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原文传递一种检测血液、尿液中多种蘑菇毒素的方法

专利名称：	一种检测血液、尿液中多种蘑菇毒素的方法
摘要：	本发明公开了一种检测血液、尿液中多种蘑菇毒素的方法。该方法通过对实验条件的优化，首次建立了超高效液相色谱‑质谱/质谱法测定中毒患者血液和尿液中α‑鹅膏毒肽、β‑鹅膏毒肽、γ‑鹅膏毒肽、二羟鬼笔毒肽、羧基二羟基鬼笔毒肽和羧基三羟基鬼笔毒肽含量的方法。为突发公共卫生事件的处置提供科学的检测方法。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	吉林;22
申请人：	刘思洁
发明人：	刘思洁;吴永宁;方赤光;崔勇;石矛;马杰
专利状态：	有效
申请日期：	2019-01-30T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-03T00:00:00+0800
申请号：	CN201910091213.2
公开号：	CN109709233A
代理机构：	北京正理专利代理有限公司
代理人：	赵晓丹
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	130062 吉林省长春市景阳大路3145号
主权项：	1.一种检测血液、尿液中多种蘑菇毒素的方法，其特征在于，包括如下步骤： 1)样品前处理称取血液或尿液样品，并进行前处理，得待测定的样品，其中，前处理的方法包括：将血液样品离心，提取血浆，按照1mL：1-3mL的比例加入含0.5-1％(V/V)乙酸的乙腈溶液，涡旋震荡、离心；取上清液用氮气吹干、定容，涡混震荡、过滤，得待测定的血液样品；将尿液过滤后，得待测定的尿液样品； 2)测定 a制备标准使用液将α-鹅膏毒肽、β-鹅膏毒肽、γ-鹅膏毒肽、二羟鬼笔毒肽、羧基二羟基鬼笔毒肽和羧基三羟基鬼笔毒肽标准品配制成标准使用液； b绘制标准曲线吸取上述标准使用液适量，用空白样品基质配成系列浓度的标准工作液，经UPLC-MS/MS分析，以定量离子峰面积为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准工作曲线，得到标准工作曲线回归方程； c色谱条件：色谱柱为C18色谱柱，流动相为2mmol/L的乙酸铵水溶液A和2mmol/L的乙酸铵乙腈溶液B，流速为0.3mL/min，采用梯度洗脱方式，柱温40℃，其中，梯度洗脱的程序为： d质谱条件离子源为电喷雾离子源，采用正离子模式，多离子反应监测，毛细管电压：2.9kV；离子源温度：150℃；脱溶剂气温度：500℃；脱溶剂气流量：800L/h；锥孔反吹气流量：150L/h； e定量和/或定性测定。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中，过滤时采用0.22μm的滤膜。 3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中，定容采用的溶液为：质量比为70-60:30-40的2mmol/L的乙酸铵水溶液和2mmol/L的乙酸铵乙腈溶液。 4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)b中，空白样品基质为不含有所测的蘑菇毒素的经上述步骤1)处理后所得的样品，其中，当待测样品为血液时，该空白样品基质为血浆，此时，还包括向血浆中加入含0.5-1％(V/V)乙酸的乙腈溶液的步骤。 5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)a中，制备标准使用液的方法具体包括：配制标准储备液：分别配制浓度为0.100mg/mL的α-鹅膏毒肽、β-鹅膏毒肽、γ-鹅膏毒肽、二羟鬼笔毒肽、羧基二羟基鬼笔毒肽和羧基三羟基鬼笔毒肽的标准储备溶液；配制混合标准中间液：将上述α-鹅膏毒肽、β-鹅膏毒肽、γ-鹅膏毒肽、二羟鬼笔毒肽、羧基二羟基鬼笔毒肽和羧基三羟基鬼笔毒肽的标准储备溶液混合并定容，配制得到α-鹅膏毒肽、β-鹅膏毒肽、γ-鹅膏毒肽、二羟鬼笔毒肽、羧基二羟基鬼笔毒肽和羧基三羟基鬼笔毒肽浓度均为10μg/mL的混合液，即为混合标准中间溶液；配制标准使用液：稀释上述配制得到的混合标准中间液，配制得到α-鹅膏毒肽、β-鹅膏毒肽、γ-鹅膏毒肽、二羟鬼笔毒肽、羧基二羟基鬼笔毒肽和羧基三羟基鬼笔毒肽浓度均为1μg/mL的混合液，即为标准使用液。 6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)e中，所述定量测定具体包括：将步骤1)得到的待测定的样品注入UPLC-MS/MS进行测定，测得样液中目标化合物的色谱峰面积，根据标准工作曲线，计算样品溶液中α-鹅膏毒肽、β-鹅膏毒肽、γ-鹅膏毒肽、二羟鬼笔毒肽、羧基二羟基鬼笔毒肽和羧基三羟基鬼笔毒肽的浓度，根据公式计算出样品中α-鹅膏毒肽、β-鹅膏毒肽、γ-鹅膏毒肽、二羟鬼笔毒肽、羧基二羟基鬼笔毒肽和羧基三羟基鬼笔毒肽的含量。 7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)e中，所述定性测定具体包括：检测步骤1)得到的待测定的样品中的目标化合物，以保留时间和特征离子与定量离子所对应的色谱峰面积相对丰度进行定性。
所属类别：	发明专利