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原文传递一种多指标联检化学发光试剂盒及其制备方法和应用

专利名称：	一种多指标联检化学发光试剂盒及其制备方法和应用
摘要：	本发明公开了基于量子点标记酶形成量子点‑酶复合物的多指标联检化学发光免疫分析法。本发明基于量子点标记酶形成量子点‑酶复合物的多指标联检化学发光免疫分析法，在酶表面或距酶5‑10 nm的聚合物层表面分别标记不同粒径或种类的量子点，形成不同的量子点‑酶复合物，利用不同粒径或种类量子点的吸收光谱与酶催化其发光底物所产生的发射光谱充分重叠且量子点具有较大斯托克斯位移的特点，可以高效地将酶催化底物产生的400‑600 nm波长的发射光转化为波长在500‑750 nm之间的发射光，并在不同滤光片的作用下进行检测，实现了化学发光平台上以少量样本进行快速高效的多指标联检。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	南京迪格诺斯生物技术有限公司
发明人：	金晶;王西龙;张誉严
专利状态：	有效
申请日期：	2019-04-01T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-12T00:00:00+0800
申请号：	CN201910255947.X
公开号：	CN110007073A
代理机构：	南京瑞弘专利商标事务所(普通合伙)
代理人：	吴旭
分类号：	G01N33/535(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	210000 江苏省南京市经济技术开发区红枫科技园A6栋三层
主权项：	1.一种化学发光免疫分析试剂盒，其特征在于，包括不同的量子点-酶-标记分子复合物、直接或间接包被了不同捕获分子的固相载体和化学发光底物液，其中：将不同的量子点连接到酶表面形成不同的量子点-酶复合物或将不同的量子点连接到包覆于酶表面的聚合物层表面形成不同的量子点-酶复合物，标记分子连接到不同的量子点-酶复合物上形成不同的量子点-酶-标记分子复合物；所述标记分子能够与待测样本中的目标分析物特异性结合，所述捕获分子能够与标记分子配对，并且能够与待测样本中的目标分析物特异性结合；或所述捕获分子能够与待测样本中的目标分析物相结合，所述捕获分子能够与标记分子特异性结合。 2.根据权利要求1所述的化学发光免疫分析试剂盒，其特征在于：所述量子点包括一元量子点、二元量子点、三元量子点中的任意一种或任意几种纳米粒子的组合，或由上述任意一种量子点为核、二氧化硅为壳的核-壳型纳米复合粒子；所述量子点的粒径大小为1-100nm。 3.根据权利要求1所述的化学发光免疫分析试剂盒，其特征在于：所述酶包括辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶在内的和底物作用产生化学发光的物质；当采用辣根过氧化物酶时，底物为含有鲁米诺、异鲁米诺及其衍生物的溶液；当采用碱性磷酸酶时，底物为含有（金刚烷）-1，2-二氧乙烷或其衍生物的溶液。 4.根据权利要求1所述的化学发光免疫分析试剂盒，其特征在于：所述固相载体为免疫分析固相载体，所述固相载体为磁性微粒、酶标板、微孔板、金电极或尼龙；所述目标分析物为样本中的待测物；所述试剂盒还包括清洗液。 5.根据权利要求1所述的化学发光免疫分析试剂盒，其特征在于：在夹心法中，所述标记分子为与目标分析物特异性结合的抗体、或其活性片段、抗原或半抗原、或它们的活性片段，所述抗体或其活性片段为单克隆抗体、多克隆抗体、人源化抗体、嵌合抗体、Fab、(Fab’)2、抗体重链或抗体轻链；所述捕获分子为与标记分子配对，并且能够与目标分析物特异性结合的抗体、或其活性片段、抗原或半抗原、或它们的活性片段，所述抗体或其活性片段为单克隆抗体、多克隆抗体、人源化抗体、嵌合抗体、Fab、(Fab’)2、抗体重链或抗体轻链；或在竞争法中，所述标记分子为与目标分析物具有相同或相似结构、或相同或相似结合结构域的物质且能与捕获分子结合的物质，所述标记分子为小分子、半抗原、大分子或抗原；所述捕获分子为能与标记分子特异性结合的物质；或在竞争法中，所述捕获分子为与目标分析物具有相同或相似结构、或相同或相似结合结构域的物质且能与捕获分子结合的物质，所述捕获分子为小分子、半抗原、大分子或抗原；所述标记分子为能与捕获分子特异性结合的物质。 6.根据权利要求1-5任一所述的化学发光免疫分析试剂盒的制备方法，其特征在于：包含以下步骤： S1、制备量子点-酶复合物：使用无机材料制备量子点，并在量子点表面引入巯基、氨基或羧基，将量子点连接到酶表面，反应完成后对反应物通过层析或者电泳的方式进行纯化，除去没有连接上的量子点，得到纯净的量子点-酶复合物；或使用无机材料或有机分子包覆在酶表面形成聚合物层，纯化后将量子点连接到聚合物层表面，反应完成后再次对反应物通过层析或者电泳进行纯化，除去没有连接上的量子点，得到纯净的量子点-酶复合物； S2、制备量子点-酶-标记分子复合物：标记分子通过共价偶联方式或物理吸附方式连接到步骤S1中制备好的量子点-酶复合物，反应完成后对反应物进行纯化，得到纯净的量子点-酶-标记分子复合物；所述共价偶联方式为活化酶表面的巯基、氨基或羧基共价偶联至抗体的氨基； S3、制备直接或间接包被了捕获分子的固相载体：捕获分子通过共价偶联、结合对、物理吸附方式直接或间接包被到固相载体； S4、配制化学发光底物液：底物液为含有鲁米诺、异鲁米诺或其衍生物的溶液，或含有（金刚烷）-1，2-二氧乙烷或其衍生物的溶液。 7.根据权利要求1-5任一所述的化学发光免疫分析试剂盒应用于化学发光免疫分析法，其特征在于，包括夹心法：将带有配位基团的不同粒径或种类量子点分别标记在酶表面，或利用有机大分子或无机材料在酶表面形成聚合物层，将带有配位基团的不同粒径或种类量子点分别标记在聚合物层表面，形成不同的量子点-酶复合物；将能够与待测样本中的不同目标分析物特异性结合的相对应标记分子标记不同的量子点-酶复合物，形成不同的量子点-酶-标记分子复合物；将能够与待测样本中的不同目标分析物特异性结合的相对应捕获分子直接或间接包被在固相载体上；将不同的量子点-酶-标记分子复合物、固相载体以及待测样本混合，形成不同类型的量子点-酶-标记分子-目标分析物-捕获分子-固相载体复合物；经清洗分离出各类固相载体复合物的混合物，加入底物，经催化产生的相同波长的发射光被不同粒径或种类的量子点吸收后转化为不同波长的发射光，然后用化学发光测定仪测定不同目标分析物发光强度并带入预置的工作标准曲线计算转化为相对应分析物浓度。 8.根据权利要求7所述的化学发光免疫分析试剂盒应用于化学发光免疫分析法，其特征在于，所述夹心法中，量子点通过共价偶联方式或物理吸附方式连接到酶或其聚合物层表面；所述共价偶联方式为量子点表面修饰的巯基、氨基或羧基共价偶联至酶或聚合物层表面的氨基；所述夹心法中，捕获分子通过共价偶联、结合对、物理吸附方式直接或间接包被到固相载体；所述共价偶联方式为固相载体表面修饰的巯基、氨基或羧基共价偶联至捕获分子的氨基；所述结合对方式为生物素-链霉亲和素、生物素-亲和素、生物素-中性亲和素、凝集素与糖类、葡萄球菌A 蛋白与IgG、抗原与抗体、阳离子与阴离子、激素维生素和脂质与受体；用于形成聚合物层的有机大分子为牛血清白蛋白、酪蛋白或超支化聚合物；用于形成聚合物层的无机材料为聚氯乙烯、聚乙烯、聚丙烯、聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯、聚酰胺、聚甲醛、聚碳酸酯或由硼、硅、磷、硫、锗、砷、硒、锡、锑、碲、铋元素组成的聚合物。 9.根据权利要求1-5任一所述的化学发光免疫分析试剂盒应用于化学发光免疫分析法，其特征在于，包括两种竞争法：一种竞争法，将带有配位基团的不同粒径或种类量子点分别标记在酶表面，或利用有机大分子或无机材料在酶表面形成聚合物层，将带有配位基团的不同粒径或种类量子点分别标记在聚合物层表面，形成不同的量子点-酶复合物；将能够与待测样本中的不同目标分析物特异性结合的相对应标记分子标记不同的量子点-酶复合物，形成不同的量子点-酶-标记分子复合物；将能够与待测样本中的不同目标分析物竞争性结合相对应标记分子的各类捕获分子直接或间接包被在固相载体上；将不同的量子点-酶-标记分子复合物、固相载体以及待测样本混合，固相载体上的捕获分子与目标分析物竞争结合量子点-酶-标记分子复合物上的标记分子，形成不同类型的量子点-酶-标记分子-捕获分子-固相载体复合物或不同类型的量子点-酶-标记分子-目标分析物复合物；经清洗分离出各类固相载体复合物的混合物，加入底物，经催化产生的相同波长的发射光被不同粒径或种类的量子点吸收后转化为不同波长的发射光，然后用化学发光测定仪测定不同目标分析物发光强度并带入预置的工作标准曲线计算转化为相对应分析物浓度；另一种竞争法，将带有配位基团的不同粒径或种类量子点分别标记在酶表面，或利用有机大分子或无机材料在酶表面形成聚合物层，将带有配位基团的不同粒径或种类量子点分别标记在聚合物层表面，形成不同的量子点-酶复合物；将能够与待测样本中的不同目标分析物特异性结合的相对应捕获分子直接或间接包被在固相载体上；将能够与待测样本中的不同目标分析物竞争性结合相对应捕获分子的各类标记分子标记不同的量子点-酶复合物，形成不同的量子点-酶-标记分子复合物；将不同的量子点-酶-标记分子复合物、固相载体以及待测样本混合，量子点-酶-标记分子复合物上的标记分子与目标分析物竞争结合固相载体上的捕获分子，形成不同类型的量子点-酶-标记分子-捕获分子-固相载体复合物或固相载体-捕获分子-目标分析物复合物；经清洗分离出各类固相载体复合物的混合物，加入底物，经催化产生的相同波长的发射光被不同粒径或种类的量子点吸收后转化为不同波长的发射光，然后用化学发光测定仪测定不同目标分析物发光强度并带入预置的工作标准曲线计算转化为相对应分析物浓度。 10.根据权利要求9所述的化学发光免疫分析试剂盒应用于化学发光免疫分析法，其特征在于，所述竞争法中，捕获分子通过共价偶联、结合对、物理吸附方式直接或间接包被到固相载体；所述共价偶联方式为固相载体表面修饰的巯基、氨基或羧基共价偶联至捕获分子的氨基；所述结合对方式为生物素-链霉亲和素、生物素-亲和素、生物素-中性亲和素、凝集素与糖类、葡萄球菌A 蛋白与IgG、抗原与抗体、阳离子与阴离子、激素维生素和脂质与受体。
所属类别：	发明专利