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原文传递基于生物芯片的小分子多联检试剂盒及其制备方法、检测方法

专利名称：	基于生物芯片的小分子多联检试剂盒及其制备方法、检测方法
摘要：	本发明公开了基于生物芯片的小分子多联检试剂盒及其制备方法、检测方法。所述试剂盒中包含纳米金颗粒标记抗体、多联检芯片板和检测缓冲液；所述纳米金颗粒标记抗体包含被纳米金颗粒标记的氟苯尼考抗体和恩诺沙星抗体；所述多联检芯片板的若干个检测孔中同时包被有氟苯尼考抗原和恩诺沙星抗原；所述检测缓冲液由10～40mM磷酸缓冲液、0.05～0.5wt％的表面活性剂S17组成。本发明通过检测缓冲液及其与检测体系中的其他试剂的配合优化，可以利用一种检测缓冲液即能够同时检测氟苯尼考和恩诺沙星小分子，省时省力。
专利类型：	发明专利
申请人：	华中科技大学;湖北省食品质量安全监督检验研究院
发明人：	周陶鸿;黄丽萍;彭青枝;樊洪利;冀威昊;周翰霖;龚蕾;曾少奇;刘钢
专利状态：	有效
申请日期：	2022-08-25T00:00:00+0800
发布日期：	2023-01-20T00:00:00+0800
申请号：	CN202211029165.2
公开号：	CN115629206A
代理机构：	南京纵横知识产权代理有限公司
代理人：	徐瑛
分类号：	G01N33/53;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/53
申请人地址：	430070 湖北省武汉市洪山区珞喻路1037号;
主权项：	1.基于生物芯片的小分子多联检试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包含纳米金颗粒标记抗体、多联检芯片板和检测缓冲液；所述纳米金颗粒标记抗体包含被纳米金颗粒标记的氟苯尼考抗体和恩诺沙星抗体；所述多联检芯片板的若干个检测孔中同时包被有氟苯尼考抗原和恩诺沙星抗原；所述检测缓冲液由10～40mM磷酸缓冲液、0.05～0.5wt％的表面活性剂S17组成。 2.根据权利要求1所述的基于生物芯片的小分子多联检试剂盒，其特征在于，所述检测缓冲液由30mM磷酸缓冲液、0.05wt％的表面活性剂S17组成。 3.根据权利要求1所述的基于生物芯片的小分子多联检试剂盒，其特征在于，纳米金颗粒标记氟苯尼考抗体中氟苯尼考抗体：金颗粒的用量比为4μL：1.5mL，纳米金颗粒标记恩诺沙星抗体中恩诺沙星抗体：金颗粒的用量比为6μL：1.5mL。 4.根据权利要求1所述的基于生物芯片的小分子多联检试剂盒，其特征在于，还包括所述纳米金颗粒标记抗体的复溶缓冲液，所述复溶缓冲液包括：25mM pH9.0 tris溶液、0.05wt％聚乙二醇20000、0.4wt％蔗糖、3wt％海藻糖、2wt％甘露醇。 5.根据权利要求1所述的基于生物芯片的小分子多联检试剂盒，其特征在于，所述多联检芯片板的检测孔中还包被有其他小分子抗原，所述试剂盒中还含有与所述其他小分子抗原种类相对应的纳米金颗粒标记抗体。 6.权利要求1～5任一项所述的基于生物芯片的小分子多联检试剂盒的制备方法，其特征在于，包括：多联检芯片板的制备：将NanoSPR芯片与无底微孔板组装，获得纳米等离子共振传感检测板；所述检测板的每个检测孔依次用超纯水、无水乙醇进行清洗，氮气吹干；在若干个所述检测孔中加入氟苯尼考抗原和恩诺沙星抗原，用微孔板封口膜封闭后于4℃过夜，即获得所述多联检芯片板；纳米金颗粒标记抗体的制备：取两组相同体积的金颗粒溶液，向两组中分别加入tris溶液，分别混匀；再向第一组中加入氟苯尼考抗体，向第二组中加入恩诺沙星抗体，两组分别混匀，静置；两组再分别加入牛血清白蛋白混匀，静置，冷冻离心，去上清后取沉淀，即获得所述纳米金颗粒标记抗体；其中，第一组所述氟苯尼考抗体：金颗粒溶液的用量比为4μL：1.5mL，所述恩诺沙星抗体：金颗粒溶液的用量比为6μL：1.5mL。 7.根据权利要求6所述的基于生物芯片的小分子多联检试剂盒的制备方法，其特征在于，所述金颗粒标记抗体的制备过程中，向第一组、第二组中加入的tris溶液分别是pH＝9.0的4μL、6μL的0.1M tris溶液。 8.一种利用权利要求1～5任一项所述的基于生物芯片的小分子多联检试剂盒的检测方法，其特征在于，包括如下步骤： S1.标准曲线的制备：向所述多联检芯片板的检测孔中分别加入既含有氟苯尼考又含有恩诺沙星的不同浓度梯度溶液，并在波长500-700nm的范围内检测全光谱起点，然后在氟苯尼考抗原+恩诺沙星抗原的检测孔中加入纳米金颗粒标记的氟苯尼考抗体、恩诺沙星抗体，常温孵育10min后在波长500-700nm的范围内检测全光谱终点，由终点反应值减去起点反应值的方法处理数据后，可同时获得氟苯尼考的标准曲线和恩诺沙星的标准曲线； S2.样品前处理：取已经匀浆的鸡蛋试样加入乙腈，振荡混匀，加入氯化钠、无水硫酸钠，涡旋混合，离心5min，取上清液加入无水硫酸镁、N-丙基乙二胺，涡旋混合，离心5min，取上清液，吹干，加入所述检测缓冲液复溶，即为待测样品溶液； S3.样品检测：向所述多联检芯片板的检测孔中分别加入S2制备的样品，并在波长500-700nm的范围内检测全光谱起点，然后在氟苯尼考抗原+恩诺沙星抗原的检测孔中加入纳米金颗粒标记的氟苯尼考抗体、恩诺沙星抗体，常温孵育10min后在波长500-700nm的范围内检测全光谱终点，由终点反应值减去起点反应值的方法处理数据后，可获得样品检测信号，将样品检测信号代入S1的标准曲线公式中即可分别获得样品中氟苯尼考和恩诺沙星的含量。 9.根据权利要求8所述的基于生物芯片的小分子多联检试剂盒的检测方法，其特征在于，步骤S1中所述不同浓度梯度溶液为：氟苯尼考12.8ng/mL+恩诺沙星51.2ng/mL，氟苯尼考3.2ng/mL+恩诺沙星12.8ng/mL，氟苯尼考0.8ng/mL+恩诺沙星3.2ng/mL，氟苯尼考0.2ng/mL+恩诺沙星0.8ng/mL，氟苯尼考0.05ng/mL+恩诺沙星0.2ng/mL，氟苯尼考0ng/mL+恩诺沙星0ng/mL。 10.根据权利要求8所述的基于生物芯片的小分子多联检试剂盒的检测方法，其特征在于，步骤S1和步骤S3中加入的纳米金颗粒标记的氟苯尼考抗体、恩诺沙星抗体均是经过复溶缓冲液复溶后再加入的，所述复溶缓冲液包括：25mM pH＝9.0tris溶液、0.05wt％聚乙二醇20000、0.4wt％蔗糖、3wt％海藻糖、2wt％甘露醇。