到的待测标准液和权利要求1中得到的待测样本通过液质联用检测，经过标准曲线计算得到尿液中有机酸的种类和含量。 5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述步骤3)中液质联用检测的液相色谱条件为：色谱柱为键合相色谱柱，进样量为5-50μL，流动相A为含1-10mmol/L的乙酸铵水溶液+0.1％-1％甲酸的纯水，流动相B为乙腈甲醇的混合溶液，乙腈与甲醇的质量比为9-1:1-9；流动相的流速为0.1-2.0mL/min；流动相的梯度(以体积百分比计)： 0-1min,A:30-100％,B:70-0％； 1.1-5min,A:10-60％,B:90-60％； 5.1-9min,A:0-50％,B:100-50％； 9.1-11min,A:50-100％,B:50-0％； 11.1min,A:30-100％,B:70-0％。 6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述键合相色谱柱为C18或C8等键合相色谱柱，规格为50-150mm×2.1-4.6mm,1.8-5μm。 7.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述步骤3)中液质联用检测的质谱条件为：采用电喷雾(ESI)离子源，负离子MRM扫描方式，雾化气流速为5-10L/min，气帘气流速为5-20L/min，离子源电压为-2000-4500V，离子源温度为200-400℃。 8.根据权利要求1-7任一项所述的检测方法，其特征在于，所述有机酸化合物包括人体尿液中代谢产生的主要有机酸产物；采用多反应监测的质谱扫描模式，目标物的离子对监测如下：乙二酸(m/z 145.2—83.1)、辛二酸(m/z 173.2—111.2)、乙基丙二酸(m/z131.1—87.1)、乳酸(m/z 89.1—43.1)、丙酮酸(m/z 87.1—43.1)、β-羟基丁酸(m/z103.1—59.1)、柠檬酸(m/z 191.1—87.1)、顺式乌头酸(m/z 173.1—85.1)、异柠檬酸(m/z191.1—73.1)、α-酮戊二酸(m/z 145.1—101.1)、α-酮异戊酸(m/z 115.1—115.1)、α-酮异己酸(m/z 129.2—129.2)、α-酮-β-甲基戊酸(m/z 129.2—129.2)、琥珀酸(m/z 117.1—73.0)、富马酸(m/z 115.1—71.0)、苹果酸(m/z 133.1—115.0)、羟甲基戊二酸(m/z117.1—59.0)、黄尿酸(m/z 204.2—160.1)、β-羟基异戊酸(m/z 117.1—73.1)和甲基丙二酸(m/z 117.1—73.1)；内标：D3-甲基丙二酸(m/z 120.1—73.1)、D3-乙基丙二酸(m/z134.1—87.1)、D4-柠檬酸(m/z 195.1—87.1)。
所属类别：	发明专利